Микроинъекция клеток медсестры Дрозофилы: метод внутриклеточной доставки
Published: April 30, 2023
Abstract
Источник: Катрина, I. E., и др. Визуализация и отслеживание эндогенных mRNAs в Live Drosophila меланогастер яичные камеры. J. Vis. Exp. (2019).
Из-за их большого размера и относительно простой организации, Drosophila клетки медсестры идеально подходят для живых исследований изображений клеток. Это видео описывает метод микроинъекции для доставки экзогенных соединений в клетки, и рекомендуемый протокол демонстрирует процедуру с флуоресцентными олигонуклеотидными зондами, называемыми молекулярными маяками (МБ), используемыми для визуализации эндогенных транскриптов мРНК.
Protocol
Этот протокол выдержки из Катрина и др.,визуализации и отслеживания эндогенных mRNAs в Live Drosophila меланогастер яйцо камер, J. Vis. Exp. (2019). 1. Дизайн MBs для живой визуализации клеток Сложите последовательность РНК цели, чтобы предсказать вторичную структу?…
Materials
| Spectrofluorometer | Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon | n/a | Photon counting spectrofluorometer |
| Quartz cuvette | Fireflysci (former Precision Cells Inc.) | 701MFL | |
| Dumont #5 tweezer | World Precision Instruments | 501985 | Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers |
| Halocarbon oil 700 | Sigma-Aldrich | H8898 | |
| Cover slip No.1 22 mm x 40 mm | VWR | 48393-048 | |
| Dissecting microscope | Leica MZ6 Leica Microsystems Inc. | n/a | |
| CO2 fruit fly anesthesia pad | Genesee Scienific | 59-114 | |
| Tris-HCL pH 7.5 | Sigma-Aldrich | 1185-53-1 | |
| Magnesium chloride | Sigma-Aldrich | 7791-18-6 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | 7647-14-5 | |
| Spinning disc confocal microscope | Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc. | n/a | |
| Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera | Hamamatsu | n/a | |
| PatchMan NP 2 Micromanipulator | Eppendorf Inc. | 920000037 | |
| FemtoJet Microinjector | Eppendorf Inc. | 920010504 | |
| Injection needle: Femtotips II | Eppendorf Inc. | 930000043 | |
| Loading tip: 20 μL Microloader | Eppendorf Inc. | 930001007 | |
| Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm | VWR | 48393-026; 48393-172 | |
| Dry yeast | Any grocery store | n/a | |
| Computer, > 20 GB RAM | Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing |
Citar este artigo
Microinjection of Drosophila Nurse Cells: A Method of Intracellular Delivery. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20109, doi: (2023).