Microinjeção de Células enfermeiras Drosophila: Um Método de Parto Intracelular

Published: April 30, 2023

Abstract

Fonte: Catrina, I. E., et al. Visualizando e Rastreando mRNAs endógenos em Câmaras de Ovos de Melanogaster Drosophila Ao Vivo. J. Vis. Exp. (2019).

Devido ao seu grande tamanho e organização relativamente simples, as células enfermeiras de Drosophila são idealmente adequadas para estudos de imagem de células vivas. Este vídeo descreve um método de microinjeção para a entrega de compostos exógenos nas células, e o protocolo em destaque demonstra o procedimento com sondas oligonucleotídeos fluorescentes chamadas de faróis moleculares (MBs) usados para visualizar transcrições de mRNA endógenos.

Protocol

Este protocolo é extraído de Catrina et al., Visualizando e Rastreando mRNAs endógenos em Câmaras de Ovos de Drosophila Live Drosophila, J. Vis. Exp. (2019). 1. Design de MBs para Imagens de Células Vivas Dobre a sequência de RNA de destino para prever a estrutura secundária do alvo mRNA usando o “formulário RNA” do servidor mfold (http://unafold.rna…

Materials

Spectrofluorometer Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon n/a Photon counting spectrofluorometer
Quartz cuvette Fireflysci (former Precision Cells Inc.) 701MFL
Dumont #5 tweezer World Precision Instruments 501985 Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers
Halocarbon oil 700 Sigma-Aldrich H8898
Cover slip No.1 22 mm x 40 mm VWR 48393-048
Dissecting microscope Leica MZ6 Leica Microsystems Inc. n/a
CO2 fruit fly anesthesia pad Genesee Scienific 59-114
Tris-HCL pH 7.5 Sigma-Aldrich 1185-53-1
Magnesium chloride Sigma-Aldrich 7791-18-6
NaCl Sigma-Aldrich 7647-14-5
Spinning disc confocal microscope Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc. n/a
Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera Hamamatsu n/a
PatchMan NP 2 Micromanipulator Eppendorf Inc. 920000037
FemtoJet Microinjector Eppendorf Inc. 920010504
Injection needle: Femtotips II Eppendorf Inc. 930000043
Loading tip: 20 μL Microloader Eppendorf Inc. 930001007
Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm VWR 48393-026; 48393-172
Dry yeast Any grocery store n/a
Computer, > 20 GB RAM Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing

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Citar este artigo
Microinjection of Drosophila Nurse Cells: A Method of Intracellular Delivery. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20109, doi: (2023).

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