Micro-injection van Drosophila Verpleegkundige Cellen: Een Methode van Intracellulaire Levering

Published: April 30, 2023

Abstract

Bron: Catrina, I. E., et al. Visualiseren en volgen van endogene mRNAs in Live Drosophila melanogaster Egg Chambers. J.Vis. Exp. (2019).

Vanwege hun grote omvang en relatief eenvoudige organisatie zijn drosophila-verpleegkundige cellen bij uitstek geschikt voor live celbeeldvormingsstudies. Deze video beschrijft een micro-injectiemethode voor de levering van exogene verbindingen in de cellen, en het aanbevolen protocol demonstreert de procedure met fluorescerende oligonucleotide-sondes genaamd moleculaire bakens (MB’s) die worden gebruikt om endogene mRNA-transcripties te visualiseren.

Protocol

Dit protocol is ontleend aan Catrina et al., Visualizing and Tracking Endogene mRNAs in Live Drosophila melanogaster Egg Chambers, J. Vis. Exp. (2019). 1. Ontwerp van MB’s voor Live Cell Imaging Vouw de doel-RNA-reeks om de secundaire structuur van het mRNA-doel te voorspellen met behulp van het “RNA-formulier” van de mfold-server (http://unafold.rna.albany….

Materials

Spectrofluorometer Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon n/a Photon counting spectrofluorometer
Quartz cuvette Fireflysci (former Precision Cells Inc.) 701MFL
Dumont #5 tweezer World Precision Instruments 501985 Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers
Halocarbon oil 700 Sigma-Aldrich H8898
Cover slip No.1 22 mm x 40 mm VWR 48393-048
Dissecting microscope Leica MZ6 Leica Microsystems Inc. n/a
CO2 fruit fly anesthesia pad Genesee Scienific 59-114
Tris-HCL pH 7.5 Sigma-Aldrich 1185-53-1
Magnesium chloride Sigma-Aldrich 7791-18-6
NaCl Sigma-Aldrich 7647-14-5
Spinning disc confocal microscope Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc. n/a
Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera Hamamatsu n/a
PatchMan NP 2 Micromanipulator Eppendorf Inc. 920000037
FemtoJet Microinjector Eppendorf Inc. 920010504
Injection needle: Femtotips II Eppendorf Inc. 930000043
Loading tip: 20 μL Microloader Eppendorf Inc. 930001007
Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm VWR 48393-026; 48393-172
Dry yeast Any grocery store n/a
Computer, > 20 GB RAM Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing

Play Video

Citar este artigo
Microinjection of Drosophila Nurse Cells: A Method of Intracellular Delivery. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20109, doi: (2023).

View Video