حقن العظام في وسادة الدهون الثديية: إنشاء سرطان الثدي في الفئران

وأجريت التجارب على الحيوانات وفقا للحكم والتوصية العامة لتشريع الإدارة الحيوانية التجريبية الصينية ووافقت عليها لجنة مؤسسة رعاية الحيوان واستخدامه التابعة للجامعة الطبية الرأسمالية (المرجع رقم 1999). AEEI-2014-052). أنثى Balb / ج الفئران الذين تتراوح أعمارهم بين 6 إلى 8 أسابيع استخدمت.

1. إعداد الخلايا والحيوانات

1. قبل يوم واحد من العملية، حلق الشعر حول الحلمات الرابعة لكشف منطقة التشغيل.
   1. استخدام يد واحدة لعقد الماوس بإحكام في الجزء الخلفي للتأكد من الماوس لن تتحرك بحرية، بدوره حتى الماوس لفضح بطنه للمشغل، ومن ثم استخدام يد أخرى لحلاقة الفراء حول الحلمات الرابعة مع ماكينة حلاقة الإلكترونية.
   2. وضع طبقة رقيقة من كريم إزالة الشعر حول الحلمات لمدة 30-60 ق، وتنظيف كريم بعيدا مع الماء المقطر، ومن ثم تجفيف الماوس مع ورقة ناعمة.
2. في يوم العملية، جمع خلايا سرطان الثدي مورين (4T1-luc2)، عد عدد الخلايا، وضبط كثافة الخلية إلى 2 × 10⁵ خلايا / مل في المالحة العازلة بالفوسفات (PBS) في أنابيب الطرد الدقيق العقيمة والاحتفاظ بها على الجليد. لكل فأر، يتم إعداد 1 ×^{10 4} خلايا/50 ميكرولتر في حقنة 1 مل.

2. حقن العظام

1. تخدير الفئران
   1. حث التخدير. وضع الفئران في حاوية شفافة مغلقة وبدوره على الغاز isoflurane 2٪ لتخدير الفئران لمدة 5 دقائق، حتى أنها جميعا الاستلقاء وتغفو.
   2. الحفاظ على التخدير. نقل الفئران من الحاوية إلى أقنعة التخدير الفردية، ووضع بعض مرهم الطبيب البيطري على عيونهم لتجنب الجفاف، والحفاظ على الفئران supinely مع الحلمات عرضة للمشغل، والسماح لهم الاستمرار في استنشاق غاز ايزوفلوران لبضع دقائق حتى يتم إجراء الحقن.
   3. تأكيد نجاح التخدير بسبب عدم وجود إصبع القدم قرصة الانسحاب منعكس.
   4. تطبيق مرهم العيون على عيون الفئران لمنع جفاف العين.
      ملاحظة: وفقا لحجم الحاوية وعدد أقنعة التخدير الفردية المتاحة ، يمكن تخدير مجموعة من الفئران معا وحقنها واحدا تلو الآخر تحت التخدير الفردي.
2. أداء الحقن
   1. استخدام يد واحدة لخيمة حتى الجلد حول الحلمة الرابعة مع ملاقط، لإعداد رفع "نفق" للمحقنة لمتابعة. استخدام اليد الأخرى لعقد حقنة مع الإبرة تحولت صعودا لدخول الجلد تحت الجلد في 5-10 ملم من الحلمة. ثم، اتبع "النفق" حتى تلميح إبرة يقترب من الحلمة، وتحريك بعناية تلميح إبرة تصل إلى لوحة الدهون الثديي حتى العين إبرة يأتي تحت طرف الحلمة، والتخلص من ملاقط، وحقن الخلايا ببطء.
   2. بدوره حول الإبرة قليلا والتراجع عن حقنة ببطء; استخدام مسحة القطن للضغط على الجرح إبرة لمدة 10 -20 ق للتأكد من عدم وجود تسرب السوائل.
   3. مراقبة الحلمة الرابعة لتأكيد حقنة ناجحة: واحد أبيض شفاف الكرة المسطحة مع الحلمة كما يمكن ملاحظة المركز(الشكل 1).
3. حافظ على تخدير الفئران لمدة دقيقة أخرى لتجنب السماح للفئران بالتعافي والتحرك بسرعة كبيرة ، مما سيؤدي إلى فتح جرح الحقن وتسرب الخلايا السرطانية.

الشكل 1: صور قبل وبعد الحقن التقويمي في وسادة الدهون الثديية من الفئران بالب / ج الإناث. تم إجراء العملية ، وتم التقاط الصور بينما كانت الفئران تحت تخدير isoflurane. A، قبل الحقن، B، بعد الحقن.