Focale modèle d'ischémie cérébrale par occlusion suture endovasculaire de l'artère cérébrale moyenne chez le rat

Modèle de rat MCAO Les préparatifs préchirurgical Une technique aseptique doit être utilisée pour toutes les procédures de survie chirurgicale. Désinfecter la surface de travail chirurgical avec désinfectant commercial et préparer stériles packs d'instruments chirurgicaux, des rideaux, de la gaze, des tampons, des sutures, et les lames de bistouri par autoclavage. Un masque chirurgical, bonnet de cheveux et gants stériles devraient être portés. Un sèche Germinator stérilisateur à billes est également utilisé pour stériliser les instruments chirurgicaux entre les procédures si chirurgies multiples chez le rat sera fait au cours d'une session. Préchauffer une couverture à chemise d'eau homéothermes et de lieu dans un tampon absorbant afin d'éviter l'hypothermie chez le rat pendant la chirurgie. Lieu spontanément rat hypertendu (ou souche de rats autre moyen du choix) dans une chambre d'induction et d'induire une anesthésie avec l'isoflurane à 5% (appareil d'anesthésie devrait être fixé à 1,0 L / min d'O 2 et 1,0 L / min N 2 O). Basse à 1-2% d'isoflurane pour maintenir l'anesthésie. Appliquer une pommade artificielle larmes aux yeux à la fois. Rasez la gorge et du cou gauche au-delà du site d'incision prospective utilisant tondeuses (Oster A5 avec # 10 lames). Appliquer à la Bétadine un tampon de gaze et de désinfecter la peau à partir du centre de la région chirurgicale, en spirale vers l'extérieur. Rincer avec un tampon de gaze stérile contenant de l'éthanol 70%, passant pad dans un schéma similaire. Répétez les deux étapes pour un total de trois cycles. Injecter 0,2 mL de bupivacaïne à 0,5% en sous-cutané le long du site d'incision prospective. Placez le rat en jersey stérile ou couvrir d'un drap stérile chirurgicale. Occlusion transitoire de MCA Sous un microscope opératoire, une incision médiane ventrale est effectuée et le fascia superficiel est disséqué. Sous l'aponévrose superficielle, il ya des tissus glandulaires de la gauche et trois muscles qui forment un triangle: le sternohyoïdien, qui se trouve sur la ligne médiane de la trachée; digastrique (facilement identifiable grâce à sa partie brillante tendineux blanc) et, enfin, le muscle sterno. Attention dissection fine et émoussée est réalisée au sein du triangle d'identifier l'artère carotide (exclusif dissection peut être préférée par certains pour minimiser les dommages tissulaires accidentelle). Les artères externe, interne et carotide commune (CEA, l'ICA, CCA) sont exposés. L'artère carotide est grande et visiblement impulsions. Le nerf vague est vu courre le long de la face latérale des deux communes et artères carotides internes et est fortement disséqué les artères carotides internes et les communes. Deux branches CEA sont ensuite disséqués fortement, la première branche rubrique dedans et la deuxième branche rubrique latéralement. Les deux branches sont cautérisées et coupé, ce qui permet une plus grande facilité à mobiliser les grands navires. Le CEA est maintenant disséqué plus rostral. L'os hyoïde peuvent être rencontrés, ce qui limitera l'ampleur de la dissection rostrale. L'artère carotide externe est lié hors de distal que possible avec une suture soie 6-0. Un autre de suture soie 6-0 est placé lâchement autour du CEA à proximité de la bifurcation avec l'ICA. Veillez à ne pas obstruer le vaisseau que la suture intraluminale à être utilisé pour l'occlusion sera passer par là à une étape ultérieure. Microchirurgie clips sont placés sur communs et artères carotides internes à proximité de la bifurcation. Une artériotomie partielle initiale est créée entre les deux liens de suture de soie sur l'artère carotide externe. Introduire un 2,2 -3,0 cm de longueur de suture de monofilament en nylon 4-0, avec un repli 2,0 cm à partir de son arrondi, siliconé pointe, dans la lumière vers le bas vers la CEA de l'ACC, où le clip de microchirurgie est situé. Ces sutures sont commercialement disponibles (Doccol Corp, Redlands, CA, USA). Couper la partie restante de la CEA (à l'emplacement de l'artériotomie partielle) pour libérer le moignon et la position de la souche en dessous de la bifurcation de la CEA et l'ICA, ce sera plus facile de permettre à la suture intraluminale de glisser dans l'ACI. Serrer la suture de soie autour du moignon CEA pour sécuriser la suture en nylon intraluminale et prévenir les saignements, puis retirez le clip microvasculaire de l'ICA. Ouvrez le clip avant de le sortir pour vérifier les saignements. Continuer à faire progresser la suture en nylon de la CEA à l'ICA lumière de l'artère cérébrale moyenne (MCA). Cette longueur est généralement de 18-20 mm et c'est la raison pour placer un coude dans la suture avant l'insertion. Après une durée variable de suture en nylon est inséré, la résistance peut se faire sentir. Si cela se produit avec beaucoup de la suture en nylon encore présent en dehors de la cuve, il indique que la suture est susceptible d'entrer l'artère ptérygo (voir note ci-dessous). Retirez-vous et la courbe de la suture légèrement pour continuer le long de l'ICA, qui se déroulera plus en dedans. De plus, la dissection de l'origine de l'APP peut être fait pour mieux visualiser le chemindu filament intraluminale. Continuez à insérer le fil de suture en nylon jusqu'à sentir une résistance pendant et après le poste de 2 cm plié. À ce stade, la suture intraluminale a bloqué l'origine de la MCA. MCA occlusion peut être confirmée par le suivi de la réduction du débit sanguin cérébral régional aide d'un débitmètre laser Doppler (voir tableau Matériaux pour une seule source d'équipement). Notez également que l'origine de l'artère ptérygo hors de l'ICA peut être directement liée au large, si on préfère, afin d'éviter une intubation accidentelle de ce navire avec la suture intraluminale. Démarrez le chronomètre et l'heure de début d'enregistrement d'occlusion. Retirez le microclip de la CCA. Fermer l'incision (derme, pannicule carnosus, les couches de tissu sous-cutané) rapidement avec suture de soie 3-0 (un modèle simple en continu faciliteront la réouverture de reperfusion) et placer soigneusement le rat dans une cage de récupération. Vérifier que le plancher de la cage autour du nez et la bouche sont libres de litière et la récupération du moniteur à partir d'anesthésie. Restauration de la circulation sanguine MCA (reperfusion) Peu avant la période d'occlusion doit se terminer, ré-anesthésier le rat, désinfecter le site d'incision avec de la Bétadine et de l'éthanol à 70% (3 cycles, comme avant) et de rouvrir l'incision en supprimant les sutures de clôture. Placer un microclip sur le CCA, comme avant. Retirer à mi-course de suture occlusion de l'ICA jusqu'à la fin de suture est visible à travers l'ICA. Ne PAS retirer complètement de la suture de l'ICA / CEA! Placer un microclip sur l'ICA dessus de l'extrémité de la suture intraluminale. Supprimer complètement la suture d'occlusion et attacher solidement la souche de la CEA. Terminer l'enregistrement de l'occlusion (début de reperfusion) du temps. Retirez le microclip de l'ICA. Retirez le microclip de la CCA. Humidifiez la région avec quelques gouttes d'une solution saline stérile et fermer les couches incision (derme, pannicule carnosus, tissu sous-cutané) avec 3-0 suture de soie en utilisant un modèle simple interrompu. Administrer 0,05 mg / kg de buprénorphine (ou d'autres analgésiques post-opératoires après vos directives institutionnelles) dans l'espace péritonéal. Injecter par voie intrapéritonéale 5cc de salines préchauffée. Cela fournira une hydratation pendant la phase de récupération. Surveiller le rétablissement de rat de l'anesthésie. Après que le rat a récupéré, le test de comportement pour l'indication de l'infarctus en tenant le rat par la queue et en observant si le rat peut se tourner vers les deux côtés. Curling d'un côté seulement est prévu. Échelles de notation simple peut être utilisé pour enregistrer initiales post-infarctus fonctionnement comportementaux (voir discussion). Injections supplémentaires de la buprénorphine (même dose que ci-dessus) doit être administrée tous les 6 à 8 heures pour 24 heures de soulagement de la douleur. Prolongez l'analgésie si l'animal montre des signes de malaise. Les résultats représentatifs Figure 1. L'occlusion de l'artère cérébrale moyenne par suture endovasculaire. Un schéma simplifié du système circulatoire crânienne du rat est montré avec une suture intraluminale siliconé occultant l'origine de la MCA. L'arthrose et les branches ST hors de la CEA gauche ont été ligaturés et d'une cravate de suture autour du moignon CEA détient la suture intraluminale en place. ACA, artère cérébrale antérieure; BA, basilaire artère; CCA, l'artère carotide commune; CEA, carotide externe artère; ICA, artère carotide interne; MCA, l'artère cérébrale moyenne; l'arthrose, l'artère occipitale; PCA, l'artère cérébrale postérieure; PComA, communicante postérieure artère; APP, l'artère ptérygo; ST, l'artère thyroïdienne supérieure. Figure adaptée de Sasaki et al. 4 et Lee 3. Figure 2. Représentant imagerie par résonance magnétique de coupes coronales du cerveau de rat 24 heures après MCAO transitoires 1 heure. Œdème cérébral qui accompagne l'ischémie focale est visualisée dans séquences pondérées en T2 IRM. La zone de l'infarctus apparaît hyperintenses (lumineux) sur les images T2. Modèles similaires d'infarctus peut être vu avec des techniques plus avancées telles que l'IRM de diffusion et de l'imagerie pondérée coefficient apparent de diffusion de cartographie 5. Figure 3. Représentant coupes coronales de cerveau de rat tachés avec TTC 24 heures après MCAO transitoires 1 heure. Coloration TTC révèle blanc (non coloré) infarci régions du cortex cérébral et du striatum chez le rat même que celui montré dans la figure 2. Notez que le schéma général de focale des lésions ischémiques est similaire à celle observée dans l'IRM en pondération T2, bien que la zone d'infarctus final déterminé histologiquement peut être légèrement plus petite que la lésion T2.