Focus cerebrale ischemie Model door Endovasculaire Suture Occlusie van de midden cerebrale slagader in de Rat

MCAO Rat Model Pre-operatieve Voorbereidingen Aseptische techniek moet worden gebruikt voor alle te overleven chirurgische procedures. Ontsmet de chirurgische werkvlak met commerciële ontsmettingsmiddel en voor te bereiden steriele chirurgische verpakkingen van instrumenten, gordijnen, gaas, wattenstaafjes, hechtingen, en scalpelmesjes de autoclaaf. Een chirurgisch masker, haar muts en steriele handschoenen worden gedragen. Een Germinator droge kraal sterilisator wordt ook gebruikt voor chirurgische instrumenten tussen de procedures opnieuw steriliseren als er meerdere rat operaties zullen worden uitgevoerd tijdens een sessie. Voorverwarmen een watermantel homeothermic deken en plaats onder een absorberend kussen om onderkoeling van de rat te voorkomen dat tijdens de operatie. Plaats spontaan hypertensieve rat (of een andere rat stam naar keuze) in een inductie-kamer en veroorzaken anesthesie met 5% isofluraan (anesthesie machine moet worden ingesteld op 1,0 L / min O 2 en 1,0 L / min N 2 O). Te verlagen tot 1-2% isofluraan anesthesie te onderhouden. Pas kunstmatige tranen zalf aan beide ogen. Scheer de keel en liet de nek gebied buiten de aspirant-incisie site met behulp van clippers (Oster A5 met # 10 blad). Betadine van toepassing op een gaasje en desinfecteer de huid vanaf het midden van de chirurgische regio, spiraalsgewijs naar buiten. Spoelen met steriel gaasje met 70% ethanol, het verplaatsen pad in een vergelijkbaar patroon. Herhaal beide stappen voor een totaal van drie cycli. Injecteer 0,2 ml van 0,5% bupivacaïne subcutaan langs de toekomstige incisie site. Plaats rat in steriele tricotsteek of bedekken met een steriel chirurgisch laken. Voorbijgaande verstopping van MCA Onder een operationele microscoop, is een ventrale middellijn incisie uitgevoerd en de oppervlakkige fascia wordt ontleed. Onder de oppervlakkige fascia, is er klierweefsel aan de linkerkant en drie spieren die een driehoek vormen: de sternohyoid, die ligt middellijn over de luchtpijp, de kauw (gemakkelijk te herkennen met zijn glanzend witte tendineuze deel), en ten slotte, de musculus sternocleidomastoideus spier. Zorgvuldige scherpe en stompe dissectie wordt uitgevoerd binnen de driehoek aan de halsslagader (exclusief stompe dissectie kan de voorkeur door sommigen gezien als toevallige weefsel schade te minimaliseren) te identificeren. De externe, interne, en de gemeenschappelijke halsslagaders (ECA, ICA, CCA) worden blootgesteld. De halsslagader is groot en zichtbaar pulsen. De nervus vagus wordt gezien coursing langs de laterale aspect van zowel de gemeenschappelijke en interne carotis slagaders en wordt scherp ontleed uit de gemeenschappelijke en de interne halsslagaders. Twee ECA takken worden dan scherp ontleed, de eerste tak rubriek mediaal en de tweede tak kop zijwaarts. Beide takken zijn dichtgeschroeid en gesneden, die zorgt voor meer gemak in het mobiliseren van de grotere schepen. De ECA is nu meer rostraal ontleed. Het tongbeen kunnen worden geconfronteerd en dit zal de omvang van de rostrale dissectie te beperken. De externe halsslagader wordt afgehecht zo distaal mogelijk met een 6-0 zijden hechtdraad. Nog een 6-0 zijden hechtdraad is losjes geplaatst rond de Europese Rekenkamer bij de splitsing met de ICA. Zorg ervoor dat u het schip af te sluiten als de intraluminale hechtingen te worden gebruikt voor de occlusie zal worden gaan door hier op een later stap. Microchirurgische clips worden geplaatst op gemeenschappelijke en interne halsslagaders de buurt van de bifurcatie. Een eerste gedeeltelijke arteriotomie wordt gecreëerd tussen de twee zijden hechtdraad banden op de externe halsslagader. Introduceer een 2,2 -3,0 cm lengte van 4-0 monofilament nylon hechtdraad, met een knik 2,0 cm uit de ronde, silicium-coating tip, in de ECA lumen naar beneden richting de CCA, waar de microchirurgische clip zich bevindt. Deze hechtingen zijn commercieel verkrijgbaar (Doccol Corp, Redlands, CA, USA). Snijd het resterende deel van de Rekenkamer (op de plaats van de partiële arteriotomie) om de stomp en de positie van de stomp onder de splitsing van de Rekenkamer en ICA vrij, dit zal gemakkelijker kan de intraluminale hechting te schuiven in de ICA. Draai de zijden hechtdraad rond de Europese Rekenkamer stomp aan de intraluminale nylon hechtdraad veilige en bloeden te voorkomen, en dan de microvasculaire clip van de ICA te verwijderen. Open langzaam de clip alvorens deze te verwijderen om te controleren op bloeden. Ga door het bevorderen van de nylon hechtdraad van de Rekenkamer om ICA lumen naar het midden cerebrale slagader (MCA). Deze lengte is meestal 18-20 mm en is de reden voor het plaatsen van een knik in de hechtdraad voorafgaand aan de insertie. Na een variabele lengte van nylon hechtdraad is geplaatst, kan weerstand worden gevoeld. Als dit gebeurt met veel van de nylon hechtdraad nog steeds aanwezig buiten het vat, betekent dit dat de hechtdraad waarschijnlijk is het pterygopalatine slagader binnenkomen (zie toelichting hieronder). Terugtrekken en de curve van de hechtdraad licht om verder te gaan langs de ICA, dat zal meer mediaal lopen. Daarnaast kan dissectie van de oorsprong van de PPA worden gedaan om beter te visualiseren het padvan de intraluminale gloeidraad. Ga verder naar de nylon hechtdraad insert totdat u weerstand voelt tijdens en na het 2 cm geknikte positie. Op dit punt heeft de intraluminale hechting blokkeerde de oorsprong van het MCA. MCA occlusie kan worden bevestigd door het toezicht op de vermindering van de regionale cerebrale doorbloeding met behulp van een laser Doppler flowmeter (zie ook Materiaal tabel voor een apparatuur bron). Merk ook op dat de oorsprong van de pterygopalatine slagader off van de ICA kan direct worden afgebonden, indien gewenst, om per ongeluk intubatie van dit schip met de intraluminale hechting te voorkomen. Start de timer en registreren occlusie starttijd. Haal de microclip van de CCA. Sluit de incisie (dermis, panniculus carnosus, onderhuids weefsel lagen) al snel met 3-0 zijden hechtdraad (een eenvoudige continue patroon zal vergemakkelijken heropening voor reperfusie) en voorzichtig de rat in een kooi herstel. Controleer of de kooi vloer rondom de neus en mond vrij zijn van strooisel en monitor herstel van anesthesie. Restauratie van MCA bloedstroom (reperfusie) Kort voor de occlusie periode moet het einde, opnieuw verdoven van de rat, ontsmet de incisie site met Betadine en 70% ethanol (3 cycli, zoals voorheen) en de heropening van de incisie door het verwijderen van de hechtingen sluiten. Plaats een microclip op het CCA, zoals voorheen. Trek de afsluitende hechtdraad voortijdig uit de ICA tot de hechting einde is zichtbaar door het ICA. NIET volledig te verwijderen van de hechtdraad uit de ICA / Rekenkamer! Plaats een microclip op het ICA boven het einde van de intraluminale hechtdraad. Volledig verwijderen van de afsluitende hechtdraad en strak afhechten van de Europese Rekenkamer stomp. Record einde van de occlusie (reperfusie start) tijd. Haal de microclip van de ICA. Haal de microclip van de CCA. Bevochtig de regio met enkele druppels steriele zoutoplossing en sluit de incisie lagen (dermis, panniculus carnosus, onderhuids weefsel) met 3-0 zijden hechtdraad met behulp van een eenvoudige onderbroken patroon. Dien 0,05 mg / kg buprenorfine (of een andere geschikte post-operatieve pijnstillende naar aanleiding van uw institutionele richtlijnen) in de peritoneale ruimte. Injecteer 5cc van de voorverwarmde zoutoplossing intraperitoneaal. Dit zal hydratatie tijdens de herstelfase. Monitor herstel van de rat van de anesthesie. Nadat de rat is hersteld, test voor gedragsverandering indicatie van infarct door houden van de rat bij de staart en het observeren van de vraag of de rat kan draaien naar beide kanten. Curling aan slechts een zijde wordt verwacht. Eenvoudig scoren schalen kunnen gebruikt worden om de eerste post-infarct gedragsverandering functioneren record (zie Discussie). Extra injecties van buprenorfine (dezelfde dosering als hierboven) moet worden toegediend om de 6 tot 8 uur voor 24 uur van pijnbestrijding. Uit te breiden analgesie als het dier vertoont tekenen van ongemak. Representatieve resultaten Figuur 1. Occlusie van de midden cerebrale slagader door endovasculaire hechtdraad. Een vereenvoudigd schema van het craniale bloedsomloop van de rat is getoond met een siliconen-coating intraluminale hechting afsluiter de oorsprong van het MCA. De OA-en ST-takken af ​​van de linker-Europese Rekenkamer zijn geligeerd en een hechtdraad band rond de Europese Rekenkamer stomp houdt de intraluminale hechting op zijn plaats. ACA, anterior cerebrale slagader, BA, basilaire slagader, CCA, gemeenschappelijke halsslagader, de Europese Rekenkamer, de externe halsslagader, ICA, interne halsslagader, MCA, midden cerebrale slagader, OA, achterhoofdsknobbel slagader, PCA, posterior cerebrale slagader, PComA, posterior communiceren slagader, PPA, pterygopalatine slagader, ST, superieure schildklier slagader. Figuur overgenomen uit Sasaki et al.. 4 en Lee 3. Figuur 2. Vertegenwoordiger van magnetische resonantie beeldvorming van coronale delen van de hersenen van de rat 24 uur na een uur van voorbijgaande aard MCAO. Hersenoedeem bij focale ischemie is gevisualiseerd in T2-gewogen MRI-beelden. Het infarct zone verschijnt hyperintense (helder) op T2 beelden. Vergelijkbare patronen infarct kan gezien worden met meer geavanceerde MRI-technieken zoals diffusie-gewogen beeldvorming en schijnbare diffusiecoëfficiënt in kaart brengen van 5. Figuur 3. Vertegenwoordiger coronale delen van hersenen van de rat gekleurd met TTC 24 uur na een uur van voorbijgaande aard MCAO. TTC vlekken onthult wit (ongekleurd) infarctgebied regio's van de cerebrale cortex en het striatum in dezelfde rat als die weergegeven in figuur 2. Merk op dat het algemene patroon van focale ischemische letsels is vergelijkbaar met die in de MRI T2-gewogen beelden, hoewel de uiteindelijke bepaald infarctgebied histologisch kan iets kleiner zijn dan de T2 laesie.