Summary

のテロメアG -オーバーハング構造の検討トリパノソーマ</em

Published: January 26, 2011
doi:

Summary

テロメアは染色体の安定化に不可欠であり、テロメアG -オーバーハング構造はテロメラーゼを介したテロメア維持に不可欠です。我々は最近ではテロメアG -オーバーハング構造を検出するための2つの方法を採用している<em>トリパノソーマ</emハイブリダイゼーションと説明するライゲーション媒介プライマー伸長、 – ゲルのネイティブである>、。

Abstract

テロメアG -オーバーハング構造は酵母、脊椎動物、およびトリパノソーマを含む多くの真核生物で同定されている。それ 、de novoテロメアDNA合成のためのテロメラーゼの基質として機能し、テロメアの維持のために重要である。T.トリパノソーマは牛で、人間とナガナ病における睡眠病を引き起こす原虫寄生虫です。一度感染哺乳動物宿主、T.トリパノソーマの細胞は、定期的に宿主の免疫攻撃を回避するために、その表面抗原を切り替えます。我々は最近、T.ことが実証されているトリパノソーマテロメアの構造は、T.ために重要な表面抗原の遺伝子発現の調節に重要な役割を果たしているトリパノソーマの病因。しかし、T.トリパノソーマテロメア構造が広範囲にこの特殊な構造の解析のための方法の制限のために研究されていない。我々は正常にネイティブゲル内ハイブリダイゼーションとテロメアG -オーバーハング構造とT.の塩基テロメア端末の決定のためのアダプターのライゲーション法の検討のためのライゲーションを介したプライマー伸長法を採用しているトリパノソーマの細胞。ここで、我々は詳細にプロトコルを説明し、それぞれ異なる長所と限界を比較します。

Protocol

1。 T.を検出ネイティブゲル内ハイブリダイゼーション3を使用してトリパノソーマテロメアG -オーバーハング原理(図1):ネイティブ条件下では、末端標識(CCCTAA)4(テルチ)オリゴプローブは唯一の一本鎖テロメアG -オーバーハング領域にハイブリダイズすることができる。ハイブリダイゼーションの強度は、オーバーハングの長さに比?…

Discussion

トリパノソーマはヒトの睡眠病を引き起こす。この病気は、放置すれば、必然的に致命的である。T.は哺乳動物宿主のトリパノソーマの細胞は、定期的に宿主の免疫攻撃7を回避するために抗原変異を起こす。それゆえにT.を排除することは非常に困難です感染かつてトリパノソーマの細胞が確立されます。我々は最近、テロメアがTの発現の調?…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

我々は、科学的な議論や洞察力の提案のために博士キャロリンの価格を感謝したいと思います。この作品は、NIHの助成金AI066095(:畢博リチウムPI)によってサポートされています。

Materials

Material Name Tipo Company Catalogue Number Comment
SeaKem LE Agarose   Lonza 50004  
Agarose Type VII (low melting agarose)   Sigma A4018  
Proteinase K, recombinant, PCR grade   Roche Diagnostic 03 115801001  
Exo I   NEB M0293  
Exo T   NEB M0265  
T7 exonuclease   NEB M0263  
T4 DNA polymerase   NEB M0203  
QIAquick nucleotide removal kit   Qiagen 28304  

Referências

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Citar este artigo
Sandhu, R., Li, B. Examination of the Telomere G-overhang Structure in Trypanosoma brucei. J. Vis. Exp. (47), e1959, doi:10.3791/1959 (2011).

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