Yeni bir floresan dopamin analogları kullanarak optik nörotransmisyon ölçmek anlamına gelir.
Sinir sistemi nöronlar arasındaki sinaptik vezikül füzyon sırasında nörotransmiter bülteni ile sinyalleri iletir. Nörotransmitter alımı ve doğrudan bireysel presinaptik terminallerden serbest gözlemlemek için, floresan yanlış nörotransmitterlerin sinaptik vezikül monoamin taşıyıcı yüzeylerde olarak tasarlanmıştır. Striatum görüntü dopamin serbest bırakmak için bu problar kullanarak, sinaptik plastisite ile ilgili çeşitli gözlemler yapmıştır. Biz uyaran ortalama serbest nörotransmitter sinaptik veziküllerin kesir uyaran frekansı bağımlı olduğu bulundu. Bu deneysel koşullar altında kinetik farklı bir "rezerv" sinaptik vezikül nüfus gözlenmemiştir. Presinaptik terminallerin bir frekans bağımlı heterojenite presinaptik seçim frekans bağımlı kodlama için bir mekanizma gösteren, D2 dopamin reseptörlerine parçası bağımlı ortaya çıktı.
Hui Zhang ve Niko G. Gubernator bu iş için eşit olarak katkıda bulundu.
Bu video, floresan dopamin analogları kullanarak optik nörotransmisyon görselleştirmek için bir yöntem ortaya koymaktadır. FFN511 FFNs ilk nesil biz geliştirdik. Bilim gösterildiği gibi sinaptik veziküller içine sitoplazma monoamin nörotransmitterler taşır ve özellikle korteks, striatum ve varsayılan katekolamin ve / veya serotonin terminal dopamin terminalleri etiketler nöronal veziküler monoamin taşıyıcı (VMAT2) (hedefleyerek tasarlanmış olmasına rağmen FFN511 nispeten hidrofobik olduğundan kağıt), uygun bir yükleme süresi özgüllük için kritik öneme sahiptir. Biz 40 dakika daha uzun kuluçka striatal dilimleri geniş nonspesifik boyanma neden olacaktır bulundu. Özgüllüğü ve sade bir dille, fonksiyonel sinaptik veziküller içinde FFN serbest bırakılması neden KCl yüksek bir konsantrasyon ile destaining tespit edilebilir. Az 15 dakika süreyle FFN511 dilim Pozlama terminallerde boya yetersiz yükleme nedeniyle zayıf floresan sinyal neden olur. Bu protokol, ekstrasellüler doku bağlı boya kaldırmak için 100μM ADVASEP-7. Bu adım gerekli değildir, ancak belirtilmezse, ACSF içinde arınma süresi uzamış olması gerekir. Özetle, seçtiğiniz hazırlanmasına bağlı olarak, en iyi etiketleme belirlemek için konsantrasyon ve yükleme süresini değiştirmek için ihtiyacınız olacak.
The authors have nothing to disclose.
D. Şemeş G. Harold & Leila Y. Vakfı ve Columbia Üniversitesi Fen ve Mühendislik Girişimleri Mathers teşekkürler.
D. Şemeş ve D. Sulzer Nörobilim Ödülü McKnight Teknolojik Yenilikler McKnight Vakfı teşekkür
D. Sulzer NIDA, NIMH ve Picower ve Parkinson Hastalığı Vakıflar teşekkürler.
H. Zhang sayesinde NARSAD.
RH Edwards, Michael J. Fox Vakfı, Ulusal Parkinson Vakfı, NIDA ve NIMH teşekkürler.
6-OHDA enjeksiyonları ve tavsiyeleri, yararlı tartışma, görüntüleme analiz programlama için Merek Siu Mark Sonders ve Jan Schmoranzer Robert Burke TIRF mikroskopi kurulum, teknik destek için teşekkür ederiz.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
FFN511 (8-(2-Amino-ethyl)-2,3,5,6-tetrahydro-1H,4H-11-oxa-3a-aza-benzo[de]anthracen-10-one) | Dalibor Sames’s laboratory at Columbia University | |||
ADVASEP-7 | CyDex, Overland Park, KS | AR-OA7-005 | ||
RC-27L Recording chamber | Warner Instrument | 64-0375 | ||
PELCO PrepEze 6-Well Holder | Ted Pella, Inc. | 36157-1 | For slice incubation | |
Master-8 pulse stimulator and Iso- Flex stimulus isolator | AMPI, Jerusalem, Israel |