个别细胞散为主细胞学标本的细胞块的制备

简介： 这是一个视频描述Shidham的细胞液基细胞学（LBC）使用HistoGelTM（Thermo Scientific的）（HG）的标本块制备方法。相对于其他随机方法，以下是本议定书的两个关键特性，准备从相对松散的细胞（1-5），单分散的hypocellular标本细胞块的。 该协议涉及的步骤集中沿平面平行的细胞块切割面的细胞。 它还包括一个AV标记（图1b），灯塔般的黑暗，以符合以下目的两个： 要可视化的水平，这些细胞都集中在。现在感兴趣的细胞与细胞块面积可以可视化的histotechnologist时，深色的灯塔是在切割过程中暴露。这种监控能力，防止切割的水平，大部分细胞或不切割样品细胞浓度最高水平太肤浅。 作为一个不同的幻灯片上串行细胞块段的定位参考点。这个参考点作为一盏明灯，帮助查找特定的细胞或细胞与上海化学工业区的方法（6,7）的坐标免疫模式的评价。 协议（图2） 样品制备。 转移剩余LBC宫颈细胞学标本平底玻璃试管（直径15mm x 45毫米）（图2.1至2.4）。玻璃管放入一个更大的塑料载体管（28 × 85毫米）和离心机。删除从承运人管玻璃底管，倒出上清液。 玻璃管，然后封顶（在下一步的加热水，以防止溢出），并放在一个较大的平底托盘塑料管托盘塑料管中的玻璃管，然后加盖，放置在离心机旋转杯，并没有固定的角杯，使细胞平底玻璃管垂直下降，并在1805纺G（3000 RPM的，转子半径17厘米）为5分钟（图2.5）。 然后取出管垂直离心机和删除，而不会干扰细胞的沉淀颗粒小玻璃管载体较大的塑料管钳。 与样品的玻璃管是不封顶的，浇灭了上清小心不要打扰底部泥沙细胞平层（图2.6）。 列入参考坐标AV标记此外凝胶一个黑暗的灯塔AV标记 （约2毫米× 2毫米大小，平面浮出水面，深色，sectionable材料的片段）（图3），增加一条，作为一个玻璃管的路标（图2.7 ）。 熔点为10秒，在中等功率微波液化等分的汞。 加入0.5毫升的熔融汞管，迅速与泥沙混合，并重述（图2.8）（不允许HG的开始巩固的情况下迅速着手进行下一步）。 新增约2.5毫升的温水（45 ° C）水向承运人的塑料管（图2.9）。 较小的上限玻璃管放在里面的塑料管，用温水。 （这一步是必要的，以防止在接下来的步骤巩固了HG）（图2.9）。 承运人塑料管被放置在离心机（ 与旋转杯，并没有固定的角杯，使细胞平底玻璃管垂直下降），和G（3000 RPM的，转子半径17厘米纺在1805年五）分钟。这种离心步骤的目的是推动影音标记，并集中到一个层细胞接近最终石蜡包埋细胞块（图1d）的切割面。 然后取出，轻轻地，垂直管的照顾，不要去打扰样品池底部的沉淀一层薄薄的离心机。 较大的塑料管是不封顶的小玻璃管中删除一个镊子垂直，而不会干扰标本细胞的沉积层。 小玻璃管中冷藏15分钟，冷却和巩固HG（图2.11）的垂直位置。 作为细胞的凝胶标本按钮块进行最终处理的去除凝固HG磁盘，在底层的集中/沉积物样本，被赶出平底玻璃管喷出通过23号针头与注射器（图2.12）10％的福尔马林。 针插入凝固标本（图2.12）中汞光盘的边缘沿管端。 该needle是旋转沿管的一侧，而甲醛是缓慢通过注射器推。伴随着深色灯塔AV标记集中在从平底的玻璃管（图2.12）标本中汞按钮分离结果。 细胞块（标本细胞的凝胶按钮），然后放置在一个标签的磁带和组织处理提交给准备石蜡包埋细胞块（图2.13 ）。 嵌入和切割试样磁盘是嵌入在切割面黑暗中的灯塔标记侧（图1）石蜡。 直到深色AV标记块切片，一盏明灯，是揭露和清晰可见。 从这个层面上，它应该包含最分散的单细胞标本3到4微米的部分削减。 部分收集玻片上作进一步的染色，免疫组织化学染色，或作为其它测试。对这些类型的幻灯片，用于安装部分的测试协议可能会有所不同。一般免疫，涂幻灯片，以防止在免疫步骤浮动和幻灯片的部分路段损失。 （按字母顺序）的缩写 ：CISH，显色原位杂交试验，鱼，荧光原位杂交试验FFPE，福尔马林固定石蜡包埋;活检，细针穿刺; HG，HistoGel™（Thermo Scientific的） ; LBC，液基细胞学检查; PCR聚合酶链反应; 图1。细胞块的结构编制Shidham的协议。 图2。Shidham的协议，准备从LBC标本的细胞块的不同步骤的摘要。 图3。香蕉皮AV标记的制备。 图4。AV标记和无细胞块和部分比较。 图5比较有和没有AV标记的细胞块切片的细胞结构。