Свет / темно Переход Тест для мышей

Хотя все последовательности генома мыши были определены, функции большинства из этих генов не известны. Ген-таргетинга методы, однако, может быть использована для удаления или манипулировать определенный ген у мышей (AIBA и др., 2007;. Остин и др., 2004.). Влияние данного гена на определенное поведение может быть определена путем проведения поведенческого анализа мутантных мышей (Такао и Миякава, 2006;. Такао и др., 2007). В качестве теста для поведенческого фенотипирование мутантных мышей, светлый / темный переход тест является одним из наиболее широко используемых тестов для измерения тревоги-подобное поведение у мышей (Кроули, 2000). Тест основан на естественное отвращение мышей в ярко освещенных областях и на их спонтанное исследовательское поведение в романе сред (Кроули, 1985). Тест чувствителен к анксиолитическим медикаментозное лечение (Кроули, 1985). Аппарат состоит из темной камере и ярко освещенную камеру. Ограничено открытия, 3 см в высоту на 5 см шириной, соединяющий две камеры. Мыши могут свободно перемещаться между двумя палатами. Количество записей в яркие камеры и продолжительность времени, проведенного Есть использованы в качестве показателей ярко-пространство тревоги у мышей.

Светлый / темный переход тест был первоначально разработан Кроули и его коллеги (Кроули и Гудвин, 1980). Есть два различия между их первоначальной версии и нашего теста. Во-первых, свет камеры больше, чем темные камеры в оригинальной версии, в то время как размер двух палат такая же, в нашей версии теста. Во-вторых, в оригинальной версии, свет камере не было потолка и стен свет камеры были прозрачными (Кроули и Гудвин, 1980), в то время как мы используем непрозрачные белого пластика для потолка и стен свет камеры. Эти различия, а именно размер и открытость свет камеры, дают для одновременного обнаружения ярко-пространство тревоги, а также открытого пространства, беспокойство в оригинальной версии теста. В нашей лаборатории, однако, открытым пространством тревога-подобное поведение у мышей тестируется в приподнятого крестообразного лабиринта. Непрозрачные стены и потолок, размер свет камеры, и наши конкретные светлый / темный протокол испытаний переход более специализированные для обнаружения ярко-пространство тревоги по сравнению с оригинальной версией.

Хотя свет / темно-тест перехода и приподнятого крестообразного лабиринта оба, используемых для оценки тревоги, как поведение, результаты не всегда последовательны. Например, передний мозг конкретных мышей кальциневрина нокаутом тратить уменьшилось количество времени в свет камеры в светлый / темный переход тест, но увеличилось количество времени в объятиями в приподнятого крестообразного лабиринта (Миякава и др., 2003). . Мы предположили, что наш свет / темно-тест перехода и приподнятого крестообразного лабиринта тесты оценки различных аспектов тревоги, как поведение, например, ярко-пространство тревоги и открытого пространства, тревога-подобное поведение. Чтобы проверить эту гипотезу, мы использовали большой набор данных, собранных с использованием тех же мышей в обоих тестах. В нашей лаборатории мы проводим поведенческих батареи тестов, охватывающих многие области для выявления поведенческих значение генов. Тест аккумулятора требуется несколько недель. Во время периода тестирования, мышь клетки хранятся на стойке в нашем учреждении. Если мышь перевозят в нашу лабораторию от других учреждений, они привыкли к среде нашего объекта не менее 1 недели. После периода привыкания, мышей подвергаются общая проверка здоровья и неврологические обследования (Миякава и соавт., 2003), и после этих простых экзаменов, мышей подвергаются светлый / темный переход тест. Тест проводится в звуконепроницаемыми экспериментальную комнату через 30 минут привыкания к экспериментальной комнате, как показано в фильме.

Мы оценили более 60 штаммов генно-инженерного мутантных мышей, используя протокол показано в фильме, и есть большой набор исходных данных для более чем 3000 мышей (в том числе дикого типа и мутантных мышей). Мы провели анализ факторов, чтобы воспользоваться большим набором исходных данных. Действительно, мы обнаружили различные факторы, от каждого испытания (неопубликованные данные), хотя были некоторые значимые корреляции между индексами (неопубликованные данные) .. Эти данные будут переданы как часть базы данных, которую мы сейчас строительство.

В нашей тестовой батареи, дикого типа помета, как правило, используется в качестве контроля. Как фон напряжения, C57BL/6J мышей обычно используются. Мы собрали данные мышей C57BL/6J использованы в качестве контроля мутантных мышей в тесте батареи. Показателей, полученных от мышей C57BL/6J в нашей светлый / темный переход испытаний были следующими (п = 795, средний SEM); расстояние: 846,5 8,88 см в свет камеры, 1478,5 9,53 см в темной камере, продолжительность времени, проведенного : 215,8 1,85 с в свет, 395,8 1,86 с в темноте; число переходов между отсеками: 30,52 0,43; задержки, чтобы войти в свет камеры: 64,94 2,40 s. Движение мыши вокруг входов в камерах обнаружены камеры и засчитывается как время, проведенное в обоих сhambers. Из-за этого сумма средняя продолжительность времени, проведенного в свет, и что в темных отсеках было больше, чем весь период испытаний (600 с).

В нашем протокол, мышь поместили в темную камеру. Три секунды после размещения мыши в темной комнате, дверь между камерами автоматически открывается и мыши могут свободно перемещаться между двумя палатами. C57BL/6J мышей тратить меньше времени на свет камеры, чем в темной камере (р <0,0001, продолжительности, если время, проведенное в свет: 215,8 1,85 с, продолжительность времени, проведенного в темноте: 316,3 2,11 с [время, проведенное в темном делает Не включайте в начальный момент времени провел в темной перед входом свет камеры в первый раз], п = 795, в паре-т теста). Это означает, что C57BL/6J мышей правило, чтобы избежать свет камеры, и что время, проведенное в свет хороший показатель тревоги-подобное поведение.

Результаты, полученные из различных штаммов мутантных мышей легко сравнивать, потому что все данные получены, используя тот же протокол. Для получения фенотипирование результаты штамм мутантных мышей, которые могут быть легко воспроизведена и в сравнении с данными других мутантов, поведенческие методы испытания, должно быть идентично, насколько это возможно лабораторий. Крэбб и коллеги протестировали взаимодействие между поведением мыши и лабораторных условиях, используя в точности тот же инбредных линий и один нулевой мутантного штамма. В своем исследовании аппарата, протоколы испытаний, а многие переменные окружения были строго стандартизированы. Несмотря на стандартизацию, они обнаружили систематические различия в поведении между лабораториями, хотя они также обнаружен штамм различия во всех поведения (Крэбб и соавт., 1999). Они сообщили, что неконтролируемые переменные и экспериментов характеризующие мутанты могут дать результаты, которые являются своеобразными к конкретной лаборатории. Процедурные различия, существующие между лабораториями сделать его трудно воспроизвести или сравнить результаты среди лабораторий. Здесь мы представляем наш протокол светлый / темный переход теста в виде фильма, так что детали протокола может быть доказана.

Создание визуальных документации протокол будет способствовать лучшему пониманию деталей экспериментальные процедуры, позволяющие по стандартизации протоколов, используемых по всей лаборатории и для сравнения поведенческих фенотипов различных штаммов мутантных мышей оценивали с помощью этого теста. Фильмы других протоколов, например, для приподнятого крестообразного лабиринта, открытых полевых испытаний, porsolt вынуждены плавать тест, страх кондиционирования, которые мы используем в наших поведенческих тест батареи в настоящее время сделаны для публикации в качестве будущих журнальных статей видео.