마우스에 대한 진한 / 라이트 전환 테스트

마우스 게놈 시퀀스의 모든 결정되었습니다 있지만, 이러한 유전자의 대부분의 기능은 알려져 있지 않습니다. 유전자는 타겟팅 기법을하지만, 마우스의 특정 유전자 (.; 오스틴 외, 2004. 아이바 외, 2007) 삭제하거나 조작하는 데 사용할 수 있습니다. 특정 행동에 특정 유전자의 영향은 다음 돌연변이 생쥐의 행동 분석을 (.; 타카오 외, 2007 타카오와 미야 카와, 2006) 실시에 의해 결정하실 수 있습니다. 돌연변이 생쥐의 행동 phenotyping을위한 시험으로, 어둠 / 불빛 전이 검사는 생쥐의 행동 (크롤리, 2000)와 같은 불안을 측정하기 위하여 가장 널리 사용되는 검사 중 하나입니다. 시험은 밝게 조명 영역에 생쥐의 자연 혐오감과 소설 환경에서 자연 탐험 행동 (크롤리, 1985)을 기반으로합니다. 시험은 anxiolytic 약물 치료 (크롤리, 1985)에 민감합니다. 장치는 어두운 챔버와 밝은 조명 챔버로 구성되어 있습니다. 5cm 너비로 3cm 높이 제한 개방은 두 방을 연결합니다. 생쥐 두 실 사이에서 자유롭게 이동할 수 있습니다. 밝은 챔버에 항목과 시간의 기간의 숫자는 생쥐에 밝은 공간 불안 지수가 거기에 사용됩니다 보냈다.

어둠 / 빛으로 전환 시험은 원래 크롤리와 동료 (크롤리와 굿윈, 1980)에 의해 개발되었습니다. 자신의 원래 버전 및 테스트 사이를 둘 다 차이가 있습니다. 두 챔버의 크기가 시험 우리의 버전에서 동일한 반면 첫째, 조명 챔버는 원래 버전의 어두운 챔버보다 큽니다. 둘째, 원래 버전에서 빛이 챔버는 천정에 없었다 우리가 빛을 챔버의 천장과 벽면에 대한 불투명 흰색 플라스틱을 사용하면서 조명 챔버의 성벽 (크롤리와 굿윈, 1980) 투명했다. 즉 이러한 차이, 빛의 챔버의 크기와 개방은 동시 밝은 공간 불안의 탐지뿐만 아니라 시험의 원래 버전에서 오픈 스페이스에 대한 불안감 수 있습니다. 저희 연구실에서는, 그러나, 오픈 스페이스 생쥐의 행동과 같은 불안이 높은 플러스 미로에서 테스트됩니다. 불투명 벽, 천정, 조명 챔버의 크기, 그리고 구체적인 가벼운 / 어두운 전환 테스트 프로토콜의 원래 버전에 비해 밝은 공간 불안 검출에 대한 더 전문입니다.

어둠 / 빛으로 전환 테스트 및 고가 플러스 미로 모두 행동과 같은 불안을 평가에 사용되고 있지만, 결과는 항상 일관성이 없습니다. 예를 들어, forebrain 특정 calcineurin의 녹아웃 마우스는 어둠 / 빛으로 전환 시험에서 조명 챔버의 시간의 감소 금액을 지출하지만, 고가 플러스 미로에서 쌍수를 시간의 증가 금액 (미야 카와 외., 2003) . 우리는 우리의 빛 / 어둠 전이 테스트 및 고가 플러스 미로 테스트 같은 밝은 공간 불안과 개방 공간 불안과 같은 행동으로 불안과 같은 행동의 다양한 측면을 평가하는 것이 가상. 이 가설을 테스트하기 위해, 우리는 큰 데이터를 모두 테스트에서 동일한 생쥐를 사용하여 수집된 세트를 사용합니다. 저희 연구실에서는, 우리는 유전자의 행동 중요성에 대한 화면으로 여러 도메인을 다루는 행동 테스트 배터리를 실시합니다. 테스트 배터리는 몇 주를 완료해야합니다. 테스트 기간 동안, 마우스 케이지는 우리 시설에 선반에 보관됩니다. 생쥐가 다른 기관에서 우리 실험실로 운반하는 경우, 그들은 적어도 1 주일 우리 시설의 환경에 길들여지지하고 있습니다. 요법 이니 기간 후, 마우스는 일반 건강 진단 및 neurologic 심사 (미야 카와 외., 2003)를 받게되며, 다음의 간단한 시험 후, 생쥐는 어둠 / 빛으로 전환 테스트를 받게됩니다. 영화 같이 시험, 실험 방에 요법 이니, 30 분 후 사운드 증명 실험 실에서 실시됩니다.

우리는 영화에 표시된 프로토콜을 사용하여 유전자 조작 돌연변이 생쥐의 60 개 이상 변종을 평가하고보다 3000 마우스 (야생 – 타입과 돌연변이 생쥐 포함)에 대한 원시 데이터의 큰 세트를 가지고있다. 우리는 원시 데이터의 큰 집합을 활용 요소 분석을 실시했다. 색인 (게시되지 않은 데이터) 사이에 중요한 상관 관계가 있었지만 실제로, 우리는 각 테스트 (게시되지 않은 데이터) 다른 요소를 감지 … 이러한 데이터는 지금 우리가 건설하는 공공 데이터베이스의 일부로 공개되지 않습니다.

우리의 테스트 배터리에 야생 형 littermates은 일반적으로 컨트롤로 사용됩니다. 배경 스트레인으로 C57BL/6J 마우스는 일반적으로 사용됩니다. 우리는 시험 배터리의 돌연변이 쥐를의 제어로 사용 C57BL/6J 마우스의 데이터를 수집. 다음과 같이 우리의 어두운 / 라이트 전이 시험 C57BL/6J 마우스에서 얻은 색인 있었다 (n은 = 795이; 의미 SEM), 거리 여행 : 조명 챔버의 846.5 8.88 cm, 어두운 실내에서 1478.5 9.53 cm, 시간의 기간 동안 : 빛 가운데 215.8 1.85 S, 어둠 속에서 395.8 1.86들, 구획 사이의 전환의 개수 : 30.52 0.43; 빛을 챔버를 입력 대기 시간 : 64.94 2.40 S. 방으로 입구 주변 생쥐의 움직임은 카메라에 의해 감지와 C 모두에서 보낸 시간으로 계산됩니다hambers. 이 때문에, 시간의 의미 기간의 합계가 빛 가운데 지출과 어두운 구획의 테스트 (600 S)의 전체 기간의보다 큰 것을.

우리의 프로토콜에서는, 마우스는 처음 어두운 챔버에 배치됩니다. 세 초 어둠 챔버에 마우스를 배치 후 챔버 사이의 문이 자동으로 열리고 마우스 두 실 사이를 자유롭게 이동할 수 있습니다. 215.8 1.85 초, 어둠 속에서 보낸 시간 소요 시간 : 316.3 2.11 S [시간 어둠 속에 보냈다 않습니다 C57BL/6J 마우스가 (P <0.0001, 기간 시간이 조명에 보낸 경우 어두운 챔버에 비해 빛의 챔버에 적은 시간을 보내고 처음으로 빛을 챔버], N = 795, 이점 – T 테스트)를 입력하기 전에 어둠 속에서 보낸 초기 시간을 포함하지 않습니다. 이것은 C57BL/6J 마우스가 빛을 챔버를 방지하는 경향을 나타냅니다, 그리고 빛 속에서 보낸 시간이 불안과 같은 행동을 좋은 인덱스입니다.

모든 데이터가 같은 프로토콜을 사용하여 얻은 돌연변이 때문에 마우스의 다양한 변종에서 얻은 결과는 쉽게 비교됩니다. 쉽게 재현 및 기타 돌연변이의 데이터와 비교할 수 있습니다 돌연변이 생쥐의 변형의 결과를 얻으려면 phenotyping, 행동 테스트 방법은 실험실 간의 가능한 동일해야합니다. 크래브 및 동료 정확히 같은 근친 변종 하나의 NULL 돌연변이 변종을 사용하여 마우스 동작 및 실습 환경 사이의 상호 작용을 테스트했습니다. 그들의 연구에서, 장치, 시험 프로토콜 및 여러 환경 변수를 엄격하게 표준화되었다. 그들은 또한 모든 동작 (크래브 외., 1999)의 변형의 차이를 감지하지만, 표준화에도 불구하고 그들은 실험실에 걸쳐 행동의 체계적인 차이를 발견했습니다. 그들은 돌연변이를 특성화 통제 변수와 실험 특정 실험실에 사안별로 다르며, 결과를 얻을 수 있습니다 보도했다. 실험실 사이에 존재하는 절차적 차이점은 어려운 실험실 간의 결과를 복제하거나 비교합니다. 여기에서 우리는 프로토콜의 세부 사항을 증명 할 수 있도록 동영상으로 어둠 / 빛으로 전환 테스트를위한 프로토콜을 제시한다.

프로토콜의 시각 설명서를 구축하는 것은 실험실 걸쳐 돌연변이 생쥐의 다양한 변종의 행동 phenotypes의 비교에 사용되는 프로토콜의 표준화를위한 수 있도록 실험 절차의 세부 사항의 이해를 촉진이 테스트를 사용하여 평가됩니다. 이러한 우리의 행동 테스트 전지에서 사용하는 고가 플러스 미로, 오픈 필드 테스트 porsolt 강제 수영 검사, 공포 컨디셔닝을 위해 다른 프로토콜의 동영상은 현재 미래의 비디오 저널 기사로 게시를 위해 만들어지고 있습니다.