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In vitro Caractérisation des chaperons de histones à l’aide d’essais analytiques, de rabattement et de chaperoning
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In Vitro Characterization of Histone Chaperones using Analytical, Pull-Down and Chaperoning Assays
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In vitro Caractérisation des chaperons de histones à l’aide d’essais analytiques, de rabattement et de chaperoning

DOI:
10.3791/63218-v

•

08:16 min

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December 29, 2021

•

, , , , , , , , ,
1Institute of Life Sciences, 2Regional Centre for Biotechnology, 3School of Biotechnology,KIIT University, 4Department of Molecular Biophysics and Biochemistry,Yale University, 5Department of Pharmacology,University of Vermont College of Medicine

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 01:04Competitive Pull-Down Assay
  • 02:06Analytical Ultracentrifugation-Sedimentation Velocity (AUC-SV) Experiments
  • 04:29Plasmid Supercoiling Assay to Confirm Histone Chaperoning Function
  • 06:11Results: Characterization of Histone Chaperones Using Analytical, Pull-Down, and Chaperoning Assays
  • 07:41Conclusion

Summary

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Ce protocole décrit une batterie de méthodes qui comprend la chromatographie analytique taille-exclusion pour étudier l’oligomérisation et la stabilité des histones chaperones, le test pull-down pour démêler les interactions hiperon-histone, l’ASC pour analyser la stœchiométrie des complexes protéiques et le test de chaperonnage des histones pour caractériser fonctionnellement un chaperon histones putatif in vitro.

Tags

Histone ChaperonesPull-down AssaysAnalytical Size Exclusion ChromatographyAnalytical Ultra-centrifugationHistone Chaperoning AssayChromatin ResearchH2A/H2B DimerH3/H4 TetramerSDS-PAGECoomassie Brilliant Blue R250Dialysis BufferAnalytical Ultra Centrifuge

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