使用狂犬病间接荧光抗体检测狂犬病 IgG 和 IgM 抗体
Summary
本手稿的目的是研究使用狂犬病间接荧光抗体检测来检测狂犬病特异性 IgG 和 IgM 抗体。
Abstract
狂犬病间接荧光抗体 （IFA） 检测旨在检测血清或脑脊液中的各种狂犬病特异性抗体同种型。该测试可快速获得结果，可用于在几种不同情况下检测狂犬病抗体。狂犬病IFA检测对于快速和早期检测抗体以评估狂犬病患者的免疫反应特别有用。尽管其他生前狂犬病诊断方法优先，但该检测可用于通过抗体检测证明近期狂犬病病毒暴露情况。IFA 检测不提供病毒中和抗体 （VNA） 滴度，但可以通过抗体阳性或阴性来评估暴露前预防 （PrEP） 反应。该测试可用于各种情况，并且可以为许多不同的目标提供结果。在这项研究中，我们使用了来自接受PrEP的个体的几个配对血清样本，并使用IFA测试证明了他们狂犬病抗体随时间推移的存在。
Introduction
狂犬病间接荧光抗体（IFA）检测用于检测血清或脑脊液中的各种狂犬病特异性抗体同种型。它是可用于监测生前狂犬病患者的一系列测试之一。它对于早期检测抗体以评估患者对狂犬病感染的免疫反应特别有用。当与其他检测、病史和患者的疫苗接种状态结合使用时，IFA 检测可以帮助确定狂犬病病毒或疫苗的暴露情况1.当 IFA 检测测量 IgM 和/或 IgG 时，特异性抗体的值可以指示从暴露于抗原1 开始的大致时间范围。该测试在列出的应用程序或其他尚未探索的应用程序中可能有用。
有几种狂犬病血清学检测方法可用。快速荧光聚焦抑制试验 （RFFIT）、荧光抗体病毒中和 （FAVN） 试验或这些试验的改良是测量狂犬病病毒中和抗体 （RVNA） 的主要方法1。然而，这些测试不能区分 IgM 和 IgG 抗体。当鉴别抗体同种型对监测狂犬病免疫应答很重要时，可使用狂犬病 IFA 和狂犬病酶联免疫吸附测定 （ELISA） 检测，但不检测 RVNA。尽管 IFA 和 ELISA 检测可用于确定样本中是否存在狂犬病特异性抗体，但它们的执行方式存在一些差异。IFA 检测使用细胞培养的活病毒作为其抗原底物，而用于狂犬病检测的典型 ELISA 使用一种或多种病毒蛋白。在可以培养狂犬病病毒的实验室环境中，IFA 检测可能更容易进行，而不是购买或培养用于 ELISA 的单个病毒蛋白。在决定选择哪种方法时，应考虑检测目的和从任何狂犬病血清学检测结果中获得的信息2.
IgM 最先产生反应，直到在第 28 天左右观察到类别转换，此时 IgG 成为主要的循环抗体3。因此，IgM只会在暴露于狂犬病病毒或接种疫苗后的有限时间内出现。检测血清和脑脊液 （CSF） 可以表明暴露是通过疫苗接种（其中抗体仅在血清中可见）还是来自病毒感染（可能在 CSF1 中显示抗体）。
已经确定，狂犬病抗体在暴露前预防 （PrEP） 后会持续数年4。IFA测试可以成为在接种疫苗或暴露后的不同时间点证明这一点的有用工具。
Protocol
Representative Results
Discussion
IFA 检测利用抗原-抗体复合物，允许标记位点可视化狂犬病特异性抗体。将神经母细胞瘤或BHK细胞接种在多孔PTFE涂层的显微镜载玻片上，并接种狂犬病病毒实验室菌株CVS-11。一旦单层汇合并且细胞达到约50%的所需感染性，载玻片将被储存直至准备使用6。
将患者血清或脑脊液涂在感染的单层细胞上并孵育，以使任何狂犬病特异性抗体附着在病毒抗原<sup class="x…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们感谢纽约州卫生部沃兹沃思中心对这个项目的支持。
Materials
| 25x55mm glass cover slips | Any | ||
| Acetone | Any | ||
| Anti-Human IgG Labeled Conjugate | Sigma-Aldrich | F9512 | |
| Anti-Human IgM Labeled Conjugate | SeraCare | 5230-0286 | |
| Aspirating pipette tip | Any | ||
| BHK-21 Cells | ATCC | CCL-10 | |
| BION IFA Diluent | MBL BION | DIL-9993 | |
| Cell Culture water | Sigma-Aldrich | W3500 | EGM |
| Coplin Jars | Any | ||
| Fetal Bovine Serum | Sigma-Aldrich | F2442 | EGM |
| Fluorescent microscope with FITC filter | Any | ||
| Glycerol | Sigma-Aldrich | G7893 | Mountant |
| Gullsorb IgM inactivation reagent | Fisher Scientific | 23-043-158 | IgG Inactivation Reagent |
| L-Glutamine | Sigma-Aldrich | G-7513 | EGM |
| Minimum Essential Media Eagle – w/Earle’s salts, L-glutamine, and non-essential amino acids, w/o sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | M0643 | EGM |
| Mouse Neuroblastoma Cells | ATCC | CCL-131 | |
| Multi-well Teflon coating glass slides | Any | ||
| PBS | Any | pH 7.6 | |
| Penicillin | Sigma | P-3032 | EGM |
| Rabies Direct Fluorescent Antibody Conjugate | Millipore Sigma | 5100, 5500 or 6500 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S-5761 | EGM |
| Sodium Chloride crystals | Sigma-Aldrich | S5886 | Mountant |
| Sterile dropper | Any | ||
| Streptomycin sulfate salt | Sigma | S9137 | EGM |
| Trizma pre-set crystals pH 9.0 | Sigma-Aldrich | S9693 | Mountant |
| Tryptose Phosphate Broth | BD | 260300 | EGM |
| Vitamin mix | Sigma-Aldrich | M6895 | EGM |
References
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