200KV透過型電子顕微鏡を用いた高分解能クライオEMデータセットのルーチンコレクション

Selectris-Xエネルギーフィルター(以下、エネルギーフィルター)およびFalcon 4検出器(以下、直接電子検出器と呼ぶ)を備えた200kV Glacios TEMシステム(以下、200kV TEMと呼ぶ)について、プロトコルのすべてのステップが説明されています。プロトコルの手順は、各 Glacios システムにプレインストールされているデフォルトの SPA データ収集ソフトウェアである EPU アプリケーションに固有です。以下のプロトコル手順は EPU バージョン 2.14 に対応しており、別の EPU バージョンを使用する場合は、小さな変更が予想されます。このプロトコルの前提条件は、i)銃と柱のアライメントが良好にアライメントされていること、ii)EMキャリブレーションが正しいこと、iii)EPUの自動機能が正しくキャリブレーションされていることです。 1. 顕微鏡へのグリッドの読み込み 注:この実験で使用された200kV TEMは、顕微鏡のオートローダー内に装填され、サンプルの失透を防ぐために常に-170°C未満の温度に保たれるカセット内に最大12個のオートグリッド(すなわち、特別なカートリッジにクリップされた従来のTEMグリッド)を保持することができる。 オートグリッドを液体窒素条件下でオートローダーカセットに挿入します。 オートグリッド付きのカセットを液体窒素冷却移送カプセルに挿入します。 カプセルを顕微鏡に挿入し、顕微鏡UIの [Dock] ボタンをクリックして、カプセルから顕微鏡のオートローダーにカセットをロードします。 [インベントリ]ボタンをクリックして、ロードされたカセット内のオートグリッドの存在を確認します。 「ロード 」 ボタンと 「アンロード」 ボタンをクリックして、TEM イメージング用のカラムにオートグリッドを挿入します。 2. データ管理プラットフォームでのプロジェクトの設定(オプション) メモ:サンプル情報と収集されたデータは、接続されているすべての計測器の構造化データを保存できる、付属のデータ管理プラットフォームで整理できます。任意のワークフローステップを定義して、レビューとエクスポートのために整理された方法で画像とメタデータをキャプチャできるプロジェクトを作成できます。 データ管理ポータル・アプリケーションを開始し、ユーザー名とパスワードを使用してログインします。 ポータル UI の左パネルで、[プロジェクト の追加] ボタンをクリックして新しいプロジェクトを作成するか、下の一覧にある既存のプロジェクトのボタンをクリックしてプロジェクトを開きます。 [ 実験の追加] ボタンをクリックして、開いているプロジェクト内に新しい実験を作成します。 新しい実験の [ メタデータ ] パネルに説明を入力し、[ワークフロー の追加] ボタンをクリックして、実験内に新しいワークフロー (単粒子解析など) を作成します。 必要に応じて、中央パネルの [ステップの追加] ボタンをクリックして、カスタムメイドのワークフローを作成するか、定義済みの SPA ワークフローにステップを追加します (図 1 と 図 2)。注:これらのステップは、サンプル調製、生化学技術によるサンプル特性評価、サンプルガラス化、クライオEMグリッドのスクリーニング、データ収集セッション、およびデータ分析を表す場合があります。 必要に応じて、各ステップの メモ に説明を入力します。これには、画像や写真を含めることができます。 ワークフローでデータセット ステップを作成し、データセットの種類を EPU として選択します。注:これにより、分析ソフトウェアは、データ取得中にすべての結果データ/メタデータをデータ管理ポータルの正しい場所に自動的に配置し、すべてのステップとデータ転送の完全な記録を維持しながら、データを優先先に自動的にエクスポートできます。 生化学ステップでサンプルグリッドとEMグリッドに関するテンプレートに入力し、各グリッドをサンプルに関連付けます(1つのサンプルを複数のグリッドに関連付けることができることに注意してください)。 サンプルとグリッドの組み合わせを [ データセット] ステップのメタデータ セクションに関連付けます。 3. 解析ソフトウェアでイメージングプリセットと画像シフトキャリブレーションを設定する 表1に示すように、個々のイメージングモードのイメージングパラメータを設定します。特定の設定の選択に関する考慮事項については、「ディスカッション」セクションで詳しく説明します。 解析ソフトウェア のデータ集録 プリセットで選択した倍率の平行照明を設定する注:この研究で使用された200kV TEMなどの2コンデンサーTEMシステム上で、所定のSPOTサイズ(すなわち、C1レンズのプリセット強度)でサンプルを平行に照射するためのC2レンズの設定は1つだけです。したがって、単位面積当たりの電子線量率(e-/Å2/s)は、SPOTサイズの設定を変更し、以下の手順に従ってC2強度(ビーム強度)を再調整することによってのみ調整することができる。 サポートカーボンホイルと薄いまたは氷のない場所に移動します。 TEM UIの絞りメニューで100μmまたは70μmの対物レンズ アパーチャ を選択します。 コントロールパネルの回折ボタンを押して、 回 折モードに切り替えます。 蛍光スクリーンを挿入し、FluCamモードを 高解像度に変更します。 中央の回折スポットを絞りの端に移動します。絞りエッジが表示されない場合は、拡大ノブを使用してカメラの長さを長くします。 コントロールパネルの フォーカス ノブを慎重に回して、バックフォーカルプレーンにピントを合わせます。バックフォーカルプレーンは、絞りエッジが目に見えて鋭いときに焦点を合わせます。 FluCam の感度を最低レベルまで下げ、中央の回折スポットを FluCam の中心に移動します。 コントロールパネルの 強度 ノブを使用して、中央のスポットのサイズを最小限に抑えます。 TEM UI で対物レンズ絞りを引っ込め、イメージングモードに戻します。 解析ソフトウェアの[ 取得 ]ボタンをクリックして、設定をデータ集録プリセットに保存します。 使用する検出器に最適なデータ集録プリセットで電子線量率を調整します。 グリッド上の空の領域に移動する(例:カーボンホイルが壊れたグリッドの正方形) 分析ソフトウェアの[線量測定]ボタンをクリックして、電子 線量 率を測定します。 最適な線量率を達成するためにSPOTサイズを変更します。このプロトコルで使用される直接電子検出器の場合、4-5e-/pixel/sの線量レートは、通常、高解像度のデータ収集に使用されます。これは通常、SPOT サイズ 4 ~ 6 に対応します。 上記のように、新しいSPOTサイズ設定で平行照明を確認して調整します。 フラクションの下のEERオプションを選択して、直接電子検出器33でEERモードを使用する。 解析ソフトウェアの[ 取得 ]ボタンをクリックして、設定をデータ集録プリセットに保存します。 オートフォーカスプリセットに切り替えて、Get ボタンを押してフォーカス用の照明設定を保存します。露出時間を 1 秒、ビニングモード 2 に手動で変更します。 Thon Ringsプリセットに切り替えて、Get ボタンを押してこのプリセットの照明設定を保存します。露出時間を 1 ~ 2 秒、ビニング モード 2 に手動で変更します。 ゼロロスプリセットに切り替えて、Get ボタンを押してこのプリセットの照明設定を保存します。露出時間を 0.5 秒に手動で変更し、ビニング モードを 4 にします。 解析ソフトウェアのマニュアルの説明に従って、設定された光学設定間の画像シフトを、[準備]タブの[Image Shift Calibrat]タスクを使用して調整します(補足図1)。 表1:エネルギーフィルターと直接電子検出器を備えた200kVクライオTEMを使用した高解像度データ収集の典型的なイメージング設定。 設定は、自動データ収集の設定に使用される各光学プリセットについて表示されます(プロトコルのセクション3)。これらの設定は、本研究で使用した200kV TEM顕微鏡および直接電子検出器に固有のものです。 この表をダウンロードするには、ここをクリックしてください。 4. グリッドマッピングとデータ収集に最適なクライオEMグリッドの選択 [ アトラス ]タブを選択し、[新しいセッション ]ボタンをクリックして新しいセッション を開きます。 セッション名やデータ保存場所などの詳細を入力し、[ 適用] ボタンをクリックして新しい スクリーニング タスクウィンドウを開き、オートローダインベントリ内のすべてのグリッドのリストを表示します。必要に応じて、[グリッドの名前] を編集します。 対応するグリッド番号の横にあるチェックボックスをオンにして、目的のグリッドを選択します。 [ スタート] ボタンをクリックすると、選択したすべてのグリッドのアトラスの完全自動コレクションが開始されます。 収集が完了したら、グリッドラベルをクリックして、取得したアトラスを確認します。注: 個々のグリッドの正方形は、各アトラスの相対的なグレースケール値の評価に基づいて、相対的な氷の厚さに従って分類されます。分類されたグリッドの正方形は、データ収集領域の選択を導くために使用できるさまざまな配色で描かれています。Vitrobot Mk IVで生成されたグリッドは、通常、グリッド全体に氷厚の勾配を表示し、データ収集に理想的な氷厚を特定するのに役立ちます。最適なグリッドは、転写氷の汚染をできるだけ少なくし、十分な切れ目のない亀裂のないグリッドの正方形を示す必要があります(図3)。適切な氷分布を有するグリッドをさらに調査して、高倍率での氷中の粒子の分布(すなわち、個々の粒子の密度および配向)を評価することができる。 トップメニューの [サンプルのロード] ボタンをクリックして、適切な氷分布を持つ選択したグリッドを顕微鏡列に挿入します。 [ アトラス ] タブを選択し、アトラス画像内の適切なグリッド正方形を右クリックし、ドロップダウン メニューから [ステージを ここに移動] オプションを選択して、ステージをグリッド正方形に移動します。 「自動関数」タブを選択して、グリッドの正方形をユーセントリック高さに設定します。ユーセントリック高さプリセットに切り替え、選択したグリッド正方形の中央にあるビームチルトによる自動ユーセントリック自動機能をクリックし、[スタート]ボタンをクリックします。 グリッドスクエアプリセットに切り替えて、画像を取得します。ステージを氷のある穴に移動し、汚染がまったくないか最小限に抑えるには、右クリックと「ステージをここに移動」オプションを使用します。 穴/ユーセントリック高さプリセットに切り替えて、画像を取得します。ステージを目的の穴の横にあるカーボン領域に移動するには、右クリックして「ステージをここに移動」オプションを選択します。 オートフォーカスの自動機能をクリックし、目的のデ フォーカス の値を0 μmに設定し、反復の値を-2 μmに設定します。 オートフォーカス プリセットに切り替えて、[ スタート ]ボタンをクリックします。 「準備」タブをもう一度選択し、「穴/ユーセントリック高さ」プリセットに切り替えます。以前に取得した穴の画像で、穴内の関心領域を選択し、右クリックして「ステージをここに移動」オプションを選択して、ステージをこの位置に移動します。 データ集録プリセットに切り替え、ビームシフト後の待ち時間を0.5秒、ステージ移動後の待ち時間を20秒に設定します。-3 μm ~ -5 μm のデフォーカスを使用して画像を取得し、低解像度のコントラストを高めて個々の粒子の視覚化を改善します。 必要に応じて、手順 4.7 ~ 4.13 を繰り返して、必要に応じて氷の厚さが異なる異なる穴や異なるグリッドの正方形のパーティクルを画像化します。 高解像度データ収集に最も適したグリッドを特定して選択したら、トップメニューの 「サンプル をロード」ボタンをクリックして、選択したグリッドをTEMにロードします。注:あるいは、より多くの情報が必要な場合、および/またはこのスクリーニングプロセスの自動化が必要な場合は、セクション5を実行します。 5. 単一粒子分析ソフトウェアでのデータ収集セッションの設定 注:金箔グリッドを使用している場合、客観的な乱視と昏睡状態の調整(セクション6)は確実に機能しない場合があります。データ収集を設定する前に、カーボンフォイルグリッドまたはクロスグレーティングEMグリッドをロードし、これらの最終アライメントを実行することをお勧めします。 「EPU」タブを選択し、「セッション作成」ボタンをクリックして、左側のパネルに新しいセッションを作成します。「新規セッション」オプションを選択して現在の光プリセットを使用するか、「環境設定から新規」オプションを選択して、以前に書き出したセッション設定をロードします。 セッション名とデータ保存場所を入力します。注: この場所は、データ収集セッションからの統合イメージとメタデータを、セッション名の付いたサブフォルダーに保存するために使用されます。これらのデータは大量のストレージ領域を占有しませんが、EER カメラフレームは常にこのデータストレージのルートディレクトリのセッション名を持つディレクトリに格納されるため、これらのデータを DMP サーバーの Falcon オフロードデータストレージに保存することをお勧めします。 セッションの 「手動」(Manual ) タイプを選択すると、プロトコルの後半でデータ収集用に選択されたグリッド正方形の個々の穴の選択を制御できます。 データ収集に収差のない画像シフト(AFIS)を使用して、個々の穴間のステージ移動を減らし、サンプル全体のドリフトを低減し、画質を劣化させることなくデータ収集のスループットを向上させるには、 高速 集録モードを選択します。 保存する統合イメージのデフォルトの mrc 形式を選択します。 使用するグリッドとそのタイプを指定します。このプロトコルは、アポフェリチンにR-1.2/1.3 UltraAufoilを使用し、20SプロテアソームにR-2/1 Quantifoilグリッドを使用しました。試料キャリアの下のクォンティフォイルを選択し、クオンティフォイルタイプでR1.2/1.3または2/1を選択します。 オプション: 右下隅にある Athena ログイン ボタンをクリックして、EPU 品質モニター (EQM) を利用します。 ブラウザのポップアップウィンドウにログインの詳細を入力して、「 セッション設定」 概要の設定セクションをアクティブにします。 [設定] セクションの [選択] ボタンをクリックし、以前に作成したデータセット (プロトコル セクション 2) を参照して、現在のデータ コレクションに関連付けます。 [品質モニターを有効にする] チェック ボックスをオンにします。 「 適用」 ボタンをクリックして、新しいセッションを作成します。注: この操作により、左側の列メニューに新しいタスクが開きます。セッション中の任意の時点で、いくつかの詳細が正しくない場合、セッション設定タスクに戻り、詳細を変更/更新し、再度[適用]をクリックしてセッションを更新することができます。 左側のパネルで [正方形の選択] タスクを選択して、収集されたグリッドのアトラスを表示します。 必要に応じて、アトラスのタイルをダブルクリックして、グリッドの正方形の氷の品質をより適切に判断するために、より高品質の画像を表示します。画像をもう一度ダブルクリックすると、グリッドアトラスに戻ります。 (i)グリッド正方形の支持箔は損傷することなく無傷である、(ii)箔穴内のガラス質の薄氷(穴は支持炭素箔よりも明るく見える)、(iii)グリッド正方形内の結晶性氷汚染(黒い斑点)を可能な限り少なくする、(iv)グリッド正方形全体および個々の箔穴内の輝度勾配が最小限に抑えられる。注:プリセットを選択し、良好なグリッドを使用すると、この研究で使用した200kVクライオTEMは、〜200〜300ムービー/時間の速度で画像化できます。そのことを念頭に置いて、必要な数の正方形を選択するか、顕微鏡の時間の量に応じて正方形選択タスクに戻って後で追加します。参考までに、アポフェリチンの1.6 Å解像度を達成するために3000本の映画が収集されました。 完全なアトラスまたは高品質のタイル画像のいずれかでデータ収集用のグリッド正方形を選択する 目的のグリッド正方形を右クリックし、コンテキストメニューの [選択] オプションを選択します。 または、キーボードの Ctrl キーを押し ながら、目的のグリッドの四角形を左クリックします。 逆に、右クリックして 選択を解除する か、Shift キー を押し ながら左クリックして四角形を削除します。 メモ: 次の手順は、データ収集によって高解像度の再構築が行われるようにするために重要です。薄い氷の層を持つグリッド正方形の穴の選択を開始します。このグリッドの正方形を右クリックし、「穴 を選択 」オプションを選択して 「穴の選択」 タスクを開始します。 左側のパネルで 「穴の選択」 タスクを選択して、選択したグリッドの正方形の穴を選択します。 自動ユーセントリックボタンをクリックすると、最初に選択したグリッド正方形に自動的に移動し、 ユーセントリック の高さを調整して、箔穴を見つけるためのグリッド正方形画像を取得します。 [穴を 探す] ボタンをクリックして、画像内の箔穴を見つけます。メモ: 穴の検出がうまく機能しなかった場合 (つまり、画像にスキップされた穴やサイズが正しくない穴がある場合)、セッション設定タスクの Quantifoil Type エントリに正しい値が入力されていることを確認し、穴をもう一度見つけてください。それでも穴が正しく見つからない場合は、「穴のサイズを測定」(Measure Hole Size) ボタンをクリックして穴の直径と距離を手動で設定し、穴をもう一度見つけます。 グリッドバーボタンの近くにある穴を削除ボタンをクリックして、グリッドバーの近くの 穴 の選択を解除します。 図4に示すように、Ice フィルターの明るさヒストグラム (ソフトウェア ウィンドウの右下) で制限を調整して、氷が厚すぎるすべての穴 (左側の制限線を使用) と空の穴 (右側の制限線を使用) をすべて削除します。メモ: 絞り込みのために、特定の強度値を 「適用」(Apply ) ボタンの横にある対応するテキストボックスに入力することもできます。 必要に応じて、選択ブラシを使用して穴の選択を手動で絞り込みます。 ブラシを左クリックしてドラッグすると、不要な穴の選択が解除されます。 Ctrl キーを押しながら 左クリックすると、ホイル穴を再選択できます。 Shift キーを押しながらマウスホイールでスクロールし、ブラシサイズを調整します。 データ収集中に繰り返し使用されるデータ集録テンプレートを設定およびテストする穴を選択する:グリッド正方形画像の穴を右クリックし、「ステージを位置に移動」オプションを選択します。 左側のパネルで 「テンプレート定義」 タスクを選択します。 穴/ユーセントリックプリセットを選択し、「取得」ボタンをクリックして画像を取得します。 「穴を見つけて中央揃え」ボタンをクリックして、画像内の 穴を中央 に配置します。 「イメージシフト後の遅延」の値を 0.5 秒(デフォルト)に設定し、「ステージシフト後の遅延」の値を 20 秒に設定します。注:平行ビーム径は、本研究で用いた200kVクライオTEMシステムで固定されており、通常、50μmのアパーチャで1.6~1.7μmに相当するため、R-1.2/1.3グリッドでは1穴あたり1枚の画像しか取得できず、R-2/1またはR-2/2グリッドでは穴あたり2枚の画像(反対側のエッジ付近)しか取得できません。画面上の設定集録領域のサイズは、実際のビーム径に対応していませんのでご注意ください。画像スケールバーを利用して、適切な配置距離を推定することができる。 [取得 領域の追加] ボタンを選択し、画像をクリックして、中央の穴で高倍率の画像取得が行われる位置を選択します。 [オートフォーカス 領域の追加] ボタンを選択し、画像をクリックして、画像オートフォーカスが実行される中央の穴の横にあるサポート箔上の位置を選択します。注:集束用のビームサイズは1.6〜1.7μmで、炭素上の隣接する穴から等距離に配置する必要があります。 緑色の集録領域をクリックして、ソフトウェアウィンドウの上部セクションにある デフォーカスリストに一連のデフォーカス 値を設定します。次の 「テンプレート実行」 タスクのテスト実行でパーティクルの視覚化を強化するために、最も高いデフォーカスを最初に入力します。 青いオートフォーカス領域をクリックして、同じ領域にオートフォーカス固有の設定を設定します。 各AFISクラスタの開始時にオートフォーカスする [センタリング後 ]オプションを選択します。 オプションを選択すると、 オート フォーカスが速くなり、ステージドリフトが減少します。 「テンプレート実行」タスクを選択し、「実行」ボタンをクリックします。 データ取得手順の個々のステップ(穴の中央揃え、選択した領域のオートフォーカス、および設定された領域の画像取得)を観察し、最終的な高倍率画像で画像化された粒子の品質を確認します。 高倍率画像ウィンドウの右下にあるFFTボタンをクリックして FFT 画像を確認し、トロンリングがFFT画像で複数の振動を示し、高解像度に拡張されているかどうかを視覚的に評価します。 テンプレートの実行が正常に完了したら、[穴の選択] タスクの [すべての四角形を準備] ボタンをクリックすると、この最初のグリッド四角形で使用される設定に従って、選択した他のすべてのグリッド四角形にデータ コレクションが自動的に設定されます。 6. データ収集開始前の最終的な顕微鏡アライメント メモ: 最高の高解像度結果を得るには、最も機密性の高いアライメントをデータ収集ソフトウェアのデータ集録モードとまったく同じ設定で、実際のデータ集録を開始する直前に行う必要があります。これらのアライメントは、グリッドの薄いサポートカーボンのある位置で、グリッドバーから十分に離れ、ユーセントリック高さでアライメントする必要があります。 テンプレート実行タスクを選択し、新しい画像を取得し、右クリックでステージとともにカーボンフォイル上のクリーンな領域に移動し、メニューオプション「ステージをここに移動」を選択します。 [自動機能]タブを選択し、[目的のデフォーカス]を0 μm、[反復]を-2 μmに設定します。オートフォーカスプリセットに切り替え、[スタート]ボタンをクリックしてオートフォーカス機能を実行します。 蛍光スクリーンを下げて、TEM UIの ダイレクトアライメント のメニューを開きます。 最良の結果を得るには、経験豊富なユーザーがピボットポイントのアライメントを確認することができます:ダイレクトアライメントメニューでnPビームチルトpp Xタスクを選択し、コントロールパネルの多機能ノブを使用してバウンスビームを最大限オーバーラップさせます。np ビーム傾斜 pp Y タスクについて、この手順を繰り返します。 蛍光スクリーンカメラメニューの EF ボタンをクリックすると、エネルギーフィルター入口を示す緑色の円が表示され、緑色の円の上にビームが中央に配置されます。注:続行する前にターボポンプが停止していることを確認してください。そこからの振動は、目に見えるトンリングの数を減らし、しばしば自動機能を失敗させます。 ソフトウェアウィンドウに戻り、メニューバーの [自動機能 ]タブを選択します。 「自動設定」タスクを選択し、「トーンリング」プリセットに切り替えて、「スタート」ボタンを押します。このプロセスを観察して、(i)撮影した画像が炭素上にあり、(ii)トンリングがはっきりと見え、(iii)計算されたCTFフィット(点線)がトンリングの最小値にうまく配置されていることを確認します(補足図2)。 自動昏睡タスクを選択し、[スタート]ボタンを押します。プロセスを観察して、撮影した画像が炭素上にあり、トン環がはっきりと見え、計算された適合値(点線)がトン環の最小値にうまく配置されていることを確認します。マウスのスクロールホイールを使用して、各トーンリング画像を拡大します(補足図3)。メモ:顕微鏡にエネルギーフィルタが装備されている場合は、アライメントシーケンスの一部としてエネルギーフィルタのチューニングを行い、フィルタスリットをゼロロスピークに中央に配置し、エネルギーフィルタのプリズムの歪みを補正する必要があります(ステップ6.9-6.14)。これらの配置は、壊れたグリッドの正方形の内側など、グリッドの空の領域で実行する必要があります。 Sherpa UI を開き、エネルギー フィルター アプリケーションを選択します (補足図 4)。 [設定]ウィンドウでカメラをEF-Falcon、ビン4x、露出時間0.2秒に設定します。 ゼロロスオプションの [ 中央]ボタンをクリックして、 ゼロロス エネルギーフィルタースリットを中央に配置します。 [等色性]オプションの[調整]ボタンをクリックします(補足図4)。 幾何学的および色的歪みのオプションで、調整倍率と調整歪みをクリックします(補足図5、補足図6) 結果が示された仕様の範囲内でなく、出力レポートに赤色で表示される場合は、ステップ 6.11 のアライメントをもう一度繰り返します。メモ: 直接電子検出器のゲインリファレンスは数か月にわたって安定していますが、空の領域の画像が均一な強度を示さず、ストライプやその他の明確な特徴を示す場合は、 Falcon 4リファレンスイメージマネージャ を使用して新しいゲインリファレンスを取得する必要があります。または、このような画像の高速フーリエ変換(FFT)を計算し、線が表示されていないことを確認します。 ソフトウェアウィンドウで、「 準備」 タブを選択し、 データ集録 プリセットに切り替えます。 線量設定を40 e-/Å2 に設定し、[ 線量率の測定] ボタンをクリックします。 EPUタブに移動し、自動取得タスクを選択し、オプションで自動ゼロロス機能をチェックします。[実行の開始]ボタンをクリックして、完全に自動化されたデータ収集を開始します。 7. データ収集中のデータ品質の監視と最適化 注: データ収集の進行中は、収集されたデータは、データ管理ポータルを介して EQM を使用してモニターできます。EQMは、モーション補正とCTF判定をオンザフライで実行し、その結果をポータルに表示します。ユーザーは、個々の集録の品質を判断し、さまざまな品質指標のグラフを表示し、不要な集録を除外し、データをオンザフライまたはバッチジョブとして最終ストレージにエクスポートできます。 分析ソフトウェアが Web ブラウザーを使用してデータを配置するデータセットに移動します。 データセットの概要では、取得カードは、モーション補正とCTF決定に関する情報をグラフィック形式で表示します。個々のカードをクリックすると、詳細情報が表示されます。 DataViz パネルに、集録ごとの焦点ずれ、乱視、CTF 信頼範囲を示すデータセット全体の集計グラフを表示できるようにします (補足図 7)。 パネル上部のフィルターを使用して、要求された焦点除去範囲内にあり、乱視がゼロに近いデータのみを選択し、CTF を指定された (ターゲット) 解像度まで決定できます。フィルターを設定したら、[ 適用] ボタンを押して、選択したデータのみをデータセットの概要ウィンドウに表示します。 取得した画像のほとんどが設定された基準内に収まったら、データ収集セッションを完了まで継続させます。取得した画像のごく一部のみが設定された基準を満たす場合は、分析ソフトウェアの設定を再構成するか、サンプル上の別の領域に移動するか(分析ソフトウェアの 次のグリッド正方形 ボタンを押します)、またはデータ収集を停止します。