L’évaluation du rétablissement de moteur demeure la mesure de résultats de référence dans des études périphériques expérimentales de nerf. La mesure isométrique de force tétanique du muscle antérieur de tibialis chez le rat est un outil inestimable pour évaluer des résultats fonctionnels après reconstruction des défauts de nerf sciatique. Les méthodes et les nuances sont détaillées dans cet article.
Les dommages traumatiques de nerf ont comme conséquence la perte fonctionnelle substantielle et les défauts segmentaires de nerf nécessitent souvent l’utilisation des greffes autologous de nerf d’interposition. En raison de leur disponibilité limitée et de la morbidité associée du côté donneur, de nombreuses études dans le domaine de la régénération nerveuse se concentrent sur des techniques alternatives pour combler un écart nerveux segmentaire. Afin d’étudier les résultats des options de traitement expérimental chirurgical ou pharmacologique, le modèle du nerf sciatique du rat est souvent utilisé comme essai biologique. Il existe une variété de mesures de résultats utilisées dans les modèles de rats pour déterminer l’étendue de la régénération nerveuse. La force de sortie maximale du muscle cible reste le résultat le plus pertinent pour la traduction clinique des thérapies expérimentales. La mesure isométrique de force de la contraction tétanique de muscle a été précédemment décrite comme technique reproductible et valide pour évaluer le rétablissement de moteur après des dommages ou la réparation de nerf dans des modèles de rat et de lapin. Dans cette vidéo, nous fournirons une instruction étape par étape de cette procédure inestimable pour l’évaluation de la récupération fonctionnelle du muscle antérieur de tibialis dans un modèle de défaut de nerf sciatique de rat utilisant des paramètres optimisés. Nous décrirons les préparations pré-chirurgicales nécessaires en plus de l’approche chirurgicale et de la dissection du nerf péronéal commun et du tendon antérieur de muscle de tibialis. La technique isométrique de mesure de la force tétanique sera détaillée. La détermination de la longueur musculaire optimale et de la fréquence d’impulsion de stimulus est expliquée et la mesure de la contraction maximale du muscle tétanoïque est démontrée.
La perte de la fonction motrice à la suite d’une lésion nerveuse périphérique traumatique a un impact significatif sur la qualité de vie et le statut socio-économique des patients1,2,3. Le pronostic de cette population patiente demeure pauvre en raison des améliorations minimales des techniques chirurgicales au cours des années4. La réparation épinérale directe de bout en bout sans tension forme la reconstruction chirurgicale de référence. Cependant, dans les cas où les lacunes nerveuses sont prolongées, l’interposition d’une greffe de nerf autologue s’est avérée supérieure5,6. La morbidité associée d’emplacement de distributeur et la disponibilité limitée des greffes de nerf autologue ont imposé le besoin de techniques alternatives7,8.
Des modèles animaux expérimentaux ont été utilisés pour élucider le mécanisme de régénération des nerfs périphériques et pour évaluer les résultats d’une variété d’options de traitement reconstructif et pharmacologique8,9. Le modèle du nerf sciatique du rat est le modèle animal le plus fréquemment utilisé10. Leur petite taille les rend faciles à manipuler et à loger. En raison de leur potentiel neurorégénératif superlatif, la diminution du temps entre l’intervention et l’évaluation des résultats peut entraîner des coûts relativement inférieurs11,12. D’autres avantages de son utilisation comprennent des similitudes morphologiques avec les fibres nerveuses humaines et le nombre élevé d’études comparatives / historiques13. Bien que ce dernier point doive être abordé avec prudence, car une grande variété de mesures de résultats différentes entre les études rend difficile la comparaison des résultats14,15,16,17,18.
Les mesures de résultats pour évaluer la régénération nerveuse vont de l’électrophysiologie à l’histomorphométrie, mais ces méthodes impliquent une corrélation mais ne mesurent pas nécessairement directement le retour de la fonction motrice14,15. La régénération des fibres nerveuses peut ne pas faire les connexions appropriées qui peuvent provoquer une surestimation du nombre de connexions fonctionnelles14,15,19,20. La mesure la meilleure et cliniquement la plus pertinente pour démontrer la réinnervation correcte des organes finaux reste l’évaluation de la fonction musculaire21,22,23. La création d’outils d’évaluation de la fonction motrice pour les modèles animaux est toutefois un défi. Medinaceli et al. ont d’abord décrit l’analyse de la piste de marche, qui a depuis été la méthode la plus fréquemment utilisée pour évaluer la récupération fonctionnelle dans les études expérimentales sur les nerfs périphériques21,24, 25,26,27,28. L’analyse de la piste de marche quantifie l’indice fonctionnel sciatique (IFS) sur la base de mesures des empreintes de pattes de rats marchants21,29. Les limitations majeures de l’analyse de la piste de marche, telles que les contractures des orteils, l’automutilation, le maculage de l’impression et la faible corrélation avec d’autres mesures de réinnervation, ont nécessité l’utilisation d’autres paramètres pour la quantification de la récupération fonctionnelle30,31.
Dans des études précédentes chez des rats Lewis32 et des lapins néo-zélandais33,nous avons validé la mesure isométrique de la force tétanique (ITF) pour le muscle tibialis antérieur (TA) et démontré son efficacité dans l’évaluation de la récupération musculaire après différents types de réparation nerveuse34,35,36,37,38,39. Le muscle TA est bien adapté en raison de sa taille relativement grande, de son innervation par la branche péronéale du nerf sciatique et de ses propriétés biochimiques bien élucidées40,41,42,43. Lorsque la longueur musculaire (force de précharge) et les paramètres électriques sont optimisés, l’ITF offre une variabilité côte à côte de 4,4% et 7,5% chez les rats32 et les lapins33,respectivement.
Cet article fournit un protocole détaillé de la mesure d’ITF dans le modèle de nerf sciatique de rat, y compris une description complète de la planification pré-chirurgicale nécessaire, de l’approche chirurgicale et de la dissection du nerf péronéal commun et du tendon distal de muscle de TA. En utilisant des valeurs prédéterminées pour l’intensité et la durée du stimulus, la longueur musculaire optimale et la fréquence de l’impulsion du stimulus seront définies. Grâce à ces quatre paramètres, l’ITF peut par la suite être mesuré de manière cohérente et précise.
Ce protocole décrit une méthode préalablement validée pour l’acquisition de mesures ITF maximales précises du muscle TA dans le modèle de rat32. La récupération de la force maximale après les traitements expérimentaux de reconstruction nerveuse est d’un intérêt primordial dans le cadre clinique car elle prouve que le nerf non seulement s’est régénéré, mais a également établi des connexions de travail avec le muscle cible. L’ITF peut être utilisé dans un modèle d’éca…
The authors have nothing to disclose.
La recherche présentée dans cette publication a été financée par le National Institute of Neurological Disorders and Stroke des National Institutes of Health sous le numéro ro1 NS 102360. Le contenu relève de la seule responsabilité des auteurs et ne représente pas nécessairement les opinions officielles des National Institutes of Health.
0.9% Sodium Chloride | Baxter Healthcare Corporation, Deerfield, IL, USA | G130203 | |
1 mm Kirshner wires | Pfizer Howmedica, Rutherford, NJ | N/A | |
Adson Tissue Forceps | ASSI, Westbury, NY, USA | MTK-6801226 | |
Bipolar electrode cables | Grass Instrument, Quincy, MA | N/A | |
Bipolar stimulator device | Grass SD9, Grass Instrument, Quincy, MA | N/A | |
Cotton-tip Applicators | Cardinal Health, Waukegan, IL, USA | C15055-006 | |
Curved Mosquito forceps | ASSI, Westbury, NY, USA | MTK-1201112 | |
Force Transducer MDB-2.5 | Transducer Techniques, Temecula, CA | N/A | |
Gauze Sponges 4×4 | Covidien, Mansfield, MA, USA | 2733 | |
Ground cable | Grass Instrument, Quincy, MA | N/A | |
Isoflurane chamber | N/A | N/A | Custom-made |
Ketamine | Ketalar, Par Pharmaceutical, Chestnut, NJ | 42023-115-10 | |
LabView Software | National Instruments, Austin, TX | ||
Loop | N/A | N/A | Custom-made |
Microsurgical curved forceps | ASSI, Westbury, NY, USA | JFA-5B | |
Microsurgical scissors | ASSI, Westbury, NY, USA | SAS-15R-8-18 | |
Microsurgical straight forceps | ASSI, Westbury, NY, USA | JF-3 | |
Retractor | ASSI, Westbury, NY, USA | AG-124426 | |
Scalpel Blade No. 15 | Bard-Parker, Aspen Surgical, Caledonia, MI, USA | 371115 | |
Slim Body Skin Stapler | Covidien, Mansfield, MA, USA | 8886803512 | |
Subminiature electrode | Harvard Apparatus, Holliston, MA | N/A | |
Surgical Nerve Stimulator | Checkpoint Surgical LCC, Cleveland, OH, USA | 9094 | |
Terrell Isoflurane | Piramal Critical Care Inc., Bethlehem, PA, USA | H961J19A | |
Testing platform | N/A | N/A | Custom-made |
Tetontomy Scissors | ASSI, Westbury, NY, USA | ASIM-187 | |
Traceable Big-Digit Timer/Stopwatch | Fisher Scientific, Waltham, MA, USA | S407992 | |
USB-6009 multifunctional I/O data acquisition (DAQ) device | National Instruments, Austin, TX | 779026-01 | |
Vacuum Base Holder | Noga Engineering & Technology Ltd., Shlomi, Isreal | N/A | Attached clamp is custom-made |
Weight (10 g) | Denver Instruments, Denver, CO, USA | 820010.4 | |
Weight (20 g) | Denver Instruments, Denver, CO, USA | 820020.4 | |
Weight (50 g) | Denver Instruments, Denver, CO, USA | 820050.4 | |
Xylazine | Xylamed, Bimeda MTC Animal Health, Cambridge, Canada | 1XYL002 |