封闭胸冠状动脉闭塞/输液模型中的心肌梗塞后心力衰竭

13头健康和性成熟的雌性Göttingen小猪（年龄在12至14个月之间）和10头健康和性不成熟的雌性陆地猪（年龄在2至3个月之间）被安置在猪摊上，符合最新《实验室动物DHEW护理和使用指南》和欧盟准则2010年63月63日的建议。动物没有被剥落。动物室的温度得到控制，动物保持在12小时的光/暗循环和无害虫。阿德利比图姆喂养导致哥廷根小猪和兰德拉斯猪的体重增加，因此，来自这两个品种的猪都用限制饮食方案喂养。哥廷根小猪在到达动物设施和整个研究期间就被限制饮食。特别饮食服务猪周180-220克/餐/动物每天两次，根据”照顾好埃尔加德·戈廷根迷你猪”准则（修订日期：2013年3月13日）在头2天。从第3天到第12天，动物被喂食50%的特殊饮食服务猪周和50%的维护迷你猪饮食。从第14天到研究结束，动物们被喂食维持小食。根据PIC Wean完成手册2008年和2013年，陆生猪接受了怀孕的母猪周，体重的1.5%，每天给予两次。所有动物都单独分配食物，并监测食物摄入量，以避免竞争。有喂养困难的动物由照料人员单独喂养。所有动物都接受自来水广告。在哥廷根小猪和兰德拉斯猪的后MI HF的实验协议显示在 图1中。 图1。在兰德拉斯猪和哥廷根小猪中，心肌梗死引起的心力衰竭的实验方案。 CMRI – 心脏磁共振成像。 请单击此处查看此图的更大版本。 1. 基线CMRI 在麻醉开始前至少12小时从动物身上提取食物，但可以安全地取水以防止脱水。 麻醉 用盐酸氯胺酮（12毫克/千克）、锡拉津（1毫克/千克）和阿托平（0.04毫克/千克）诱导动物麻醉，作为对颈部区域的肌肉注射。 测量动物的体重和长度。伊托克等人描述了身体表面面积（BSA）公式的计算。 对于哥廷根迷你猪 （BSA [m2]= （7.98 × BW [kg]2/3） /100）17 和由斯温德尔等人为兰德拉斯猪 （BSA [m2]= （7.34 × BW [kg]0.656） /100）18. 管状动物，保持麻醉与异氟素（2%异氟素，2L/分钟氧气）。内膜管的大小取决于每种动物的个体解剖特征，范围在6.0至7.5毫米之间。 用 18 G 针对耳静脉进行调节，并在林格溶液（1 L/小时）中开始施用 5% 葡萄糖。 CMRI 将动物转移到CMRI设施，并管理0.4-0.5毫克/千克的甲酸酯。甲酸酯是一种非极化骨骼肌松弛剂，用于在CMRI测量期间避免呼吸人工制品。开始正压通气（16/分钟频率，350 mL 体积，25-30 mmHg 正压）。 将动物放置在超平位置。将柔性线圈放在胸部，将 32 个通道线圈放置在 CMRI 床上。使用 1.5T 扫描仪执行非对比心脏 MRI，使用相位阵列线圈和矢量心电图 （ECG） 系统来评估心脏功能和形态（弹出分数 （EF）、心脏输出 （CO）、腔室和墙壁尺寸）。使用回顾性心电图门、稳定状态自由预选 Cine MRI 技术，使用 1.2 毫秒回声时间、40 毫秒重复时间、50 度翻转角度、300 mm 视场、8 mm 切片厚度和至少 256×256 图像矩阵，获取心电图 MRI 图像。 量化左右心室末舒张（ LVEDV 和 RVEDV ）和末收缩量（ LVESV 和 RVESV ）、笔画卷（ LVSV 和 RVSV ））、 EF – s （ LVEF 和 RVEF ）和质量（按末端舒张（ LVED 质量）和末端收缩（ RVED 质量）短轴图像的手动平面测量。通过跟踪两室和四室的影像来量化左心房体积。将左听力体积更正到 BSA，以便将左听力体积索引到身体表面区域 （LAVi）。评估局部图像中肺水肿的存在。 用于计算心脏指数 （CI） 时，请使用 BSA 和心脏输出。 通过戒断异氟兰来终止麻醉。当自发呼吸返回时，将动物排出，取出i.v.坎努拉，并将其送回笼子。 2. 预科、血管接触和冠状动脉闭塞 预科 手术前一天，给500毫克乙酰水杨酸和300毫克氯皮多格雷口服。 应用镇痛（麦丽素0.4毫克/千克体重）和抗生素鸡尾酒（苯丙胺-丙酮（24.8毫克/mL），苯丙霉素-苯丙胺（83.6米） 在冠状动脉闭塞当天，通过肌肉注射，通过肌肉注射，将二氢霉素-硫酸盐（156.3毫克/mL），3 mL/50kg 体重）。 重复 1.2.1-1.2.4 部分中描述的步骤。 使用耳静脉管进行液体置换和药物管理。在整个过程中，通过耳静脉每30分钟施用1克硫酸镁，以防止心室心动过速（VT）和心室颤动（VF）。 血管访问 将动物放在手术台上，固定四肢，并应用楔子固定处于栓塞位置的动物。 用波维酮碘对手术部位进行消毒。手术部位围绕着格拉西利斯和肉毒瘤肌肉之间的皮肤折叠。 用剃须刀在手术部位取出头发。 将表面 ECG 电极放置在埃因托芬的三角形中。这个三角形是由两个前肢和左后肢形成的，电极被放置在四肢上。 开始正压通气（16/分钟频率，350 mL 体积，25-30 mmHg 正压）。 用手术窗帘隔离消毒的手术区。 接近股骨区域，如K.S.埃特鲁普等人19日详细描述。简言之，在格拉西利斯和萨托里乌斯肌肉之间对皮肤进行纵向切口。分离皮下组织和筋膜。隔离股动脉，并在动脉下方放置两条手术缝合线以控制出血。 使用塞尔丁格技术20， 21的 6F-ACT 介绍器刺穿和封口股骨动脉。 将护套固定在皮肤上。 使用动脉进行血液采样，进行进一步的生化分析。 通过股骨护套施用 5000 IU 肝素，以确保适当的抗凝，并在手术干预期间防止血栓形成。在整个过程中，每60分钟阅读2500 IU肝素。在整个干预过程中，这些动物接受了大约370-440国际耳曼/千克肝素。 在股骨血管上安装压力传感器，在整个手术过程中监测动脉血压。 为了校准压力，压力记录系统将压力记录系统放在每个动物的心脏水平上。去除气泡后，当三向停止孔向自由空气的方向打开时，进行零压力校准。 冠状动脉闭塞、输液和颅内药物管理请注意，这种干预只应由训练有素的介入心脏病专家进行。通过股骨护套，将导管引入和推进到主动脉拱门，并在导管上引入5F导管。首先，推进导线以触觉方式接近主动脉根。通过细小的 5F 引导导管进行深灌输，以避免血流受到严重阻碍。 将荧光镜放置在前后位置。 确保导管内没有带至少 5 mL 血液（导管体积）的血泡或气泡，注射器与导管相连。 将导管的外部部分连接到装满放射性结合剂的注射器（iobitridol 1.1 mL/50 kg 体重）。 小心注射器被高架，以防止气泡注入冠状动脉。 要执行基线血管造影，单独灌注并有选择地填充对比剂右冠状动脉和左主冠状动脉的囊。有关更多技术细节，请参阅导管教科书20、21。 执行巴里 （旁路血管成形术重新血管化调查心肌危险指数） 得分后， 基线血管造影。所有末梢动脉（左前下垂、左侧环形和右冠状动脉的末端部分，以及拉莫斯、对角线、钝边际、后部下降和后部分支）的分数根据其长度和口径根据具体标准22、23分配。0 值表示几乎微不足道的容器大小。相比之下，值 3 定义了一条大动脉，其长度为基础和心脏顶点之间的三分之二距离。不要把正确的心室边缘和后下降动脉隔膜分支考虑在内。 通过将总值与梗塞相关动脉除以供应LV的所有动脉的总值（图2A-D）来计算最终的BARI得分（左心室风险百分比），选择左前后代（LAD）冠状动脉上的闭塞部位，通过BARI评分评估，实现约25-30%的心肌处于危险之中。 通过导管插入皮下半发光冠状动脉成形术 （PTCA） 导线。将其蒸馏定位到荧光引导下的闭塞计划部位，并检查血管造影是否有潜在的并发症（如冠状动脉解剖、穿孔）。 通过视觉估计根据冠状动脉直径确定最佳气球大小。 将气球导管（气球直径 2.5 毫米，气球长度 12 毫米）置于 PTCA 导线上方，并将其推进到计划的位置。 用对比剂填充气球，并通过血管造影检查气球导管的位置。 在气球的名义压力（7-9大气层）下充气气球，以发展气球侧壁和容器表面之间的软接触。软触摸被定义为气球侧壁的相互作用，足以在不对船壁造成伤害的情况下遮挡船只。 通过可视化对比流的停止，用血管造影术确认遮挡 （TIMI 0）。保持引导线和气球的位置，从冠状动脉的孔中拉回导管，以避免扩散心脏缺血。 磁带仪器到手术窗帘，以避免颅内气球脱位。 记录并记录由 ST 高程遮挡的 ECG 标志。 在整个过程中，使用直肠探头仔细监测生命体征、心率 （HR）、血压、核心温度和脉搏氧化。 用加热装置盖住动物以保持核心温度。 如果发生无脉冲 VT 或 VF，将 1 克硫酸镁作为静脉注射，并立即启动频率为 100/min 的胸部压缩。应用300J直流冲击和利多卡因2-4毫克/公斤作为静脉注射。将1毫克肾上腺素作为静脉注射剂对待。 在冠状动脉遮挡期间每30分钟检查一次气球压力。如果气球压力降低超过 0.5 BAR，则将其设置为初始值。 在冠状动脉闭塞结束前进行血管造影，以验证维持的气球位置和没有流蒸馏到闭塞部位。 以缓慢的溶胶管理 2500 IU 的肝素和 1 克硫酸镁，以防止血栓形成和心律失常。 在哥廷根迷你猪120分钟心脏缺血和90分钟后在兰德拉斯猪中启动与气球通缩的重新灌输。 取出放气的气球。 确认与冠状血管造影的输液成功，以证明冠状血管的分离部分（TIMI 3）的血流。 3. 颅内药物管理 为了防止冠状动脉栓塞，用盐水填充治疗性灌注微箱。 将微型箱放在PTCA导线上。 推进并确认微箱的位置。微箱的尖端应置于遮挡水平。 删除PTCA导线。 将微箱与灌注泵连接起来，并在开始灌注后 5 分钟启动颅内管理。 药物管理后取出微箱。 制作控制血管造影术，以检查对比度中的 TIMI 3 级流量，并排除干预导致空气浮雕或冠状动脉解剖。 4. 伤口关闭和术后护理 取出动脉护套，并绑住靠近穿刺部位的股动脉。血管介入后股动脉闭塞对猪腿部功能没有影响，每日兽医观察评估。 使用连续缝合关闭伤口，并涂抹防腐涂层。 通过戒断异氟兰来终止麻醉。 密切监测动物在恢复期，并检查他们每12小时，直到术后第3天，然后每24小时，直到研究结束。应特别注意饮食行为、嗜睡、感染迹象、疼痛状况、体重变化、行动能力和一般健康状况。手术后，这些动物被用一辆面包车分批运送到笼子里，以避免术后早期不必要的压力。 5. 后MI CMRI及其评价 麻醉 使用第 1.2.1-1.2.4 节中描述的麻醉协议。 CMRI 使用手动喷油器，以 4 mL/秒的速度管理静脉注射对比剂 0.2 mmol/kg 加多布特罗尔。 使用反转恢复准备的渐变回声序列拍摄延迟增强图像。在对比剂的管理后 10 到 15 分钟获取短轴和长轴图像。 评估 使用 MASS 7.6 分析软件以盲目的方式执行评估。 评估短轴Cine图像的末端舒张部分壁厚度。 测量短轴延迟增强图像上的疤痕横向度。 通过在延迟对比增强图像上使用手动平面测量量化心肌坏死，将信号强度为 5 SD 的心肌在远程非梗塞心肌中获得的平均信号上方进行划定。 6. 统计