Summary

几内亚猪诱导内部水解的修正手术方法

Published: June 04, 2020
doi:

Summary

本文演示了一种外膜方法,用于消灭豚鼠内膜囊,用精细的挑料伤害内膜导管,以诱导实验性内膜水肿。

Abstract

内溶性水ps是一种鳞状体的扩大,通常与梅尼埃的疾病有关,尽管病理生理学机制仍不清楚。为了充分研究内溶性水ps的特性,如低频听力损失的起源,需要一个可靠的模型。豚鼠是一个很好的模型,因为它听到低频区域,这是假定受到内溶性水液的影响。先前的研究表明,内淋巴水肿可以通过内膜或外部方法手术诱发,这些方法涉及在内膜导管和囊上钻孔。然而,是否有可能创建一个内向水肿模型使用外膜方法,避免危险的钻在内膜管道和囊是未知的。这项研究的目的是演示一种经过修订的外膜方法,通过在术后30天内诱导实验性内膜水肿,通过消灭内目囊,用精细的挑料伤害内膜导管。样本大小包括七只豚鼠。对听力进行了功能测量,随后采集了时间骨骼进行组学分析。该方法在实现内性水ps方面成功率为86%。脑脊液泄漏的风险很小。样本中未发生术中半圆形运河的围手术死亡或伤害。该方法演示了一种安全可靠的方法,在相对快速的时间点30天诱导内性水解。临床意义在于,该方法为进一步探索低频听力损失的起源提供了可靠的模型,这种损失可与内溶性水ps相关。

Introduction

内部溶性水液是鳞状介质的扩大。可以使用scala介质的横截面区域测量内性水ps的存在。据认为,临床内心水ps可能与低频感神经性听力损失有关,如梅尼埃病中所看到的。但听力损失的来源仍不清楚。为了充分研究与内溶性水ps相关的低频听力损失的起源,需要一个可靠的模型。

1965年,木村和舒克内赫特描述了如何使用内膜方法1在豚鼠中诱导内淋巴水皮。他们的技术涉及使用后颅口方法访问手术和亚弧线。这些步骤包括切口杜拉,用林格溶液浸湿棉垫收回小脑,以及钻取内心管和内心囊的中间部分。骨蜡然后放入手术管中,将内质导管与远端内溶性囊分离开来。颅内切除术缺陷通过放置可吸收的明胶粉(例如,凝胶泡胶)和重合上覆的肌肉而关闭。在术后的第1、3、7、14、21和30天,不断发现内溶性水ps的组织证据,这表明内核方法是诱导组织确认的内溶性水培的可靠方法。使用与木村和舒克内赫特相同的分道法,但不同的时间点,萨尔特和德莫特证实,在第4天和第2天以后,在耳蜗的第二回合中,scala介质显著扩大。虽然原始研究中没有报告使用木村和舒克内赫特的内膜方法诱导脑脊液(CSF)泄漏的实际发病率,但CSF泄漏的存在可能会增加脑膜炎的风险。有人建议,CSF的丧失可能导致淋巴流出,导致同时暂时扩大几内亚猪3的内部性体积。诱导内淋巴水ps的外膜方法将是一个更安全的选择。

1989年,安德鲁斯和博默描述了两种超前手术方法,通过中颅刀法或后颅骨法方法,达到内质囊和导管,以消灭内心囊4。他们描述了用钻石钻去除手术线,然后钻取内心囊的中间部分,或者使用精细的拾取来破坏内溶性囊和管道。1993年,李、赖特和迈尔霍夫描述了类似的方法,包括钻穿内膜囊和管道,但不同之处在于,它们同时阻塞了耳蜗水渠5。它们表明,在消灭内溶性囊和阻塞耳蜗水渠四周后,通过组学评估的内淋巴水肿的存在。Megerian等人是第一个发表视频文章,展示内膜囊和管道的外层消融,涉及直接钻在手术的中段进入内溶囊和管道6。他们展示了在手术后28周牺牲的豚鼠中内性水蛋白的免疫学,以及在16千赫兹区域6的听力损失。能否在早期时间点用外听觉方法诱导组织学确认的内方水ps和低频听力损失,目前尚不得而知。

本报告的总体目标是演示一种外部方法,通过在术后30天内诱导实验性内膜水肿,通过消灭内溶性囊,用精细的挑料伤害内膜导管。使用这种技术背后的原理是避免在岩石上钻骨,从而消除意外伤害杜拉和导致CSF泄漏的风险,降低后半圆形运河受伤的可能性,并降低对sigmoid正着肠受伤的风险。

Protocol

下文在《议定书》部分所列的所有程序均按圣路易斯华盛顿大学机构动物护理和使用委员会批准的议定书所述进行。 1. 生命体征的麻醉诱导和监测 注:这项研究使用了从内部繁殖群获得的色素NIH菌株豚鼠。 使用任何性别的豚鼠,体重至少350克。 将豚鼠放入新生儿暖化异体中,并给予氯胺酮/锡兰辛混合物内腹(50毫克/千克氯?…

Representative Results

提出的方法采用外部方法,在7头豚鼠中,由2头雄性猪和5只雌性猪组成,用精挑剂来消灭内膜囊,并伤害内心管。手术的平均持续时间从切口到闭合2小时。总钻孔时间从5-10分钟不等。豚鼠需要长达4小时才能完全从麻醉中出来。样本中没有术内或术后死亡。任何豚鼠的后半圆形运河或杜拉没有受伤。一只豚鼠(不包括数据分析),对sigmoid罪子的损伤。 <p class="jove_content…

Discussion

提出的外膜法在实现组织学确认的内溶性水ps和低频听力损失方面成功率为86%。该方法在术后第30天可靠地获得了内溶性水ps组织学证据,这与先前使用内膜方法2的研究一致。该方法对现有方法的意义是不需要 CSF 泄漏,从而消除了一个潜在的混淆变量,该变量已被建议导致内性卷3的补偿性、暂时扩展。总体而言,该方法演示了一种快速、安全、可靠的诱导实验…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

我们感谢香农·勒夫勒在数字和材料表方面给予的帮助。本出版物中报告的研究得到了国家卫生研究院内国家耳聋和其他通信障碍研究所的支持,通过”学术耳鼻喉科临床医生/研究人员的发展”培训补助金,奖励编号T32DC000022(C.V.V.)和R01 DC014997(J.T.L.)。内容完全由作者负责,不一定代表国家卫生研究院的官方观点。

Materials

12 mL syringe Henke-Sass Wolf 5100-X00V0
1 mL and 3 mL syringe BD Precision(Ordered from Fischer Sci) 14-826-87 15859152
27.5 butterfly gauge needle Terumo Surflo Winged Infusion Set, Terumo Corporation, Japan) (Ordered from McKesson) 448407
4-0 suture McKesson 1034507
4×4 gauze sponges Dukal (Ordered form McKesson) 374454
60mL syringe Fisher Sci 22-031-375
Anspach otologic drill Anspach SC2100
atipamezole Zoetis 107204-6
autoclave Fisher sci 15-103-0508
autoclave bags McKesson 524881
bayonet separator Olympus AL 130564
bupivicaine auro Medics Pharma 555150-169-10
clear sterile drape 3M 1020
cotton balls Fisherbrand (ordered from Fisher Sci) 22-456-885
cotton swabs McKesson 508716
diamond burrs #3, #2, #1, and #0.5 mm Anspach QD8-3SD; QD8-2SD; QD8-1SD; QD8-05SD
diaper pad McKesson 945330
disposable 15 blade Swann-Morton 0305
enrofloxacin Hospira 0409-4888-01
epinephrine McKesson 63739-0456
eye ointment Dechra Vet Products 17033-211-38
Freer elevator Grace Medical 215100FX
gelfoam Pfizer (Ordered from McKesson) 82830
hair trimmers Oster Power Pro Cordless (ordered from Amazon) 078400-020-000
iodine scrub Purdue Pharma (ordered from mcKesson) 521243
iris scissors Olympus CL-542114
ketamine Henry Schein Animal Health 55853
lactated ringers B. Braun Medical (ordered from McKesson) 186662
lancet knife by Rosen Grace Medical 151100FX referred to as curette in the text
lubricant Milex (ordered from Cooper Surgical) MX5030
masking tape 3M (ordered from fisher sci 19047259
metal rectangle basin Amazon B07NQDBC6T
needle holder Olympus CR 213015-ENT
needles: 27 gage, 18 gauge BD Precision(Ordered from Fischer Sci) 14-826-48 14-826-5D
neonatal warming isollete Air Borne Life Support Systems 731-1800
operating microscope Carl Zeiss OPMI pico
oxygen tank AirGas OX USP200
pulse ox CapnoTrue (Ordered from Medacx) M-3090112001
rectal probe with heating blanket Harvard Apparatus probe: PY2 50-7217 Heating Blanket: PY2 50-7214
red body holder Lichtenhan Lab N/A In-house product
right angle Olympus BV-230337
rosen needle Olympus AM-130566 customized, it is the instrument I use to tear the sac
rubber tubing for O2 administration Fisher Sci 14-171-104
saran wrap Fisher Sci NC9617977
stereotactic head holder WUSTL Instrument Machine Shop N/A In-house product
sterile drapes Cardinal Health 7553
suction tube by Baron Grace Medical 034903FX 034905FX #3 and #5 Suction
tissue forceps adson brown Grace Medical 325112FX
Weitlander retractor Olympus Grace Medical BL200011 100313FX
xylazine Akorn 59399-110-20

References

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Cite This Article
Valenzuela, C. V., Lee, C., Buchman, C. A., Lichtenhan, J. T. A Revised Surgical Approach to Induce Endolymphatic Hydrops in the Guinea Pig. J. Vis. Exp. (160), e60597, doi:10.3791/60597 (2020).

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