小鼠感染甲型流感病毒期间T卵泡帮助细胞和胚芽中心反应的评价

近十年来，许多研究都集中在新发现的^CD4+T细胞子集Tfh细胞子集上，因为它在胚芽中心（GC）B发育中的重要作用。B细胞淋巴瘤6（Bcl6），主要被认为是一种基因抑制剂，是Tfh细胞的血统定义因子，以证明Bcl6的异位表达足以驱动Tfh分化，而Bcl6的缺乏导致Tfh分化^1，2，3消失。与其他^CD4+T助剂子集通过迁移到炎症部位来发挥其作用或功能不同，Tfh细胞主要在脾脏和淋巴结的B细胞卵泡区提供B细胞帮助。共刺激分子 ICOS 和 CD40L 在 Tfh 和 GC B 细胞之间的相互作用中起着重要作用。在Tfh分化过程中，ICOS从认知B细胞传输必要的信号，并充当接收来自旁观者B细胞的迁移信号的受体，用于B细胞区域定位^4、5。CD40L是来自Tfh细胞的信号的调停器，用于B细胞增殖和生存^6。与CD40L扮演类似角色的另一个因素是细胞因子IL21，它主要由Tfh细胞分泌。IL21直接调节GC B细胞的高亲和力抗体的开发和生产，但它在Tfh分化中的作用^{仍有争议。}PD-1 和 CXCR5 现在最常用于识别流细胞学分析中的 Tfh 细胞，它们也在这个子集的分化和功能中发挥着重要作用。CXCR5是B细胞卵泡化学素的受体，并调解Tbh细胞在B细胞卵泡⁹的本地化。PD-1现已确定不仅具有卵泡导引功能，而且在GC B细胞亲和力成熟¹⁰的过程中传输临界信号。基于这些发现，评估这些分子的表达基本上可以反映Tfh细胞的成熟和功能。

GC 是继发淋巴器官中的诱导瞬态微解剖结构，高度依赖 Tfh 细胞，因此是评估 Tfh 反应的完美读出。在GC中，在接收细胞因子和共刺激分子调停的信号后，B细胞受到类开关和体细胞多造，以产生高亲和力抗体^11。差异抗体类切换发生在差异细胞因子利基，其中IL4和IL21诱导IgG1类切换，而IFNγ诱导IgG2类开关^12。等离子体细胞是分泌抗体的产生者，是最终分化的细胞。与Tfh细胞一样，GC中B细胞的发展与许多重要分子的动态表达有关。根据目前的研究，GC B细胞可以识别为^{B220+PNA+Fas+}或B220+GL7+Fas+细胞和等离子体细胞，与其前体相比，B220的低调节表达和向上调节CD138表达^13。此外，这两种特征都可以在流动细胞学和免疫荧光分析中检测出来，从而对GC反应进行适当的评估。

在流感病毒感染中诱导强大的细胞和幽默反应，Tfh和Th1细胞主导^CD4+T细胞反应^14，这使得它成为Tfh细胞分化研究的完美模型。甲型流感/波多黎各/8/34 H1N1（PR8），这是一种常用的适应鼠标的菌株，在这项研究中经常使用14，15，16。在这里，我们描述了流感病毒感染中Tfh研究相关检测的一些基本方案：1）PR8病毒的鼻内接种：2） 抗原特异性Tfh细胞、GC B和血浆细胞以及IL21检测与流细胞学：3） GC的组织学可视化：4） 检测抗原特异性抗体滴度在血清与 ELISA.这些协议为与Tfh相关的研究中的新研究人员提供了必要的技术。