捕虜のアノフェレス蚊に餌を与えるために、血液のない人工食餌の処方のためのプロトコルが提示される。この食事は脊椎動物の血液と同様のパフォーマンスを有し、卵形成および卵の成熟を引き起こし、実行可能な成人の子孫を生み出す。
マラリアの研究は、捕虜の蚊(アノフェレスspp.)のための大規模な繁殖と生産条件を必要とします。蚊の持続可能で信頼性の高い生産は、現在、新鮮な脊椎動物の血液の供給によって阻害されています。血液の代替は、マラリアや血液を与える昆虫によって伝染する他のベクター媒介性疾患の効率的な制御戦略を促進するために必要とされる。このことを念頭に置いて、人工液体食は新鮮な脊椎動物の血液の代用品として処方された。ここでは、血液に似た摂食率を提供し、新鮮な脊椎動物の血液食事の生理学的効果を模倣する無血人工流動食を報告します。食事は、アノフェレス蚊の卵巣および卵の成熟を誘発し、また、良好な幼虫の生存と機能的な成人の発達を生み出す。定式化された無血流動食は、捕獲中の持続可能な蚊の繁殖に向けた重要な進歩であり、蚊のコロニーの維持コストを削減し、新鮮な脊椎動物の血液の必要性を排除します。
ベクター媒介性疾患は世界中で数百万人の人間に影響を及ぼし、毎年何百万人もの死者を出しています。感染宿主から血液を食べるときに取得した病気を生み出す微生物(原虫、ウイルス)に感染した昆虫によって伝染する。その後、感染したベクターは、次の血液中に病原体を新しい宿主に伝える。マラリアは、アノフェレス蚊のいくつかの異なる種によって伝染し、世界の人口の40%に影響を与える最も致命的なベクター媒介性疾患です。マラリア原虫の寄生虫は毎年40万人以上の死亡を引き起こしており、そのほとんどが5歳未満の子供(世界保健機関)です。雌のアノフェレス蚊は、脊椎動物の血液を食べるときにヒトと他の動物との間でマラリア原虫を伝染させる、卵の生産および発生に必要なステップ2。
マラリアやその他の新興の致命的な蚊媒介性病の根絶のための現在の戦略は、昆虫で飼育された多数の蚊の野生への放出を含む革新的な蚊対策戦略3、4、5の開発に依存しています。しかし、重要な制限要因は、効果的な蚊の飼育と繁殖のための新鮮な血液の供給への依存である。脊椎動物の血液の可変組成は、蚊の生殖能力と子孫のフィットネスに悪影響を及ぼし、捕虜繁殖コロニーの信頼性と持続可能性を制限することができます。蚊の放出および制御プログラムは、大規模な蚊の生産システムと脊椎動物の大量の血液の定期的な供給を必要とします。これは蚊の生産の大きな障害であり、関連する厳しい安全規制によって引き起こされる生きている動物の使用と物流上の制限に関連する一連の倫理的問題を提起する。これにより、蚊のコロニーの維持とセキュリティのコストが高くなり、マラリアの脅威がはるかに大きい低所得国では、現在の蚊の飼育慣行の持続可能性に課題があります。
最近の研究は、脊椎動物の血液食事を模倣する血液代替物の開発に焦点を当てていますが、これまでのところ、限られた成功は6、7、8、9を達成しました。成功した人工食は、(1)完全な女性の蚊のうろこしを引き起こし、(2)ビテロゲニン産生を引き起こし、(3)生存可能な卵の大きなバッチを産生し、(4)ヒース子孫10を生成する必要がある。さらに、人工食は標準的な組成を有し、したがって、研究および制御目的のための蚊の生産のためのより信頼性が高い。成功した無血食は、Aedes蚊(ゴンザレスとハンセン11によってレビューされた)のために開発されましたが、アノフェレスのスップのためには開発されていません。既存の人工食には、卵成熟6,12のタンパク質源である貪食剤(例えば、ATP10)が含まれています。人工血液のない食事はまた、卵の生産を改善するコレステロール15を提供する必要があります。ここでは、女性のアノフェレス蚊のための人工無血食事を説明し、それが高品質の脊椎動物の血液食事に一貫した同等の性能を有することを実証する。
私たちの処方された無血食の成功は、i-liq_diet(糖、アミノ酸、ビタミンおよび微小元素が豊富)に添加されたすべての成分の相乗的な生理学的効果の結果である可能性が高い:BSA(タンパク質源)、ATP(ファゴ刺激性)およびコレステロール(脂質源)。個々の成分のみでのr-liq_dietの補充は、卵の生産を刺激するのには効果がなかった(データは示されていない)。プロトコルの欠点の 1 つは、コレステロールなどのコンポーネントの一部のコストです。それでも、昆虫はそれを合成することができないので、その存在は基本的であり、この分子は節足動物20の卵胞合成および卵の成熟を調節するエクジステロイドホルモンの前駆体である。コストを削減し、人工食餌の利点を高めることの目的で必要な量を最適化するためにコレステロールの低い量をテストする必要があります。.
この方法のもう一つの制限は、人工食餌がストック溶液から新鮮に調製されなければならないということです, 一度その最終的な液体の形で準備されるように、それは貯蔵後の品質を失います.将来的には、私たちの配合された食事は、SkitoSnackt、Aedes aegypti蚊21の人工血液食事の代替品と同様に、乾燥した力として準備することができます。
必要な栄養素を供給するだけでなく、人工的な食事は、脊椎動物の新鮮な血液を食べるのと同じ方法で餌を与えるためにメスの蚊を引き付け、刺激する必要があります。本明細書に記載されている人工無血食事は、脊椎動物の血液供給群と比較して、完全に充満した雌の蚊の20%の増加をもたらした。この間接的な魅力の尺度は、オルファクトメーターを使用して、人工食が新鮮な血液よりも蚊にとってより魅力的で魅力的であることを確認することによって、さらに明確にすることができる。
血液に餌を与えた蚊に由来する幼虫に対する幼虫の死亡率に対する食事の最も高い影響が観察され、安定した組成の人工食が新鮮な血液と比較して死亡率を減らし、蚊の繁殖成功を改善するのに役立つ可能性があることを示唆した。血液食事の予測が少ない結果は、組成物17の宿主変動および蚊の生理学を妨げる可能性のある分子の血液中の存在から生じ得る22。上記の事実は、新鮮な無血食事の高品質の蚊の飼育の利点を強調しています。
我々の研究で産まれた卵の平均数は、いくつかの昆虫で報告されたものに比べて低かったが、卵卵の平均数は、ヒト血液(22.6 ±5.5卵/女性)に供給されるA.ガンビア実験室飼育株に匹敵した。新鮮な血液または人工食に供給される実験群の間に有意な統計的差は認められなかった(表2)、我々の調合された食事を用いた人工膜摂食システムの実施は、捕虜の蚊のコロニーを維持し、伝播するのに十分であることを示唆した。
人工無血の食事は、Aedesコロニー22を維持することができますが、アノフェレス蚊に適用すると、それらは限られたまたは成功しない11です。最近、アノフェレス蚊のためのプラズマベースの人工食事が24と記載されたが、摂食率と生殖能力は低かった。我々の結果は、我々の式化されたr-liq_dietが標準的な脊椎動物の血液食事と同様またはより良い性能を有していたため、最先端の(ゴンザレスとハンセン11によってレビューされた)の大幅な進歩を表しています。ストレージの安定性とコストのさらなる改善は、そのアプリケーションの範囲を広げる必要があります。
The authors have nothing to disclose.
カノフェレス蚊のコロニーを維持するためのディノラ・ロペス(IHMT-NOVA動物施設)、ジョアナ・ゴメスとアナ・カタリナ・アウベス(IHMT-NOVA昆虫施設)に感謝します。ビル・アンド・メリンダ・ゲイツ財団(OPP1138841)が出資し、ファンダソン・パラ・ア・シエンシア・エ・テクノロジア(UID/Multi/04413/2011、UID/マルチ/04326/2013、SFRH/BPD/89811/2012、CEECIND/0045/20017)
Adenosine 5'-triphosphate (ATP) disodium salt hydrate | Sigma Aldrich | A2383 | |
BSA-Bovine Serum Albumin | Sigma Aldrich | A790G | |
Cholesterol | MP Biomedicals | 199342 | |
Dulbecco's modified Eagle's medium (high glucose with L-glutamine) | Lonza Bioscience | BE12-604F | |
Entellan mounting medium | Merck | 1079610100 | |
Glassfeeder | Local glazier | by design | |
Heparin Sodium Salt | Pan Reac AppliChem | A3004,0001 | |
Imalgène 1000 | Merial, Portugal | 01MER122 | |
Needle 20 G x 1" 0.9 x 25 mm needle | Terumo Europe | NN-2025R | |
Parafilm | Sigma Aldrich | P6543-1EA | |
Rompun | Bayer, Portugal | 7427831 | |
Sterilization Millex-HV 0,45 | Millipore | SLHVR25KS | |
Syringe, 1ml, 27 G x ½" 0.4 x 12 mm needle | Terumo Europe | BS-NIN2713 | |
Teich Mix Astra Pond | Astra | 4030733100957 | |
Tetra Goldfish Flakes | Tetra | 4004218742642 |