마우스의 행동 적자의 초기 지표로 둥지 건물 행동

모든 절차는 조지 메이슨 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었으며 실험실 동물 관리의 평가 및 인증에 의해 규정 된 지침에 따라. 1. 평가 전 동물 및 고려 사항 이 프로토콜의 경우, 성인, 9-12개월 된 C57BL/6J(n=10) (스톡 # 000664) 야생형 마우스 및 APOE e4 마우스(n=11)를 헤미소지고스 J20(스톡 #006293) x 동질구스 APOE e4(재고 #012307) 크로스를 사용한다. 하우징 룸에서, 적절한 농축을 가진 동성의 리터메이트를 가진 그룹 하우스 마우스(예를 들어, 이 프로토콜의 경우, 마우스는 러닝 휠, 이글루 및 작은 나일론 츄 토이를 제공하였다). 그룹 하우스 4 – 6 암컷 마우스, 및 4 수컷을 356 mm L x 485 mm W x 218 mm H 홈 케이지.참고: 연구원은 마우스가 중첩 시험 후에 재도입될 때 케이지 메이트 침략을 피하기 위하여 중첩 전후전략을 실행하는 것을 고려할 수 있습니다. 이러한 전략은 행동 시험, 연구원 및 축산 직원19,분리 및 개별적으로 주택 공격적인 마우스를 처리하는 동안 취급하는 마우스를 더 잘 적응시키기 위하여 행동 시험 의 앞에 매일 취급을 포함할 수 있습니다, 또는 케이지 내 싸움의 중증도에 따라홈케이지(20)의마우스 수를 줄이거나, 관찰된상처(21)등 2. 방 및 중첩 설정 각 마우스가 4개의 시험(평가판당 1개)을 완료해야 합니다. 순서 효과를 피하기 위해 각 마우스에 대한 중첩 재질의 순서를 임의화합니다. 별도의 테스트 룸에서 케이지를 준비합니다. 환경 조건(예: 22.2 – 22.3°C, 습도 45-47%, 오전 9:00 – 오후 9:00)을 기록하여 시험 전반에 걸쳐 일관되고 하우징 룸과 동일합니다. 음식과 물 광고 libitum을제공합니다. 각 마우스에 임의 식별(ID) 번호 또는 문자를 할당합니다. 임의 식별자 카드를 29.2 x 18.4cm 케이지에 부착합니다. 원래 동물 ID/태그 및 기타 필요한 신분증을 식민지 기록에 기록하여 조수 및 축산 직원이 조건에 눈이 멀지 않도록 합니다. 야생형 및 형질전환 마우스가 부적절하게 분리되지 않도록 시험실에서 무작위로 케이지 배치를 주문합니다(즉, 방 의 반대편, 별도의 선반 등). 케이지 의 바닥을 충분히 덮어 중첩 재료를 준비합니다. 정사각형, 트위스트, 파쇄된 종이 시험에 는 옥수수 침구의 약 100g의 건조 중량과 소프트 코브 시험을 위한 소프트 코브 침구약 100g을 사용하십시오. 비커를 사용하여 중첩 재료를 분산시키는 경우 비커를 100mL 이하의 옥수수 침구 또는 부드러운 코브 침구로 채웁니다. 마우스를 케이지에 도입하기 전에 순서대로 첫 번째 중첩 재질을 배치합니다. 이 프로토콜은 (1) 단일 압착 면 사각형, (2) 단일 용지 트위스트, (3) 소프트 코브 침구 100g (즉, 추가 침구 또는 중첩 재료 추가 없음), 그리고 (4) 2.5 g의 깨끗한 (잉크 없음), 5 – 7cm 스트립으로 잘라 낸 흰색 프린터 용지를 활용합니다. 그림 1(기준선)에 표시된 대로 중첩 재질을 분산합니다. 그림 1: 각 재질에 대한 케이지 설정. 모든 마우스는 총 4개의 시험을 위한 물자의 각 모형을 가진 1개의 예심을 완료했습니다. 옥수수 침구는 종이 트위스트, 압착 면 사각형, 파쇄 된 종이를 포함하는 케이지의 전체 바닥을 줄 지어. 부드러운 코브 침구는 쥐가 옥수수에서 작은 면 사각형을 분리하도록 장려하기 위해 케이지에 고르게 분산되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. 3. 네스팅 트라이얼 라이트 사이클이 시작될 때 같은 시간에 첫 번째 중첩 시험을 시작합니다(예: 오전 9:00). 쥐가 들어있는 홈케이지를 시험실로 가져온다. 홈케이지에서 각 마우스를 제거하고 케이지에 이미 배치된 재질로 지정된 중첩 케이지에 놓습니다. 홈케이지를 하우징 룸으로 되돌려 놓습니다. 마우스가 방해받지 않고 24시간 동안 1회 시험을 완료하도록 허용하십시오. 첫 번째 시험이 시작된 후 24 시간, 시험실로 돌아갑니다. 케이지 뚜껑을 조심스럽게 제거하고 각 마우스의 둥지를 사진으로 촬영하여 사진에 할당된 ID를 캡처하고 케이지 외부의 재료 모양을 최소화합니다.참고: 마우스가 새장에서 마우스를 제거하기 전에 중첩에서 벗어날 때까지 기다립니다. 마우스가 케이지에 있지만 둥지에서 벗어난 상태에서 둥지를 촬영하는 것이 좋습니다. 촬영 전에 케이지에서 마우스를 제거하려고 하면 마우스가 깜짝 놀랄 수 있으므로 마우스를 위로 이동하여 중첩 된 재료를 분산시킬 수 있습니다. 중첩 케이지에서 마우스를 부드럽게 제거하고 임시 케이지에 놓습니다. 침구 및 중첩 재료를 폐기하고 침구를 교체하고 순서대로 다음 중첩 재료를 제공하고 마우스를 중첩 케이지로 반환합니다. 필요에 따라 4번의 시험 모두에 대한 점수를 얻으려면 계속 반복하십시오. 연구원은이 프로토콜에서 논의 된 대체 자료를 사용하는 데 관심이있을 수 있지만 파쇄 된 논문과 그에 수반되는 점수 기준을 사용하는 것이 좋습니다. 모든 시험이 완료되면, 그들의 홈 케이지에 마우스를 반환합니다. 잠재적인 공격적인 행동에 대 한 마우스를 관찰. 침략은 오래된 야생형 남성에서 생길 수 있습니다.참고: 이 프로토콜의 목적을 위해, 마우스는 대략 9-12 달에 한 번 시험되었습니다. 중첩은 여러 연령대에서 수행되어야한다 (즉, 이전 나이에, 선택된 변형에 의존, 현상학적 특성의 발병 전에) 시간이 지남에 따라 중첩 용량의 감소를 문서화하고 신경 변성의 가능성이 원인 역할을 입증. 4. 평가자 간 신뢰성 평가 및 평가 각 중첩 자료에 대한 기준 이미지를 연구에 눈이 먼 2명 이상에게 제공합니다. 필수는 아니지만 득점선수가 중첩 의 개념에 익숙한지 확인하십시오. 점수를 훈련할 때, 일련의 예제 중첩(예: 파쇄된 용지의 경우 그림 2)을 제공하여 점수자를 각 유형의 재료(해당하는 경우) 및 채점 기준에 익숙해지게 합니다. 다음 척도 정보(집사, 2006년)를 사용하여 각 둥지를 1 -5의 척도로 평가합니다. 파쇄된 용지를 사용한 점수 매기기 예는 그림 2를 참조하십시오. 파쇄 된 종이 또는 작은 사각형이 케이지 전체에 흩어져 있거나 면 사각형이나 트위스트가 그대로 남아있을 때 1 점수를 할당합니다. 재료의 일부가 둥지로 건설 될 때 2의 점수를 할당하지만, 재료의 50 % 이상이 둥지 건설에 사용되지 않았다 (즉, 흩어져 남아 있거나 원래 재료의 대부분은 그대로 남아); 눈에 띄는 둥지가 구성될 때 3점을 할당하지만, 여러 조각이 여전히 흩어져 있습니다. 거의 모든 재료가 둥지에 사용되었을 때 4의 점수를 할당하지만, 재료의 몇 조각이 흩어져 남아 있거나 둥지 근처에 있었다; 모든 재질이 식별 가능한 둥지를 만드는 데 사용되었을 때 점수를 5로 지정합니다.참고: 득점선수는 채점 절차 중 피로와 편견을 피하기 위해 휴식을 취하고 기준 사진을 다시 방문해야 합니다. 득점선수는 편견을 피하기 위해 서로 점수를 논의해서는 안됩니다. 점수가 완료된 후 점수를 논의하거나 점수를 변경하기 위해 추가 논의가 필요한 경우 점수를 변경해야 하며, 이는 잠재적으로 클래스 내 상관 관계(ICC)와 관련된 문제를 해결할 수 있습니다. 클래스 내 상관 관계는 섹션 4.2에 나열된 단계를 사용하여 수행됩니다. 도 2: 파쇄된 용지에 대한 기준을 사용하여, 바람직한 재료의 채점예. 왼쪽에서 오른쪽으로: 1 – 파쇄 된 종이는 손길이 닿지 않은 채로 남아 있었다. 2 – 종이의 일부는 둥지로 지어졌지만 조각의 대부분은 흩어져 남아 있었다; 3 – 눈에 띄는 둥지가 건설되었다, 하지만 여러 조각은 여전히 흩어져 있었다; 4 – 대부분의 조각은 둥지에 사용되었지만, 일부 조각은 둥지 근처에 흩어져 있었다; 5 – 모든 조각은 둥지를 만드는 데 사용되었다. 사진에서 동물의 할당된 번호는 눈이 멀지 않도록 표시됩니다. 카드의 색상은 무작위입니다. 연구원은 마우스를 놀라게 하지 않도록 케이지에 남아 마우스를 허용 해야 합니다., 잠재적으로 둥지를 분산 수 있는. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. 각 자료에 대한 각 점수의 점수가 별도의 열에 있도록 점수를 수집하고 입력하고 데이터 파일을 포맷합니다.참고 : 보충 파일 1을사용하는 경우이 분석을위한 코딩 스크립트는 무료 오픈 소스 소프트웨어 (예 : RStudio의 irr 패키지)22,23이필요합니다. 스크립트는 클래스 내 상관 관계(ICC)를 수행하기 위해 헤더 및 주제 변수(즉, 위쪽 행 및 동물 아이디)를 제거합니다. 스크립트를 실행하여 양방향 계약을 수행하고 코드의 경계 된 섹션을 강조하고 Ctrl +Enter 또는 Command +Enter를 누르고 ICC를 평균화합니다. ICC를 기존 기준24,25,26과비교합니다. 일반적으로 0.80 이상의 ICC 값은 강력한 평가자 간 신뢰성에 해당하며, 점수는 지정된 시점에서 평균화될 수있습니다(보충 파일 2). 처음으로 점수를 매기는 사람들에게 관심이 있을 수 있는 평가내 신뢰성에 대해 동일한 ICC 기준을 사용합니다.주의: 득점선수는 초기 평가 후 1주일 이내에 동일한 사진의 둥지를 득점해야 합니다. ICC가 낮을 때 데이터를 평균화하면 데이터를 왜곡하거나 null 결과를 생성할 수 있기 때문에 주의해서 진행합니다. ICC 값이 낮은 경우, (1) 득점자를위한 추가 교육이 필요할 수 있습니다, (2) 득점자는 둥지 점수에 대한 자신의 추론을 논의해야 할 수 있습니다, (3) 다른 독립적 인 검토자는 점수에 대한 판단 전화를 할 필요가있을 수 있습니다, 또는 (4) 내 평가자 신뢰성을 평가해야 할 수도 있습니다. 평가자 내 신뢰성이 좋지 않으면 추가 교육이나 다른 득점자가 필요할 수 있습니다. 5. 통계적 고려 사항 통계 분석을 적절히 수행합니다. 정규성 가정을 위반하지 않지만 각 마우스에 대해 여러 재질을 사용하는 데이터의 경우(즉, 피사체 내 효과) 분산(ANOVA)을 혼합분석합니다. 추가 파일로 제공되는 코드를 사용하는 경우 스크립트27,28,29,30에지정된 추가 추가 추가 패키지를 다운로드하십시오. 제공된 스크립트를 사용하여 혼합 ANOVA를 수행하는 경우 스크립트를 실행하여 광범위한 데이터 파일을 긴 형식으로 변환합니다(예: 열 간에 반복되는 변수 대신 셀을 행에서 반복하도록 변환). 이 원고에는 데이터 파일을 와이드 포맷에서 긴 형식으로 변환하는 방법을 보여 주는 예제 데이터 파일이 포함되어 있습니다. 스크립트에 지정된 대로 혼합 ANOVA를 수행합니다. Mauchly의 구형 시험을 위반한 경우 온실 가이저 보정과 같은 수정 요소를 구현합니다. 코딩 스크립트에 명시된 대로 2개 이상의 레벨이 있는 요인 간의 차이점을 검사하기 위해 필요한 사후 테스트를 수행합니다. 이 예제에서는 본페로니 사후 테스트를 수행하여 다양한 유형의 중첩 재료를 비교합니다.참고: 하나의 중첩 재질만 사용하는 경우 주제 내 요소를 통합하지 마십시오. 그러나 여러 시점에서 데이터를 수집하는 경우 이러한 반복 측정값을 마치 주체 내 의 수준 요소인 것처럼 통합합니다.참고 : 어떤 경우에는 야생 형 마우스가 완벽한 점수를 가질 수 있으므로 천장 효과를 나타내며 비 정규 분포2로이어집니다. 데이터를 분석할 때 적절한 통계 테스트(예: 중앙 경향 및 분산의 대체 측정이 있는 비모수 테스트), 정규화 방법 또는 강력한 접근 방식(반복 측정을 위한 혼합 효과 모델링)을 고려합니다.