分离脂肪衍生的再生细胞用于治疗根治性前列腺切除术后的勃起功能障碍

协议中描述的所有方法均已获得丹麦国家伦理委员会（No. 37054），丹麦卫生和药物管理局（EUDRA-CT编号2013-004220-11）和丹麦数据保护局（2008-58-0035）的批准。该研究在 ClinicalTrials.gov（NCT02240823）注册。该研究是根据欧登塞大学医院良好临床实践（GCP）部门监测的赫尔辛基宣言进行的。ADRC制剂在欧登塞大学医院（丹麦卫生和药品管理局，授权号29035）的授权组织机构中进行，用于处理人体组织和细胞。 1. 招募患者/参与者 为了参与试验，招募符合以下纳入标准的患者。 招募 18 岁以上、RP 前性活跃且未感染性传播疾病（例如人类免疫缺陷病毒感染、梅毒或肝炎）的患者。 确保他们在由于前列腺癌而进行的RP后患有勃起功能障碍。注意：在这项研究中，患者在RP后5-18个月被纳入研究，并且无论手术方法如何：开放/机器人辅助或神经分离/非神经分离，都被纳入。 确保前列腺特异性抗原（PSA）的值在RP后的临床随访中必须检测不到。 确保患者在 RP 之前具有性活跃性，并且在 RP 之后仍表示希望保持性活跃。确保在参与之前已尝试使用磷酸二酯酶 5 型抑制剂（PDE5 抑制剂）或前列腺素 E1 （PGE1） 合成类似物进行药物干预，并认为该干预不足。 此外，确保患者腹部或大腿上有足够的皮下脂肪。 如果患者在 RP 期间麻醉下发生严重事件或接受抗凝剂治疗，则将患者排除在试验之外。 2. 抽脂 注意：抽脂是一种从皮下区域去除脂肪或脂肪细胞的手术。该方案的这一部分作为标准抽脂术进行，并且该过程在手术室的无菌条件下进行。根据手术使用的所有器械必须是无菌的，外科医生必须戴磨砂膏，无菌手术服，无菌手套，外科口罩和帽子。 麻醉患者。 确保患者在手术过程中处于全身麻醉状态，并且该部分由麻醉师进行。 用氯己定0.5%消毒腹部和阴囊的皮肤（氯己定精神，96%乙醇药用氯己定二葡萄糖酸盐77%W / W = 83%v / v）。使用手术标记来绘制腹部将要进行抽脂的区域。该区域通常是联合和脐带之间的区域。 用手术刀在腹部皮肤上做两个6毫米宽的切口（数字11）。从抽脂的上抽屉区域对称和横向放置切口。 在切口上放一点凡士林等润滑剂，以确保在抽脂过程中渗透套管容易地滑入和滑出切口。 通过皮肤的切口引入14 G尺寸的浸润套管。将改良的Kleins溶液皮下注射在与皮肤表面平行的标记区域。注入如此多的溶液，使目标组织变得肿胀和坚硬，或肿胀。注意：改良的Kleins溶液由1，000 mL林格斯乳酸盐和1mg肾上腺素（肾上腺素（1：1，000，000））的溶液组成。不要对溶液进行局部麻醉，因为它可能对ADRC产生负面影响。 注入一定体积的改性Kleins溶液，其对应于与脂肪组织的比例为1：1。 等待10分钟，以最大限度地发挥肾上腺素的作用，并减少收获的脂肪组织中的血液量。 使用喷射输液抽脂术进行标准抽脂，以收获200-300 mL脂肪组织。使用中空的钝插管，输液管和喷嘴集成在其上。将套管连接到抽吸装置上进行抽脂。注意：连续的扇形水输注将脂肪组织松动成碎片，这些碎片可以通过套管的开口轻松吸出。 引入一个3毫米注射器，通过腹部切口钝尖 将脂肪组织收集在脂肪收集器中，以在无菌环境中保存脂肪吸汗物。脂肪代汗液将开始与水相分离。 使用50 mL无菌注射器从脂肪收集器中吸出脂肪吸汗。 尽量减少注射器中吸入的水的体积，并拧上注射器尖端的塞子以保持脂肪组织无菌。 将尖端向下的注射器放在无菌塑料袋中，开始将脂肪吸汗物与水相分离。将袋子放入无菌容器中，尖端朝下以继续分离。 用无菌垂坠覆盖容器，以确保运输过程中的无菌环境。注意：根据用于隔离的机器的用户手册，脂质吸汗物在分离ADRC之前最多可以储存4小时，但是，我们总是立即处理它。 用外科医生首选的缝合材料关闭皮肤切口。在腹部周围放置一件压缩衣，腹部粘合剂，以减少术后水肿。 通过注射 20mL 布比卡因 5mg / mL 含有5μg肾上腺素来制造阻滞。 使用20 mL注射器，用23 G针头涂抹，1 1/4英寸长。 在皮下皮的每个象限上应用5mL布比卡因。 将布比卡因注射到两个部位，一个位于腹侧，另一个位于背部。将针头的整个长度引入皮下组织中，将针头横向指向右侧，并在针头缩回时注射麻醉剂。重复注射，将针头指向左侧。注意：患者现在可以由麻醉师从全身麻醉中唤醒。 3. 隔离 注：ADRC的隔离过程按照设备后用户手册中的详细描述执行（参见 材料表）。重要的是，该程序在无菌条件下进行，以确保脂质吸汗物在ADRC纯化过程中不会暴露于任何污染物中。分离ADRC所需的时间取决于脂质吸汗物的体积，但使用半自动装置的整个过程大约需要2.5小时，如此处所述。 将所有耗材和酶无菌地放在用无菌一次性手术巾覆盖的桌子上。注意：手术包包含从一名患者中分离ADRC所需的所有必要耗材和酶。除此之外，还必须提供三个37-39°C，一升的乳酸林格氏剂输液袋以及无菌衣物，手套和毛巾以及乙醇进行消毒。记下所有批次的耗材和酶，以及连接到系统时乳酸林格氏菌的温度。 用乙醇擦拭设备，并按照制造商的说明进行操作 将耗材套装装载到设备上，并将一袋乳酸振铃器连接到系统。 在添加脂质吸汗物之前，执行一系列半自动测试（系统检查和泄漏测试）。 让脂质吸气剂静置在50 mL管中，同时执行3.1中的步骤。这将使脂肪从液相中分离出来。记下脂肪组织的总量（以mL为单位），并使用它来确保负载脂肪的量在设备容量的范围内。 在设备提示时加载组织。现在，该机器将排出多余的液体，并在用乳酸林格清洗之前称重脂肪组织的量。 当组织被洗涤并再次排干时，根据机器的要求，将新的输液袋与37-39°C的乳酸林格连接。 在5 mL乳酸林格子中重建含有胶原酶和蛋白酶混合物的市售酶（一小瓶酶足以容纳高达270 mL的脂肪量）。 确保设备显示与脂肪组织一起注射到罐中的酶的量（基于组织重量）。注射后，在搅拌下进行的酶消化将持续约20分钟。 组织消化后，让搅拌器停止并检查内容物是否分为两个阶段：含有上脂质的黄色相和含有ADRC的下部粉红色层。让后一层排出到耗材组的细胞处理室（进入设备内置离心机）中，同时留下脂质层。 在多轮离心过程中，让ADRC浓缩在细胞处理室中。现在加入10毫升内压酶（含有DNA酶，有助于避免在最终的ADRC悬浮液中结块）在乳酸林格子中重组。酶促反应持续10分钟，然后洗涤ADRC。注意：此步骤是全自动的，当该过程完成时，机器将通知。 当ADRC的分离完成后，将细胞重悬于5mL林格乳酸盐中。将溶液吸入5 mL注射器中。 将 3 通旋塞阀雌性 Luer-lock 安装在装有 ADC 的 5 mL 注射器上，并将 4 mL ADRC 吸入另一个 5 mL 无菌注射器中。 将最后 1 mL 转移到 1 mL 注射器中。使用此 1 mL 进行 ADRC 表征，例如细胞计数、细胞活力、流式细胞术分析表面标志物和 ADRC 分化能力。 在装有4 mL ADRC的5 mL注射器上放上25 G针头，然后将其包装在无菌悬垂物中。使用 ADRC 注入接收方。在这种情况下，ADRCs的溶液平均将包含840-3270万个细胞。 4. 将ADRC植入海绵体 注意：这是一个无菌程序。所有器械必须无菌，将含有干细胞的溶液注入海绵体的人必须戴无菌手套。患者在此过程期间处于清醒状态，并将接受自己的干细胞。注射ADRC时，在注射前不计数细胞。 通过轻轻倾斜注射器直到将其注入海绵体，保持ADRC溶液均匀。 在阴茎上放置一个光圈。使用硅胶血管环在阴茎根部放置止血带。拧紧环并用镊子弯曲的镊子固定。使止血带足够紧，以阻止血液从阴茎流出。 使用两个消毒交换剂在注射部位（海绵体的外侧部位）消毒皮肤。将1mL含有ADRC的溶液以直接角度注入右侧两个不同位置的海绵体中，然后在左侧海绵体中重复此步骤。注射的ADRC的总体积为4 mL。 等待30分钟，然后取下止血带。 注射ADRC后观察2小时后出院，以确保患者在麻醉后恢复良好。 5. 术后护理 建议患者在第一周内不要做任何可以升高血压的身体表现，以防止血肿的发展。 建议患者在手术后的前14天佩戴腹部粘合剂24小时，此后在白天佩戴14天。 使用口服对乙酰氨基酚（例如对乙酰氨基酚;1，000 mg，每日 4 次）和口服抗炎药（例如布洛芬;400 mg，每日 3 次）治疗术后疼痛。