用于同时测量疼痛和瘙痒相关行为的切面注射模型

所有涉及动物护理和使用的程序都经国家自然科学研究所动物护理和使用委员会（16A074）批准，并按照国家研究所的指导方针进行。生理学。 注：史蒂文·希马达和罗伯特·拉莫特4报告了最初的协议，本报告对这些方法进行了几项修改，包括增加了一个防止动物相互看见的屏幕，没有镜像，每次记录的小鼠数量、小鼠应变、笼大小和录制时间。 1. 清爽注射模型 实验准备 笼 在摄像机下设置四个保持架，如图1所示。设置屏幕以防止鼠标看到对方。将每只老鼠放入每个笼子，并设置一个丙烯酸盖，以防止老鼠逃跑。请注意，应在温度、湿度和声音可控的环境中进行录像。注：如果保持架足够高，也可以记录行为，而不盖盖子。 针头和注射器 使用 29 G 或 30 G 针头连接到 0.5 mL 注射器，用于注射测试物质。如果测试物质溶液是高粘性，则需要更大的针头。但是，请注意，大针会带来额外的物理副作用。注：可以使用用聚乙烯管连接到注射器的针头。 摄像机 使用具有足够大帧速率（30-60 帧/秒）且分辨率相对较高的摄像机来测量刮伤和擦拭行为。 视频分析软件 使用视频编辑软件进行视频播放和分析。请注意，需要快进模式和逐帧播放模式才能进行精确分析。 图1：摄像机和笼子设置。四个丙烯酸笼，带丙烯酸盖，以防止老鼠逃跑，并使用屏幕防止传染性瘙痒。请点击此处查看此图的较大版本。 注射和录制 在实验前一天，用剪发器在老鼠的脸颊上剪毛（电影1）。剃须前，不要限制小鼠。注：CD-1或C57BL/6小鼠主要用于本型号4，5。在本文中，使用雄性6-12周大的C57BL/6N小鼠。请注意，对化学物质的敏感性在小鼠菌株3、6、7之间可能不同。 剃须后一天，将鼠标移到记录保持架 1 小时，使其适应录制条件。如果使用局部应用，请在此适应期间应用它。注：在本报告中，在记录前30分钟，在盐碱中局部施用盐中的盐二苯氢胺盐的10 μL为2%（w/v）。 在保持架上方设置摄像机，并在测试物质注射前开始视频录制。在清醒条件下，将测试物质的10μL溶液以贸易方式注入被切过的脸颊（电影2）。注射后，将鼠标返回到记录保持架。注：在本报告中，使用50μg/10 μL组胺、40微克/10μL辣椒素或车辆（7%补间80分盐）作为测试物质。 关闭保持架的盖子，继续录制 30 分钟。注：总记录时间取决于实验条件。 行为分析 分别计算划痕和擦拭行为。老鼠抬起一条后腿朝脸颊，在一或几秒钟内抓了几次，然后把腿放下。这一系列动作被计为一次刮伤回合。不应计算其他领域的划痕。小鼠使用单个前腿进行擦拭，两个前腿用于梳理。这些行动应当加以区分。只有擦拭行为才算作与疼痛相关的行为。注：每个动作都显示在图2，电影3，电影4和电影5。 图2：记录期间的典型鼠标活动。面板 A-C 是表示右前腿（A） 的擦除行为的插图，右后腿（B）的抓伤行为，以及两个前腿（C） 的修饰行为。老鼠抬起一条后腿朝脸颊，在一或几秒钟内抓了几次，然后把腿放下。这一系列动作被计为一次刮伤回合。不应计算其他领域的划痕。小鼠使用单个前腿进行擦拭，两个前腿用于梳理。这些行动应当加以区分。只有擦拭行为才算作与疼痛相关的行为。请点击此处查看此图的较大版本。 2. 颈部注射模型 注射和录制 在实验前一天，在大约5%的离法胶吸入2-3分钟后，用剪发器将小鼠颈部的毛皮剪过2-3分钟。 剃须后一天，将鼠标移到记录保持架 1 小时，使其适应录制条件。 将摄像机设置在保持架上方（图1），并在测试物质注射前开始录像。在清醒条件下，将测试物质的10μL溶液在注上，注入被检查的颈部。注射后，将鼠标返回到记录保持架。注：在本文中，50 μg/10 μL 组胺、10 μg/10 μL 或 40 μg/10 μL 辣椒素或车辆 （7% 补间 80 种盐水） 用作测试物质。 关闭保持架的盖子，继续录制 30 分钟。注：总记录时间取决于实验条件。 行为分析 计算划痕回合行为。老鼠抬起一条后腿朝颈部，在一或几秒钟内刮了几次，然后把腿放下。这一系列动作被计为一次刮伤回合。不应计算其他领域的划痕。注：刮伤的动作类似于脸颊注射模型，只不过刮伤的位置转移到颈部。