Diagnóstico de doença de Hirschsprung por biopsias de sucção retal imunocoloração para Calretinina, proteína S100 e proteína gene produto 9,5

Hirschsprung ‘ a doença de s (HD) é uma desordem intestinal congenital comum do intestino caracterizada por uma falta de pilhas do gânglio em segmentos diferentes do intervalo intestinal longe do ponto de origem¹. O sistema nervoso entérico humano é formado quando a invasão das células neurais embrionárias é completada. Se há uma perturbação do processo e a invasão não termina, o intestino distal do recém-nascido torna-se aganglionic². Esta condição potencialmente fatal é chamada de doença de Hirschsprung. Proliferação, motilidade e crescimento intestinal são os três principais componentes da colonização bem-sucedida.

A coloração tradicional da hematoxilina e da eosina (H & E) de uma biópsia submucosal limitada não pode alcançar como satisfatório de um resultado como a mancha de H & E de um tecido da cheio-espessura obtido da cirurgia. Adicionalmente, a coloração da acetilcolinesterase (ache) do tecido de sucção retal é teoricamente desafiadora devido à sua sensibilidade inadequada, que é de 91%, e processamento complexo de seções congeladas^3,4. Diversos outros marcadores immunohistochemical de pilhas do gânglio e de fibras de nervo que podem ser manchados em espécimes formalin-fixos e parafina-incorporados estão transformando-se gradualmente os diagnósticos mainstream de HD. A calretinina é uma proteína de ligação ao cálcio dependente da vitamina D que não é expressa no plexo mientérico e submucoso dos segmentos afetados pela DH⁵. A proteína S100 é expressa em células derivadas da crista neural, como fibras nervosas e células gliais, que muitas vezes apresentam hipertrofia neural no tecido submucoso de segmentos afetados pela DH⁶. O produto do gene da proteína 9,5 (PGP 9.5) mancha confiantemente fibras de nervo e pilhas do gânglio; A mancha de PGP 9.5 actua como um suplemento à mancha do calretinin, especial nos casos do hypoganglionosis isolado. A coloração dupla com S100 e PGP 9.5 pode diminuir a taxa falsa-negativa e aumentar a sensibilidade. Como pré-requisito, o presente estudo tem como objetivo garantir a especificidade adequada e a alta sensibilidade deste novo método de diagnóstico. Nosso protocolo novo usou todos os três marcadores para a discriminação do intestino aganglionic e das fibras de nervo hipertrófica. Um estudo prospectivo de 318 crianças foi realizado por nosso laboratório e previamente publicado sem um protocolo detalhado⁷. O protocolo detalhado e as precauções são discutidos neste artigo. Todos os neonatos que sofram de um problema severo da defecação desde o nascimento ou as crianças com constipação crônica que exclui outras doenças comuns são candidatos potenciais para a biópsia rectal da sucção (RSB). Nosso protocolo novo é apropriado para manchar não somente RSBs mas igualmente biópsias da cheio-espessura ou espécimes cirúrgicos para fazer um diagnóstico final.