生物医学微流体折射率匹配器件的研制
Summary
该协议描述了微流控器件从 MY133-V2000 制造, 以消除由于微通道结构与水溶液之间的折射率不匹配而经常出现在微中的工件。该协议使用丙烯酸的持有人压缩封装的设备, 提高附着力的化学和机械。
Abstract
微流控装置的使用已成为生物医学应用的一个定义工具。当结合现代显微技术, 这些设备可以实现作为一个强大的平台的一部分, 能够作出同时互补测量。这两种技术的结合所产生的主要挑战是传统上用于制造微流控器件的材料与通常用于生物医学的水溶液的折射率不匹配。这种不匹配会在通道或设备边缘附近创建光学工件。一种解决方案是通过使用含氟聚合物 (如 MY133-V2000 的折射率与水 (n = 1.33) 类似) 来减少用于制造装置的材料的折射率。在这里, MY133-V2000 用软光刻技术制造出的微流控装置, 利用 O2等离子与丙烯酸保持架结合, 提高了 MY133-V2000 制造装置与烷基板。然后用细胞培养培养基填充24小时来测试该装置, 以证明该装置在典型的成像实验过程中保持细胞培养条件的能力。最后, 定量相镜 (QPM) 用于测量微通道内活黏附细胞内的质量分布。这样, 就能通过从低折射率聚合物 (如 MY133-V2000) 中制备器件来代替传统的软光刻材料 (如。总的来说, 这种制造微流控器件的方法可以很容易地集成到现有的软光刻工作流中, 以减少光学工件, 提高测量精度。
Introduction
微流控技术的发展已使多种新的生物医学技术能够利用微观尺度流的独特物理1,2。这包括在微流控平台上建立的诊断技术, 量化临床相关生物标志物, 包括细胞刚度3、表面标记4和生长5。通过操纵单细胞, 微流控装置也可用于测量生物标志物的异质性, 例如作为恶性肿瘤6的指示器。将微流控应用与显微技术结合在一起的能力进一步增加了这些平台的效用, 允许同时测量多个生物标志物7的设备。
QPM 是一种显微技术, 用于测量光通过时的相移, 并与透明样品内的物质相互作用。通过使用折射率与生物量密度8、9之间的已知关系, 可以从 QPM 测量中计算出单个细胞的质量。先前的研究表明, QPM 能够通过紊乱强度12测量临床相关参数, 如细胞生长10、11和细胞机械性能。当与微流体结合时, QPM 可能被用来测量体外高度控制环境中细胞的行为。QPM 与微流体相结合的主要挑战之一是,通过软光刻13, 大多数聚合物用于构造微流控通道的高折射率。
微流体与各种显微技术相结合所面临的一个重要挑战是器件材料的折射率相对于水的折射率14,15的不匹配。解决这一问题的一种方法是使用低折射率聚合物, 如 CYTOP16或 MY133-V200013。后者是一种氟化紫外 (UV) 固化丙烯酸酯聚合物, 具有类似于水的折射率 (n = 1.33), 并且与软光刻技术兼容, 允许平滑地融入许多已建立的微流控设备制造工作流。这使得 MY133-V2000 不仅适用于微流控设备的制造, 而且还允许它与 QPM 和其他显微方法相结合, 测量细胞在菌落和单细胞尺度上的行为。MY133-V2000 消除了由于相位解缠而产生的工件, 如光通过 water-MY133 接口, 则生成很少的相移。
虽然消除了折射率的不匹配, 但与由氟化聚合物 (如 MY133-V2000) 制造的器件有关的一个主要挑战是低粘附到其他材料, 如玻璃或硅烷。本工作演示了一种利用软光刻技术制备 MY133-V2000 微流控器件的方法。使用 O2等离子处理通道的表面和与定制的丙烯酸固定器结合, 确保该装置附着在基体上, 形成密封通道。该装置适用于细胞培养和 QPM 测量通道内细胞的质量, 在检测活细胞生长和细胞生物量细胞内转运等方面具有重要的应用价值, 两者在诊断中具有临床意义。医学和药物发现。
Protocol
Representative Results
Discussion
MY133-V2000 可以替代传统的软光刻制造材料, 如新的。以往的研究表明, 具有较高折射率的材料, 例如, 在通道壁附近引入了重要的工件, 这是由于在管道内的制造材料和水溶液之间的折射指数不匹配。13. MY133-V2000 使微流控装置的折射率与生物医学应用中常用的水溶液相匹配。这减少了成像工件时, 结合微流体与先进的显微技术, 提供了明显的优势比传统的微流控材料。该系统使微流?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作得到了犹他大学副会长办公室的支持, 以及与 P30 CA042014 授予洪博培癌症研究所的拨款以及洪博培癌症研究所的 CRR 计划。
Materials
| MY133-V2000 | MY Polymers | MY133-V2000 | |
| Sylgard 184 | Ellsworth Adhesives | 184 SIL ELAST KIT 0.5KG | |
| Fisher Premium microscope slides | Fisher Scientific | 12-544-4 | |
| .118"(3.0mm) x 12" x 12" Acrylic Sheet | United States Plastic Corp | 44290 | |
| .060"(1.5mm) x 12" x 12" Acrylic Sheet | United States Plastic Corp | 44200 | |
| SCIGRIP 3 Very Fast Set Acrylic Cement | United States Plastic Corp | 45735 | |
| Standard Aluminum Foil (.6 mm thick) | VWR | 89107-726 | |
| Kim Wipes | Fisher Scientific | 06-666 | |
| Insta-Cure+ Super Glue | Bob Smith Industries | BSI-109 | |
| 1/8" PVC tubing | McMaster Carr | 5231K55 | |
| McCormick Food Coloring | Target | 13353207 | |
| X-Acto #1 Precision Knife | X-Acto | X3201 | |
| X-Acto #18 Heavyweight wood chiseling blade | X-Acto | X218 | |
| VWR Razor Blades | VWR | 55411-055 | |
| Surface Treated Cell Culture Dishes | Fisher Scientific | FBO12922 | |
| Fibronectin Human Plasma | Sigma-Aldritch | F0895-1MG | |
| Trypsin-EDTA 10x | Fisher Scientific | 15-400-054 | |
| Corning Dulbecco's Phosphate Buffered Saline | Fisher Scientific | MT21030CM | |
| Gibco Penicillin-Streptomycin | Fisher Scientific | 15-140-148 | |
| HyClone Nonessential Amino Acids 100x | Fisher Scientific | SH3023801 | |
| Fetal Bovine Serum | Omega Scientific | FB-12 | |
| Corning DMEM with L-glutamine and glucose | Fisher Scientific | MT10013CV | |
| Trichloro(1H,1H,2H,2H-perfluorooctyl)silane | Sigma-Aldritch | 448931 | Reacts violently with water |
| Ethanol, 200 proof Decon Labs | Fisher Scientific | 04-355-223 | |
| Acetone | Fisher Scientific | A18P-4 | |
| Bel-Art 42025 Plastic Dessicator | Cole-Parmer | EW-06514-30 | |
| Epilog Fusion Laser Cutter, 120 W | Epilog Laser | Epilog Fusion M2 32 Laser | |
| Isotemp Stirring Hotplate | Fisher Scientific | SP88850200 | |
| Ateco 14111 1.5 inch stainless steel cutter | Ateco | 14111 | |
| Pyrex Glass Cell Culture Dish | Fisher Scientific | 08-747B | |
| Radio Frequency Plasma Cleaner | Harrick Plasma | PDC-32G | Used with Oxygen gas |
| Black Hole Laboratories Digivac | Black Hole Laboratories | Model 215 | |
| Intelli-Ray Ultraviolet Oven | Uvitron | UVO338 | |
| Compact Spin Coater | MTI Corporation | VTC-100A | |
| Fisher Brand Isotemp Oven | Fisher Scientific | 15-103-0510 | Forced Air Convection |
| Gilson Positive Displacement Pipette P1000 | Fisher Scientific | FD10006G | |
| HeraCell VIOS 160i | Fisher Scientific | 13 998 212PM |
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