Una medida cuantitativa de especies reactivas de oxígeno y senescencia asociada a fenotipo secretor en fibroblastos humanos normales durante la senescencia inducida por el oncogén

Más de 50 años, Hayflick y Moorhead revelaron que las células normales entren la detención de crecimiento irreversible sobre el agotamiento de su potencial proliferativo después de un cierto número de divisiones celulares¹. Este fenómeno se conoce como senescencia replicativa y se cree que correlaciona fuertemente con la envejecimiento². Aunque la erosión progresiva de los telómeros es considerada una de las principales causas de la senescencia replicativa, varias tensiones celulares, tales como daño del ADN, activación oncogénica y estrés oxidativo, se han divulgado para inducir a otro tipo de senescencia celular se llama “envejecimiento prematuro” o “senescencia inducida por estrés”. Curiosamente, senescencia prematura desempeña un papel supresor de tumor potente sobre la activación de oncogenes como H-Ras y BRAF. Estudios de modelos de ratón y de tejidos humanos han producido evidencia que eran predominante presentes en las lesiones premalignas donde oncogénica Ras y BRAF se activan pero fueron disminuidos en cánceres malignos que se convirtió de biomarcadores de la senescencia celular Estas lesiones^3,4,5. Más allá de su papel en el envejecimiento y la supresión tumoral, senescencia celular se ha demostrado en estudios anteriores para jugar un papel en varios procesos fisiológicos, incluyendo la cicatrización de heridas, reparación de tejidos, vigilancia inmune y desarrollo embrionario⁶.

Aunque la detención de crecimiento ha sido estudiada extensivamente como un sello de senescencia celular⁷, un importante cuerpo de evidencia sugiere que esa especie intracelular de oxígeno reactivo (ROS) también contribuye a la senescencia celular⁸. La elevación de los niveles ROS durante varios tipos de senescencia celular, senescencia replicativa como senectud oncogene-inducida (OIS), originalmente se informó hace décadas^9,10. Más directamente, el tratamiento exógeno con una dosis subletal de H₂O₂ induce senescencia^11,12. La inhibición de enzimas barrido ROS como SOD1, también causa senescencia prematura¹³. En contraste, bajo condiciones de oxígeno ambiente y el aumento de retardo barrido ROS el inicio de la senescencia^10,14,15. Sin duda, estos resultados indican que los ROS son mediadores importantes o determinantes de la inducción de senescencia celular. Sin embargo, cómo ROS contribuyen a la inducción de senescencia celular y cómo se elevan los niveles ROS durante la senescencia celular requieren una investigación adicional.

Estudios recientes han revelado que las células senescentes tienen actividades paracrinas potente sobre vecinos células y tejidos a través de una spas^16,17. En el tejido envejecido, las células senescentes promoción disfunciones relacionadas con la edad del tejido mediante muchas vías a través de spas además de una disminución Autónoma de las células proliferativas. Factores proinflamatorios como la IL-6, IL-8, TGFβ y metaloproteinasas de matriz (MMPs), secretadas por las células senescentes, causan disfunciones relacionadas con la edad del tejido a través de la alteración de la homeostasis del tejido, destrucción de la arquitectura del tejido, senescencia de las células vecinas e inflamación estéril^18,19. Sin embargo, SASPs puede tener efectos beneficiosos dependiendo el contexto biológico. Además, la naturaleza heterogenetic del SASPs depende del tipo de células senescentes y la etapa de la célula, haciendo hincapié en la necesidad de más investigación¹⁹.

Aquí, describimos técnicas basadas en citometría rápidos y sensibles para evaluar los niveles ROS intracelulares durante infecciones oportunistas. Además, se introducen métodos para el análisis de los factores de spas mediante reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real cuantitativa (qPCR) y ELISA.