تمييز واحد من مونوسبيسيفيك وأنماط DFS70 مختلطة أثناء الفحص أنا مع الركازة رواية خروج المغلوب النخبة/DFS70 أبو عبدالله 2
Summary
الأجسام المضادة DFS70 تحاكي الأنماط الشائعة المرتبطة بالمرض جسم النواة مما يجعل صعبة التفسير الدقيق عند استخدام ركائز HEp-2 التقليدية. ويصف البروتوكول مزايا الرواية الركيزة HEp-2 تصميم أكثر من 2 HEp التقليدية في أنا الفرز والتمييز بين الأنماط DFS70 بثقة عالية في كل من مونوسبيسيفيك وأنا مختلطة الحالات الإيجابية.
Abstract
أمراض النسيج الضام الجهازية الذاتية تتميز بتعميم الأجسام المضادة للنواة (ANA). على الرغم من أن هناك العديد من التكنولوجيات المتاحة لفحص ANA، يظل الفلورة غير المباشرة (IIF) باستخدام 2 الخلايا الظهارية البشرية (HEp-2) الركيزة الأسلوب الأساسي والموصى به بسبب حساسيتها الفائقة. ركائز HEp-2 يمكن الكشف عن العديد من أنماط الناجمة عن الأجسام ملزمة لمختلف أوتوانتيجينس البروتين والأحماض النووية موزعة في جميع أنحاء النواة والسيتوبلازم للخلايا. التنوع الكبير في مونوسبيسيفيك وأنماط المختلطة الناتجة عن ردود الفعل الإيجابية على الركازة HEp-2 أيضا إلى تعقيد التفسير ودقة التقارير. من الأمثلة المحددة التي تلقي أكبر قدر من الاهتمام مؤخرا هو كثافة غرامة الأرقط 70 (DFS70) نمط الناجمة عن الأجسام المضادة التي تربط على وجه التحديد لبروتين يسمى عامل النمو ظهارة المستمدة العدسة (ليدجف). عدم وجود رابطة واضحة مع أمراض المناعة الذاتية منهجية محددة ويتفشى في صحة السكان جعلت التفسير الدقيق لنمط DFS70 الهامة. تمييز دقيق DFS70 نمط من أنماط الأمراض المرتبطة باستخدام التقليدية HEp-2 الركيزة التحدي. وعلاوة على ذلك، تعقد تكرار حدوث نمط DFS70 جنبا إلى جنب مع الأنماط المرتبطة بالمرض مثل أنماط متجانسة، الأرقط والمختلطة متجانسة أرقط المشارك تفسير IIF. والهدف من هذه الورقة هو لإثبات فائدة رواية هندسيا الركازة IIF HEp-2 أن يحتفظ بجميع المزايا من الركازة HEp-2 التقليدية بينما توفر في الوقت نفسه القدرة على التمييز بين نمط DFS70 بثقة عالية في كل مونوسبيسيفيك وأنا مختلطة الأمثلة الإيجابية. كذلك الركيزة الجديدة قادرة على كشف أنماط أنا المرتبطة بالمرض سابقا أخفى بنمط DFS70.
Introduction
أنس السمة مميزة ل أمراض النسيج الضام الجهازية وساطة الذاتية1. وتستخدم عدة طرق للفحص وتأكيد لانس. تقنية IIF استخدام بقايا الركيزة HEp-2 الأكثر استخداماً وكثيراً ما أوصى بطريقة لفحص أنس1،2. وعلى الرغم من أوجه التقدم في منهجيات التحليل التشخيصي المرحلة الصلبة مثل إنزيم مقايسة الممتز مرتبط (أليسا) وإنزيم المناعة (تقييم الأثر البيئي) والمناعة تشيميلومينيسسينسي (العملية) وعلى أساس حبة فحوصات متعدد، هو IIF HEp-2 الفحص الأكثر انتشارا الأسلوب بسبب فائدته التشخيصية وتكلفة فعالية1،،من23. تقنيات الفحص المذكورة أعلاه تعتمد على مجموعة محدودة من أصلي المنقي أو autoantigens المؤتلف بينما الاستعدادات أحادي الطبقة خلية HEp-2 في الآبار الشرائح الزجاجية يقدم مجموعة واسعة من أوتوانتيجينس في شكلها الطبيعي، موزعة عبر النواة والسيتوبلازم، أن تتفاعل مع الأجسام المضادة من الأمصال المريض أو عناصر إيجابية، نتج عنه العديد من الأنماط التي ترتبط مع مختلف الظروف الذاتية. وتصنف هذه الأنماط إلى أنماط النووية، هيولى والانقسامية استناداً إلى موقع المستضد في الخلايا. كل نمط ودول الأمراض المرتبطة مستضد/المستضدات وهي تتسم كذلك4. في أسلوب IIF، هي المحتضنة الأمصال المريض والسيطرة على آبار الشريحة الزجاجية التي تمثل ثقافة أحادي الطبقة من الخلايا HEp-2 ثابت مناسب للحفاظ على العديد من أوتوانتيجينس في شكلها الطبيعي. مسموح الأجسام المضادة في الأمصال المريض أو عناصر إيجابية لربط autoantigens قدمها HEp-2 الخلايا على الركازة (الشريحة الزجاجية جيدا) أثناء الحضانة. وظيفة حضانة، الأجسام المضادة غير منضم يتم غسله وهي الكشف عن الأجسام منضم من فئة IgG مع فلوريسسين/fluorescein isothiocyanate (فيتك) مترافق المضادة الإنسان كاشف مفتش. المتقارن ذكرت غير منضم جرفت وتقام كوفيرسليبس الزجاج على رأس الشرائح باستخدام وسيلة متزايدة يحتفظ بردود الفعل ويسهل المراقبة تحت مجهر فلوري. يلاحظ ردود الفعل تحت مجهر الأسفار مزودة بتركيبة تصفية الانبعاثات الإثارة المناسبة التي تم تكوينها وفقا للمراسل المستخدمة (لمراسل فيتك، مجهر تشخيص عادة ما يستخدم مرشحات مع مجموعة الإثارة من 467 -498 شمال البحر الأبيض المتوسط ومجموعة انبعاثات من 513-556 nm). ويدل وجود أنا الأسفار أخضر الساطع هياكل محددة في الخلايا. خلافا لأنظمة الفحص الآلي، يعتمد المنهجية IIF في عملية شاقة للمسلسل تمييع الأمصال والبصرية الإيجابية تحديد أنماط المصبوغة التي تتطلب المستخدم كبير خبرة5،6. وبالرغم من هذه القيود، IIF HEp-2 ما زال الأكثر استخداماً وأوصى الأسلوب للفحص لانس نظراً لتوحيد الجهود المبذولة لتفسير نمط والتسميات بتوافق الآراء الدولي بشأن أنا اللجنة أنماط (المعهد)، زيادة توافر حلول التشغيل الآلي لتجهيز الشريحة IIF، ونتيجة التفسير3.
من بين العديد الأنماط الكشف عنها بواسطة الأسلوب IIF HEp-2، الأجسام المضادة التي تستهدف المنتج جين psip1 (يشار إليها أيضا ليدجف/p75/DFS70)، واكتسبت اهتماما كبيرا في السنوات الأخيرة لعدة أسباب4،5 ،،من67،،من89،10. DFS70 الأجسام المضادة موجودة في التتر عالية في ضوابط صحية، والدراسات حتى الآن قد أخفقت في إثبات ارتباط سريرية مميزة للوجود DFS70 الأجسام المضادة7،،من89 ،10،11،،من1213. معدلات الإبلاغ عن النتائج الإيجابية للأجسام المضادة DFS70 في مختلف الحالات المرضية وافواج صحية تباينا كبيرا بين الدراسات6،،من89،10،14 ،،من1516،17،،من1819،20،21،22،23 ،،من2425،26،،من2728. هو أيضا ميزت نمط مونوسبيسيفيك DFS70 من نمط متجانس أو الأرقط لكن تفسير أنماط متجانسة أرقط مختلطة، والأجسام المضادة DFS70 المضادة المشترك التي تحدث مع غيرها أنس تحديا حتى بالنسبة للقراء الخبراء. الجيل الحالي من IIF فحص الطرق وفحوصات محددة المرحلة الصلبة DFS70 ليست قادرة على التفريق بين مونوسبيسيفيك DFS70 رد فعل من أنماط مختلطة (الشكل 1A، المنطقة المظللة أصفر في الخوارزمية). التفسير الخاطئ لنمط DFS70 متجانسة، الأرقط، أو نمط مختلطة، أو العكس بالعكس، قد آثار خطيرة على رعاية المرضى. البروتوكول استخداماً الحالية كما يلي: مختبرات سريرية توظف عددا من الاختبارات المؤكدة المرحلة الصلبة لانس المرتبطة بالمرض و/أو أسلوب إيمونوادسوربشن على DFS70/ليدجف عند غرامة كثيفة أرقط نمط (AC-2) يشتبه في أنه (الشكل 1A)4،5.
والهدف من هذا البروتوكول لإثبات جدوى رواية هندسيا الركازة IIF HEp-2 (HEp-2 النخبة/DFS70 خروج المغلوب (كو)، وسوف يشار إليها باسم “النخبة” HEp-2) أن يحتفظ بجميع مزايا 2 HEp التقليدية لفحص أنس بينما في نفس الوقت التمييز بين نمط DFS70 بثقة عالية في كل من مونوسبيسيفيك وأنا مختلطة الحالات الإيجابية (الشكل 1B، المنطقة المظللة أصفر في الخوارزمية)5. الركيزة “النخبة” HEp-2 يتكون من خليط التقريبي مادة غير معدلة الخلايا HEp-2 التقليدية وهندستها خلايا خالية من مستضد ليدجف/p75/DFS70 ب نسبة 1:95. الإجراء IIF “النخبة” HEp-2 مطابق للأسلوب HEp-2 التقليدية. تكوين فريد من الركازة “النخبة” HEp-2 لا يحتفظ بجميع مزايا HEp2 التقليدية فحسب بل يمكن تمييز أنماط رد فعل مختلطة الأرقط ومتجانسة من نمط DFS70 في الفحص الأولى أو اختبار عينة (1B الشكل )5. يجب أن يكون المريض الأمصال يكون رد فعل على الشرائح مع الركازة IIF HEp-2 المخفف 01:40 مع فحص تمييع أو وفقا لمعيار مختبر الفردية. ويعتبر رد فعل محدد في 01:40 أو أعلى عيار إيجابية.
في هذه الدراسة، والأمصال الإيجابية السنترومير متجانسة، الأرقط، والنويه، هيولى شبكي/الاحتكار، وأنماط DFS70 التي تنتج إشارة إيجابية متوسطة الحجم (بالنسبة إلى مراقبة سلبية وإيجابية تحكم أنا قدمتها عدة) في الفحص واختيرت تمييع 01:40 لمحاكاة أنماط محددة مونو والمختلطة على ركائز HEp-2 (التقليدية و “النخبة” HEp-2). 01:40 المخفف DFS70 الأمصال الإيجابية كانت مختلطة مع 01:40 تخفيف أنا الفردية المرتبطة بالمرض نمط عناصر التحكم (متجانسة، الأرقط، السنترومير، النوية، أو قصره شبكي هيولى) بنسب مختلفة (التحكم: DFS70 في 100:0، 80:20، 50/50، 20:80، و 0:100) وتقييمها في التقليدية وركائز “النخبة” HEp-2 عقب القياسية IIF الإجراء المبين أدناه.
Protocol
Representative Results
Discussion
الأجسام المضادة على المستضدات النووية وهيولي منتشرة جداً في أمراض المناعة الذاتية جهازية. على الرغم من أن لا تحليل واحد يوفر أفضل ممكن الحساسية والنوعية، IIF HEp-2 يعتبر على نطاق واسع كأسلوب فحص حساسة للغاية وفعالة من حيث التكلفة لأمراض المناعة الذاتية الشاملة2،،من34 . على الرغم من انتشار بروتوكول IIF لأكثر من 50 عاماً، دقة التحليل IIF اعتماداً كبيرا على مهارة الفني، التنفيذ الدقيق من الخطوات الفردية للبروتوكول، والتفسير الدقيق للنتائج باستخدام عليها بشكل جيد مجهر الأسفار. تشخيص أمراض المناعة الذاتية الشاملة لا ينبغي أن تستند نتائج اختبار المصلية واحد مثل IIF HEp-2.
إعادة تشكيل الكواشف عالية الجودة باستخدام المياه (المقطر/منزوع)، واستخدام مكونات مجموعة موحدة (الشرائح مع HEp-2 خلية مونولاييرس ومخفف عينة وعناصر إيجابية وسلبية، قبل المخفف الأمثل فيتك-المتقارن وتصاعد المتوسطة) أثرا إيجابيا على النتائج. يمكن تشجيع تخطي إضافة عناصر تحكم أو عينات في الآبار تفسيرات سلبية كاذبة. تجفيف شرائح في أي وقت بعد إضافة نموذج أو عنصر تحكم يمكن أن ينتج artifactual ردود فعل إيجابية زائفة و/أو أنماط غير ملائمة. غادر المخزن المؤقت الغسيل الكثير على الشريحة أو تجفيف الآبار الشريحة قبل الإعفاء من تصاعد المتوسطة يمكن أن ينتج القطع الأثرية. يمكن أن يؤدي إضافة كمية غير كافية من تصاعد المتوسطة أو توليد فقاعات على سطح الشريحة قبل وضع ساترة ردود الفعل التي تبدو ضبابية أو خارج التركيز عند ملاحظة تحت المجهر. يجب تخزينها في 2-8 درجة مئوية الشرائح المحملة وتحليلها ضمن إطار الموصى بها من الوقت للتقليل من النتائج السلبية أو artifactual كاذبة.
استخدام مجهر فلوري epi عليها بشكل جيد الذي يضم مصدر ضوء LED/Hg/زينون مناسبة والمكونات البصرية نظيفة بما في ذلك عوامل الإثارة والانبعاثات التي لم تكن معطوبة أمر بالغ الأهمية للحصول على نتائج IIF دقيقة. المستخدم النهائي لتدريب تميز رد فعل إيجابي/سلبي كثافات وتفسير أنماط أمر بالغ الأهمية. فحوصات IIF HEp-2 عرضه لعدم توحيد في الإجراءات، ومجهر التكوين، وتدريب المستخدمين النهائيين أو المهارة. أنماط التسميات والممثل إلى توافق في الآراء وأمثلة للصور التي تم الحصول عليها باستخدام مختلف الشركات المصنعة التي تتيح بالمعهد () لأغراض تعليمية4. هو نمط خلية HEp-2 شجرة تصنيف المقدمة من المعهد لمختلف أنماط النووية، هيولى والانقسامية موردا قيماً لمعرفة الفروق الدقيقة بين مختلف الأنماط التي قد تبدو مشابهة ل عيون غير مدربين4. أحد الأمثلة الأولى لنمط التحدي هو DFS70 التي تفتقر أيضا إلى علاقة متميزة مع شرط المناعة الذاتية، وكما تمت مناقشته في المقاطع السابقة هذا النمط شائع جداً في صحة السكان5.
تبعاً للدراسة، انتشار الأجسام المضادة DFS70 المضادة تختلف بين أفواج صحية، أنا السكان الفرز، وأنا إيجابية الأفراد مع أي دليل على وجود أمراض المناعة الذاتية الشاملة9،16،20 ،،من3031. الأجسام المضادة DFS70 أفيد أن تحدث بمعزل عن غيرها، وكذلك مع أنماط أخرى أنا المرتبطة بالمرض. معزولة أو نمط مونوسبيسيفيك DFS70 يقال في 2-22 في المائة ضوابط صحية ولكن في أقل من 1% من الحالات مع أمراض المناعة الذاتية الروماتزمية32. استناداً إلى هذه الاتجاهات، اقترح كمعيار لاستبعاد في أمراض المناعة الذاتية الروماتزمية النمط الإيجابي مونو DFS70 بالمعهد اللجنة3،،من3132. اللجنة المعهد، التي أنشئت لتعزيز المواءمة بين المصطلحات اختبار الأجسام وتفسير نتائج IIF HEp-2، يوصي بتقديم التقارير الإيجابية DFS70 حين الإبلاغ ANA فرز النتائج4.
قبل استبعاد مرض المناعة الذاتية جهازي استناداً إلى DFS70 مونو-الإيجابية، من الضروري استعراض حالة أساليب الفرز وتأكيد الحالية (لا سيما تلك المحددة ل DFS70). اتفاق بين DFS70 الإيجابية IIF HEp-2 والمرحلة الصلبة توكيدي فحوصات هما أليسا والعملية، وخط المناعة/دوت وصمة عار أساليب) تباينا كبيرا بين مختلف الدراسات13،22،25،33 . تفسير IIF والمقايسة توكيدي المعلمات التي تساهم في هذا الخلاف قد نوقش سابقا5،،من1334. نهج إيمونوادسوربشن المقترحة مؤخرا لمكافحة DFS70 جسم تأكيد يعالج بعض أوجه قصور فحوصات المرحلة الصلبة الحالية (ل DFS70) ولكن يتطلب مختبرات لإجراء خطوة إضافية في الإجراء IIF على عينات المشتبه فيها، التي يزيد الوقت التكاليف وتحول للإبلاغ عن نتائج13. هذه الخطوة الإضافية غير مطلوب عندما تستخدم الخلايا HEp-2 النخبة/DFS70 “كو” للفحص الروتيني أنا. وهذا يقلل من التكلفة الإجمالية، وعلاوة على ذلك هناك أي تأثير على الفترة الزمنية حسب نمط DFS70 هو تمييز في الفرز الأولى خطوة27. عيب إضافية استخدام الطريقة التقليدية IIF HEp-2 أنه غير قادر على التمييز بين نمط DFS70 المشترك التي تحدث مع الآخر ANA أنماط في مرحلة الفرز. ومع ذلك، هو التغلب على هذا العيب باستخدام خلايا HEp-2 “كو” النخبة/DFS7027.
التقييم المقارن ل HEp-2 التقليدية والجديدة المهندسة HEp-2 (HEp-2 النخبة/DFS70 كو) استخدام عناصر إيجابية أنا وتشكيلاتها مع عنصر تحكم DFS70 مونو-إيجابية، تثبت فائدة للركيزة الجديدة القدرة على في وقت واحد شاشة لانس وتأكيد نمط DFS70 (الشكل 1). البروتوكول IIF للركيزة الجديدة يماثل الأسلوب IIF HEp-2 التقليدية. نظام الترجمة الفورية للأمراض المرتبطة بجميع أنماط أنا غير متطابقة باستثناء نمط DFS70 (الجدول 1). تفسير أنماط DFS70 مونو-إيجابية والمختلطة كان أسهل نسبيا باستخدام أسلوب جديد وأنها لا تستدعي فحوصات إضافية (الشكل 1B). تنفيذ هذا الأسلوب الجديد في مختبر السريرية يبسط التحدي المرتبطة بتفسير نمط DFS70 ويحسن الدقة الإجمالية للفحص بمواصلة الكشف عن الأمراض المرتبطة ANA أنماط أخفى سابقا بالجيش الوطني الأفغاني DFS70 (مختلطة أنماط).
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ونحن نشكر تسانغتشو أندرو لأداء تجارب IIF وجمع الصور.
Materials
| HEp-2 ELITE / DFS70-KO 12 Well Slide sealed individually in pouch | Trinity Biotech | part of kit# 1108, 1108-120, 1108-240 | |
| ANA positive control | Trinity Biotech | part of kit# 1108, 1108-120, 1108-240, 1103, 1103-240 | |
| DFS70 antibody positive control | Trinity Biotech | part of kit# 1108, 1108-120, 1108-240 | |
| Negative control | Trinity Biotech | part of kit# 1108, 1108-120, 1108-240, 1103, 1103-240 | |
| Anti-human IgG FITC conjugate containing Evan's blue counterstain | Trinity Biotech | part of kit# 1108, 1108-120, 1108-240, 1103, 1103-240 | |
| Buffer diluent for serum | Trinity Biotech | part of kit# 1108, 1108-120, 1108-240, 1103, 1103-240 | |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Trinity Biotech | part of kit# 1108, 1108-120, 1108-240, 1103, 1103-240 | |
| Mounting medium | Trinity Biotech | part of kit# 1108, 1108-120, 1108-240, 1103, 1103-240 | |
| Coverslips | Trinity Biotech | part of kit# 1108, 1108-120, 1108-240, 1103, 1103-240 | |
| ImmuGlo ANA HEp-2 Cells 12 well slide sealed individually in pouch | Trinity Biotech | part of kit# 1103, 1103-240 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Materials used in the study but not provided by the kits | |||
| Diagnostic fluorescent microscope | Nikon Eclipse 50i | Equipped with a spot dignostic camera, model 2.2.1 | |
| Incubation chamber | Trinity Biotech | provided for customers (no catalog #) | |
| Coplin jar | n/a | General labware | |
| Paper towels | n/a | General lab supplies | |
| distilled/deionized water | n/a | General lab supplies |
References
- . Position Statement. Methodology of testing for antinuclear antibodies Available from: https://www.rheumatology.org/Portals/0/Files/Methodology%20of%20Testing%20Antinuclear%20Antibodies%20Position%20Statement.pdf (2011)
- Meroni, P. L., Schur, P. H. ANA screening: an old test with new recommendations. Ann Rheum Dis. 69 (8), 1420-1422 (2010).
- Agmon-Levin, N., et al. International recommendations for the assessment of autoantibodies to cellular antigens referred to as anti-nuclear antibodies. Ann Rheum Dis. 73 (1), 17-23 (2014).
- Chan, E. K., et al. Report of the First International Consensus on Standardized Nomenclature of Antinuclear Antibody HEp-2 Cell Patterns 2014-2015. Front Immunol. 6, 412 (2015).
- Malyavantham, K., Suresh, L. Analysis of DFS70 pattern and impact on ANA screening using a novel HEp-2 ELITE/DFS70 knockout substrate. Auto Immun Highlights. 8 (1), 3 (2017).
- Sperotto, F., Seguso, M., Gallo, N., Plebani, M., Zulian, F. Anti-DFS70 antibodies in healthy schoolchildren: A follow-up analysis. Autoimmun Rev. , (2017).
- Ayaki, M., et al. Detection of cytotoxic anti-LEDGF autoantibodies in atopic dermatitis. Autoimmunity. 35 (5), 319-327 (2002).
- Ochs, R. L., et al. Autoantibodies to DFS 70 kd/transcription coactivator p75 in atopic dermatitis and other conditions. J Allergy Clin Immunol. 105 (6 Pt 1), 1211-1220 (2000).
- Watanabe, A., et al. Anti-DFS70 antibodies in 597 healthy hospital workers. Arthritis Rheum. 50 (3), 892-900 (2004).
- Yamada, K., et al. Humoral immune response directed against LEDGF in patients with VKH. Immunol Lett. 78 (3), 161-168 (2001).
- Seelig, C. A., Bauer, O., Seelig, H. P. Autoantibodies Against DFS70/LEDGF Exclusion Markers for Systemic Autoimmune Rheumatic Diseases (SARD). Clin Lab. 62 (4), 499-517 (2016).
- Ochs, R. L., et al. The significance of autoantibodies to DFS70/LEDGFp75 in health and disease: integrating basic science with clinical understanding. Clin Exp Med. 16 (3), 273-293 (2016).
- Bizzaro, N., et al. Specific chemoluminescence and immunoasdorption tests for anti-DFS70 antibodies avoid false positive results by indirect immunofluorescence. Clin Chim Acta. 451 (Pt B), 271-277 (2015).
- Bizzaro, N., et al. Antibodies to the lens and cornea in anti-DFS70-positive subjects. Ann N Y Acad Sci. 1107, 174-183 (2007).
- Daniels, T., et al. Antinuclear autoantibodies in prostate cancer: immunity to LEDGF/p75, a survival protein highly expressed in prostate tumors and cleaved during apoptosis. Prostate. 62 (1), 14-26 (2005).
- Dellavance, A., et al. The clinical spectrum of antinuclear antibodies associated with the nuclear dense fine speckled immunofluorescence pattern. J Rheumatol. 32 (11), 2144-2149 (2005).
- Gundin, S., et al. Measurement of anti-DFS70 antibodies in patients with ANA-associated autoimmune rheumatic diseases suspicion is cost-effective. Auto Immun Highlights. 7 (1), 10 (2016).
- Kang, S. Y., Lee, W. I. Clinical significance of dense fine speckled pattern in anti-nuclear antibody test using indirect immunofluorescence method. Korean J Lab Med. 29 (2), 145-151 (2009).
- Lee, H., Kim, Y., Han, K., Oh, E. J. Application of anti-DFS70 antibody and specific autoantibody test algorithms to patients with the dense fine speckled pattern on HEp-2 cells. Scand J Rheumatol. 45 (2), 122-128 (2016).
- Mariz, H. A., et al. Pattern on the antinuclear antibody-HEp-2 test is a critical parameter for discriminating antinuclear antibody-positive healthy individuals and patients with autoimmune rheumatic diseases. Arthritis Rheum. 63 (1), 191-200 (2011).
- Marlet, J., et al. Thrombophilia Associated with Anti-DFS70 Autoantibodies. PLoS One. 10 (9), e0138671 (2015).
- Mercado, M. V., et al. Detection of autoantibodies to DSF70/LEDGFp75 in Mexican Hispanics using multiple complementary assay platforms. Auto Immun Highlights. 8 (1), 1 (2017).
- Muro, Y., Sugiura, K., Morita, Y., Tomita, Y. High concomitance of disease marker autoantibodies in anti-DFS70/LEDGF autoantibody-positive patients with autoimmune rheumatic disease. Lupus. 17 (3), 171-176 (2008).
- Muro, Y., Sugiura, K., Nakashima, R., Mimori, T., Akiyama, M. Low prevalence of anti-DFS70/LEDGF antibodies in patients with dermatomyositis and other systemic autoimmune rheumatic diseases. J Rheumatol. 40 (1), 92-93 (2013).
- Mutlu, E., Eyigor, M., Mutlu, D., Gultekin, M. Confirmation of anti-DFS70 antibodies is needed in routine clinical samples with DFS staining pattern. Cent Eur J Immunol. 41 (1), 6-11 (2016).
- Okamoto, M., et al. Autoantibodies to DFS70/LEDGF are increased in alopecia areata patients. J Autoimmun. 23 (3), 257-266 (2004).
- Pazini, A. M., Fleck, J., dos Santos, R. S., Beck, S. T. Clinical relevance and frequency of cytoplasmic and nuclear dense fine speckled patterns observed in ANA-HEp-2. Rev Bras Reumatol. 50 (6), 655-660 (2010).
- Schmeling, H., et al. Autoantibodies to Dense Fine Speckles in Pediatric Diseases and Controls. J Rheumatol. 42 (12), 2419-2426 (2015).
- Wiik, A. S., Hoier-Madsen, M., Forslid, J., Charles, P., Meyrowitsch, J. Antinuclear antibodies: a contemporary nomenclature using HEp-2 cells. J Autoimmun. 35 (3), 276-290 (2010).
- Mahler, M., Fritzler, M. J. The Clinical Significance of the Dense Fine Speckled Immunofluorescence Pattern on HEp-2 Cells for the Diagnosis of Systemic Autoimmune Diseases. Clin Dev Immunol. 2012, 494356 (2012).
- Mahler, M., et al. Anti-DFS70/LEDGF Antibodies Are More Prevalent in Healthy Individuals Compared to Patients with Systemic Autoimmune Rheumatic Diseases. J Rheumatol. 39 (11), 2104-2110 (2012).
- Conrad, K., Rober, N., Andrade, L. E., Mahler, M. The Clinical Relevance of Anti-DFS70 Autoantibodies. Clin Rev Allergy Immunol. , (2016).
- Miyara, M., et al. Clinical Phenotypes of Patients with Anti-DFS70/LEDGF Antibodies in a Routine ANA Referral Cohort. Clin Dev Immunol. 2013, 703759 (2013).
- Bizzaro, N., Tonutti, E., Villalta, D., et al. Recognizing the dense fine speckled/lens epithelium-derived growth factor/p75 pattern on HEP-2 cells: not an easy task! Comment on the article by Mariz et al. Arthritis Rheum. 63 (12), 4036-4037 (2011).
