Inferior Vena kava stenozu: Derin Ven Trombozu fare modeli
Summary
Burada Derin Ven Trombozu fare modeli olarak stenoz inferior vena kava içinde açıklayın. Bu model kan akışını kısıtlama, bir Venöz tromboz insanlarda büyük tetikler beyannamedir.
Abstract
Derin Ven Trombozu (DVT) ve onun yıkıcı komplikasyon, pulmoner emboli, yüksek ölüm oranı ciddi sağlık problem. Venlerin trombüsü oluşumunda mekanizmalarının anlaşılması güç kalır. Hareketlilik (örneğin, cerrahi veya uzun menzilli uçuşlar sonra) eksikliği DVT için önde gelen ana faktörlerden biridir. Patofizyolojik hareketlilik eksikliği, kan akışı durgunluk içinde Venöz vanalar sonucudur. Burada, bir modeli böyle akışı rahatsızlık trombozu sürüş bir faktör olarak taklit eden açıklanmıştır. Bu modelde, kısmi akışını sınırlama (stenoz) inferior vena kava (IVC) içinde oluşturulur. 48 h IVC Lümen yaklaşık yüzde 90’ını kapatılması olu_umu insanlar ile yapısal olarak benzer gelişimi sonuçlanır. Benzerlikler: i) çoğu trombüsü cilt kırmızıdır, yani, kırmızı kan hücreleri ve fibrin, II) varlığı beyaz kısmı (Zahn hattı), endotel monolayer III) sigara-yalanlarım, IV) yükseltilmiş plazma D-Dimer düzeyleri ve önlemek için olasılık v) oluşur tarafından düşük molekül ağırlıklı heparin kan pıhtılaşması. Sınırlamaları içerir değişken boyutu olu_umu ve aslında bu farelerde vahşi-tip belli bir yüzdesi (0 – % 35) bir trombüsü üretmeyebilir. Görsel gözlem ve ölçüm ek olarak, olu_umu trombüsü gelişme dinamikleri izlenmesi için izin verir ultrasonografi gibi non-invaziv teknolojileri tarafından görüntülenmiştir. Daha kısa zaman noktalarda (1-6 h), intravital mikroskobu doğrudan olayları (örneğin, gemi duvar hücrelere alımı) gözlemlemek için uygulanabilir trombüsü oluşumu önceki. Dünyanın dört bir yanından birkaç takım tarafından bu yöntemin kullanılması DVT inisiyasyon temel mekanizmaları ortaya çıkarmak ve onun önlenmesi için yararlı olabilir potansiyel hedefleri belirlemek mümkün kıldı.
Introduction
Derin Ven Trombozu (DVT) olduğunu olu_umu derin damarlarınızdaki gelişimi genellikle (ama sadece) bacaklarda. İçinde bağlaç ile pulmoner emboli (PE; birlikte Venöz tromboemboli, VTE olarak belirlenmiş) yaklaşık 900.000 Amerikalılar her yıl geliştirir ve ciddi sağlık sorunu ve ekonomik sorun1,2temsil eder. PE, DVT, bir komplikasyonu bir trombüsü başlangıç konumundan müstakil alır ve solunum yetmezliği ve ölüme neden olabilir akciğerlere ulaşır oluşur. Death toll gelen VTE mortalite AIDS, meme kanseri ve trafik kazaları, kombine3aşıyor.
DVT yanı sıra neden olan en büyük etken nedenleri, bilinen kanser veya travma gibi hareket eden 4,5olmaması. Bu ameliyatı (özellikle ortopedik), felç, uzun menzilli uçuşlar ya da başka nedenlerle neden olabilir. Damarlarında kan akımı kas pompa üzerinde bağlıdır ve bu nedenle uzuv immobilizasyon durgun kan sonuçlarında Venöz Subaplar, tromboz için bu da neden-akış. Böyle kan akışı bozulma6,7özetlemek için burada açıklanan yöntemi amacı budur. İnferior vena kava (IVC) kısmi akış kısıtlama oluşturulan insan Venöz vanalar ve sonuçları bir trombüsü oluşumunda insan olu_umu6‘ yapısında benzer koşullar taklit eder. Bir trombüsü büyük kısmı kırmızı ve kırmızı kan hücreleri, fibrin ve trombosit birleşmesiyle oluşur. Olu_umu küçük bir “beyaz kısmı”insan Venöz olu_umu açıklanan satırları Zahn”benzer (şekil 1), trombosit zenginleştirilmiş” si. Trombüsü her iki kesiminde de gelecekteki trombüsü6,9sitesinde işe ilk hücreleri arasında olan nötrofil8, içerir. Beyaz kısmı nötrofil ağları8yoksun olmak gibi görünüyor, ancak kırmızı bölümünde nötrofil nötrofil hücre dışı tuzakları (ağlar), sınırdışı. Aynı şekilde insan DVT için trombozu farelerde yüksek plazma D-dimer düzeyleri (Şekil 2) tarafından eşlik ediyor. Hastalarda, DVT profilaksi için kullanılan düşük molekül ağırlıklı heparin (enoxaparin), ayrıca tromboz farelerde engeller. Bu yöntemin önemli bir avantajı endotel denudation9, hangi insan DVT10özelliğidir bulunmamasıdır. Bu özellik IVC stenoz DVT daha klinik bir model daha, örneğin, tromboz indüksiyon sağlar ferrik klorid tarafından hangi ikna endotel denudation ve hangi olu_umu oluşur ağırlıklı olarak trombosit11, , 12,13. Tam koma halinde IVC modeli birkaç takım14,15,16tarafından tercih edilmektedir. Artık akış gemi içinde korunur stenoz, aksine Staz uygulanması tamamen akışı durur ve böylece trombozu sitesi sistemik yönetilen maddelere erişilebilirliğini sınırlar. Ayrıca, görünüşe göre stenoz ve Staz tarafından uyarılan trombozuna yatan mekanizmaları farklıdır: stenoz sonuçları yerel iltihap gelişiminde (endotel, serbest bırakmak-in Weibel Palade vücut içerik, işe alım bağışıklık hücrelerinin aktivasyonu ve trombosit gemi duvara) durağanlık yerine trombozu ikna etmek gibi görünüyor, ancak “immunothrombosis”6,9,17, neden bağlı olarak, özellikle, doku faktörü ve diğer koagülasyon ve Fibrinolitik ile ilgili mekanizmalar18,19,20. Böylece, her ne kadar onların mekanizmalarını kesinlikle çakışabilir stenoz ve Staz modelleri Venöz trombüsü geliştirme, biraz farklı yönlerini yansıtır. Elektrolitik IVC modeli (EIM) DVT21,22 trombüsü yalnızca kısmen gemi duvar occluding neden olmaktadır. Bu nedenle, farklı ilaçların sistemik yönetim trombüsü büyüme üzerindeki etkilerini test etmek için uygundur. Bu model, ancak, bu mekanizma patofizyolojik alaka en az tartışılır hale elektrik akımı tarafından IVC duvar bütünlüğü (iğne ekleme) bozulma ve tromboz indüksiyon varsayar.
Protocol
Representative Results
Discussion
Burada, bir protokol kan akışı bozulma, DVT için önemli bir tetikleyici faktör taklit eden IVC Darlığının sunulur. IVC stenoz olu_umu 65-%100 48 saat içinde C57BL/6 farelerin ve 25-%50 2-6 h6,8,23 içinde farelerin gelişimine neden olmaktadır (Brill A, yayınlanmamış veriler, 2016). Bir büyük yönteminin kısa vadeli (6 h) ve uzun vadeli (48 saat) IVC stenoz sonra gözlenen trombüsü boyutu24 (şekil 4), değişkenlik kısıtlamasıdır. Böyle değişkenlik nedenlerle (aynı spacer gibi koşullar göz önüne alındığında bu anestezi vb kullanılır) karanlık kalır, ancak bir o anatomik spekülasyon (örneğin, genişlik IVC, numarası ve yan ve arka konumunu fareler arasında farklılıklar dalları) altında yatan bu olay. Değişkenlik trombüsü boyutunda ana sonucu tromboz yaygınlık (fareler bir trombüsü ile yüzde) yapar. Tromboz yaygınlık acil durum tablo ve Fisher’ın tam testi kullanılarak karşılaştırılabilir. Enjeksiyon podoplanin inhibe antikorların 7gözlenmiştir sonra aynı trombozu yaygınlık ile azaltılmış trombüsü boyutunu ayarlarken bir deney bir istisnaydı.
Bu yöntem özellikle yararlı olduğunda Venöz tromboz başlatma okudu. Damar duvarındaki hücrelerin, eninde sonunda tromboz için önde gelen işe alım gibi erken olayları soruşturma için izin verir. İlaçların Pro veya anti thrombotic etkileri trombozu yaygınlık birincil bir okuma olmak bu model kullanılarak değerlendirilebilir. Prothrombotic fenotip beklenen 6 h stenoz kullanılabilir stenoz 48 saat için bir anti-trombotik fenotip ortaya çıkarmak için geçerlidir. Histolojik analiz trombüsü ve çevresindeki IVC duvar da gerçekleştirilebilir.
Bakmaksızın olup yan dalları veya patent yaptı soru açık kalır. Bir grup ligasyonu yan dalı trombüsü boyutu artmaz ve yan dal IVC ligasyonu sitesine 1.5 mm daha yakın konumunu önemli ölçüde trombüsü geliştirme25bozar göstermiştir. Yan dallar kapatılması endotel hasarı onları ikna etmek ve ayrıca cerrahi26zaman artırmak. Bizim ellerde yan dal kapatma eksikliği önemli ölçüde tromboz yaygınlık (aşağı 10-%30 48 h stenoz sonra; azalır Brill, yayınlanmamış) ve bu nedenle tüm görünür yan dalları ligate.
İdeal olarak, fare, aynı arka plan üzerinde bile ama farklı kaynaklardan biraz farklı trombozu yaygınlık olabilir gibi littermate denetimleri kullanılmalıdır. DVT kendisi herhangi bir parametre üzerinde etkisi (örneğin, biyokimyasal) okudu, sham işletilen hayvan kullanılmalıdır. Sham çalışan fareler aynı yordamı tabi ama IVC etrafında bağ gevşek kapalı ve orada stenoz üretmeden yaptı.
Bu iletişim kuralı en sık hata (kritik adım) aorta ve genellikle kanama sonuçları IVC değil tam olarak, ama biraz daha düşük, gemiler arasındaki açı ayırmak için bir çabadır. Büyük bir kanama meydana geldiğinde, fare iyi kurtarma olası hale gelir ve bu denemeyi durdurup hayvan ötenazi önerilir. Normalde, fareler de kurtarmak, kafesin içinde hareket ve önemli ölçüde ağırlık kaybetmek değil. Biz kadın ve erkek için 20 g yukarıda fareler kullanmanızı öneririz ve hayvanlar (özellikle erkekler) bireysel kafeslerde ameliyattan sonra mücadele ve yaralanma önlemek için deneme sonuna kadar tutmak. Bu başka bir (elektrolitik) DVT modelinde erkek fareler kadın27daha büyük olu_umu üretmek bildirilmiştir. Bizim veri analizi önemli trombozu yaygınlık erkek ve dişi fareler (Brill, yayınlanmamış) arasındaki farkı ortaya değil. Bu nedenle, araştırmacılar IVC stenoz modelini kullanarak her iki cinsiyette fareler üzerinde deneyler yapmak için teşvik edilir.
Dikiş ve/veya zımba unravelling değil karar verdi özellikle uzun deneyler (bir hafta ve daha uzun). Böylece, fareler günde en az iki kez dikiş bütünlüğü için özel olarak denetlenmesi ve özel bir dikkat kafes yatak üzerinde kan lekesi görünümünü verilmesi gerekir.
Bu başka bir hayvan model gibi IVC stenoz sınırlamaları insanlar içine çeviri açısından sahip olması gerekmektedir. Örneğin, insan DVT Venöz vanalar içinde geliştirir, ancak fare IVCs Subaplar, yok. Ayrıca, insanlar bir önemli mekanizma hızlanan kan akımını damarları olmak kas pompası ile dikey spinal yönlendirme sahip. Buna ek olarak, fareler hiçbir rol yatay spinal yönlendirmeyle kan kalbe dönüş destekleyen kas pompa var. Bu sınırlamalar ne zaman fare veri insan hastalık için çeviri düşünülmelidir.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu eser İngiliz kalp Vakfı (PG/13/60/30406) ve Birmingham Üniversitesi tarafından desteklenmiştir.
Materials
| C57BL/6 mice | Charles River | 8 – 10 weeks old, bothe genders | |
| Scissors | WPI | 15922 | |
| Scissors | WPI | 14003 | |
| Dumont 5/45 forceps | FST | 11251-35 | |
| 7-0 Prolene suture | Ethicon | W8725 | |
| 6-0 Vicryl suture | Ethicon | W9981 | |
| Cotton buds | Spar | ||
| Millswabs sterile | Millpledge veterinary | 611950 | |
| Drapes | Kruuse | 141765 | |
| Glucose Saline-Aqupharm3 | Animal Care | XVD589 | |
| Clear H20 HydroGel 98% sterile water | Clearh2o | ||
| Buprenorphine | National Veterinary Supplies | ||
| Isoflurane vaporizer | General Anaesthetic Services | ||
| IsoFlo 100% W/W inhalation vapour, liquid | National Veterinary Supplies | ||
| Sterilizer Steri350 | Inotech | ||
| Microscope Olympus SZX10 | Olympus |
References
- Heit, J. A. The epidemiology of venous thromboembolism in the community. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (3), 370-372 (2008).
- Huang, W., Goldberg, R. J., Anderson, F. A., Kiefe, C. I., Spencer, F. A. Secular trends in occurrence of acute venous thromboembolism: the Worcester VTE study (1985-2009). Am J Med. 127 (9), 829-839 (2014).
- House of Commons Health Care Committee. The Prevention of Venous Thromboembolism in Hospitalised patients. The House of Commons. , (2005).
- Kuipers, S., et al. Travel and venous thrombosis: a systematic review. J Intern Med. 262 (6), 615-634 (2007).
- Lopez, J. A., Chen, J. Pathophysiology of venous thrombosis. Thromb Res. 123, 30-34 (2009).
- Brill, A., et al. von Willebrand factor-mediated platelet adhesion is critical for deep vein thrombosis in mouse models. Blood. 117 (4), 1400-1407 (2011).
- Payne, H., Ponomaryov, T., Watson, S. P., Brill, A. Mice with a deficiency in CLEC-2 are protected against deep vein thrombosis. Blood. 129 (14), 2013-2020 (2017).
- Brill, A., et al. Neutrophil extracellular traps promote deep vein thrombosis in mice. J Thromb Haemost. 10 (1), 136-144 (2012).
- von Bruhl, M. L., et al. Monocytes, neutrophils, and platelets cooperate to initiate and propagate venous thrombosis in mice in vivo. J Exp Med. 209 (4), 819-835 (2012).
- Sevitt, S. The structure and growth of valve-pocket thrombi in femoral veins. J Clin Pathol. 27 (7), 517-528 (1974).
- Witsch, T., et al. A novel hollow and perforated flexible wire allows the safe and effective local application of thrombolytic therapy in a mouse model of deep vein thrombosis. J Thromb Thrombolysis. 37 (4), 450-454 (2014).
- Shaya, S. A., et al. Comparison of the effect of dabigatran and dalteparin on thrombus stability in a murine model of venous thromboembolism. J Thromb Haemost. 14 (1), 143-152 (2016).
- Ni, H., et al. Persistence of platelet thrombus formation in arterioles of mice lacking both von Willebrand factor and fibrinogen. J Clin Invest. 106 (3), 385-392 (2000).
- Wrobleski, S. K., Farris, D. M., Diaz, J. A., Myers, D. D., Wakefield, T. W. Mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis. J Vis Exp. (52), (2011).
- Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model. J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).
- Siefert, S. A., et al. Enhanced venous thrombus resolution in plasminogen activator inhibitor type-2 deficient mice. J Thromb Haemost. 12 (10), 1706-1716 (2014).
- Schulz, C., Engelmann, B., Massberg, S. Crossroads of coagulation and innate immunity: the case of deep vein thrombosis. J Thromb Haemost. 11, 233-241 (2013).
- Day, S. M., et al. Macrovascular thrombosis is driven by tissue factor derived primarily from the blood vessel wall. Blood. 105 (1), 192-198 (2005).
- Diaz, J. A., et al. Impaired fibrinolytic system in ApoE gene-deleted mice with hyperlipidemia augments deep vein thrombosis. J Vasc Surg. 55 (3), 815-822 (2012).
- Zhou, J., May, L., Liao, P., Gross, P. L., Weitz, J. I. Inferior vena cava ligation rapidly induces tissue factor expression and venous thrombosis in rats. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 29 (6), 863-869 (2009).
- Diaz, J. A., et al. Electrolytic inferior vena cava model (EIM) of venous thrombosis. J Vis Exp. (53), e2737 (2011).
- Diaz, J. A., et al. The electrolytic inferior vena cava model (EIM) to study thrombogenesis and thrombus resolution with continuous blood flow in the mouse. Thromb Haemost. 109 (6), 1158-1169 (2013).
- Brill, A., et al. Extrahepatic high-density lipoprotein receptor SR-BI and apoA-I protect against deep vein thrombosis in mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (8), 1841-1847 (2012).
- Diaz, J. A., et al. Critical review of mouse models of venous thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).
- Brandt, M., et al. Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches. Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).
- Geddings, J., et al. Strengths and weaknesses of a new mouse model of thrombosis induced by inferior vena cava stenosis: communication from the SSC of the ISTH. J Thromb Haemost. 12 (4), 571-573 (2014).
- Alvarado, C. M., et al. Male mice have increased thrombotic potential: sex differences in a mouse model of venous thrombosis. Thromb Res. 127 (5), 478-486 (2011).
