مقايسة الفلورة يستند إلى الخلية بسيطة للكشف عن الأجسام ضد مستقبلات ن-الميثيل-د-اسبارتاتي (نمدا) في الدم
Summary
وأعربنا عن اكتوبيكالي NR1 وحدة فرعية من مستقبلات NMDA يوصف مستضد للكشف عن الأجسام المضادة ضد مستقبلات NMDA في الدم لدى المرضى الذين يشتبه بالتهاب الدماغ الذاتية مع البروتينات الفلورية الخضراء في الخلايا الجنينية البشرية (HEK293). قد يكون هذا الأسلوب بسيطة مناسبة لأغراض في إعدادات السريرية الفرز.
Abstract
يمكن أن يسبب وجود الأجسام المضادة-نمدا مستقبلات مختلفة من الأعراض النفسية العصبية في المرضى المتضررين، ويسمى نمدا المضادة مستقبلات الدماغ المناعة الذاتية. من الضروري الكشف عن الأجسام محددة ضد مستقبلات NMDA في الدم أو السائل الدماغي النخاعي (CSF) لتشخيص دقيق لهذا الشرط. مستقبلات NMDA هو أيون قناة بروتين معقد يحتوي على أربعة الوحدات الفرعية، بما في ذلك اثنان إلزامية نمدا مستقبلات فرعية 1 (NR1) وواحد أو اثنين من مستقبلات NMDA 2A وحدة فرعية (NR2A)، نمدا مستقبلات 2B وحدة فرعية (NR2B)، وحدة فرعية مستقبلات NMDA ج 2 (NR2C)، أو مستقبلات NMDA وحدة فرعية 2D (NR2D). وذكر حانمه الأجسام المضادة-نمدا مستقبلات يكون حاضرا في المجال الطرفي ن خارج الخلية فرعية NR1 من مستقبلات NMDA. والهدف من هذه الدراسة هو القيام مقايسة الفلورة بسيط يستند إلى الخلية التي يمكن استخدامها كاختبار فحص للكشف عن وجود الأجسام المضادة ضد NR1 وحدة فرعية من مستقبلات NMDA في الدم لتيسير البحوث السريرية والأساسية من مكافحة نمدا مستقبلات الذاتية التهاب الدماغ.
Introduction
نمدا المضادة مستقبلات الدماغ المناعة الذاتية هي كيان مرض حديثا المعترف بها التي يمكن أن تحدث في المرضى الذين يعانون من جميع الإعمار، ويؤثر على المرضى الذين يغلب عليها العنصر النسائي1،2. أنها واحدة من التهاب الدماغ تم تشخيصها على أنها الأكثر شيوعاً بين المرضى الذين يعانون من المسببات الأولية غير معروف لالتهاب الدماغ3. المرضى المصابين بالتهاب الدماغ مستقبلات NMDA مكافحة عادة ما يكون الأعراض الأولى من الصداع أو الحمى، متبوعاً بالتطور السريع لتغير مستوى الوعي ومجموعة متنوعة من الأعراض النفسية العصبية الحادة، بما في ذلك التحريض، التهيج ، القلق والأرق والهلوسة، والأوهام، العدوان، السلوكيات الغريبة، شذوذ الحركة، التقلبات اللاإرادي والاستيلاء على الهجمات4،5. الاعتراف المبكر بهذا الشرط والمعالجة في الوقت المناسب مع العلاج المناعي مهمان لنتائج أفضل والشفاء التام حتى في المرضى المتضررين6. ومن ثم، اقترح أنه ينبغي مكافحة نمدا مستقبلات الدماغ الذاتية كإجراء تشخيص تفاضلية هامة من المرضى تقديم مع سمات ذهانية حادة أو بداية جديدة7،8.
بالإضافة إلى السمات السريرية، الكشف عن الأجسام ضد مستقبلات NMDA في الدم أو السائل الدماغي النخاعي ضروري لتشخيص دقيق لمكافحة نمدا مستقبلات الدماغ الذاتية9. تتوفر معظم اختبارات مناعية للكشف عن الأجسام مستقبلات NMDA المضادة في مختبرات أبحاث قليلة10،11، وهناك المقايسة الفلورة المتاحة تجارياً على أساس خلية واحدة فقط للفحص مكافحة نمدا مستقبلات الأجسام المضادة12. والهدف من هذه الدراسة هو القيام مقايسة بسيطة الفلورة داخلية يستند إلى الخلية التي يمكن استخدامها مريح في المختبر لفحص وجود الأجسام المضادة مستقبلات نمدا المضادة لتيسير البحوث السريرية من مستقبلات NMDA مكافحة التهاب الدماغ المناعة الذاتية. مستقبلات NMDA هيتيروتيترامير أيون قناة بروتين معقدة وأعرب على وجه التحديد في الدماغ. أنه يتكون من وحدتين فرعيتين NR1 الإجباري، والمزيج من مفارز واحد أو اثنين من NR2A، NR2B، NR2C، أو NR2D13. دراسة سابقة أفادت أن حانمه الرئيسية المستهدفة بالأجسام المضادة في المجال الطرفي ن خارج الخلية ل وحدة فرعية NR15. ومن ثم، في هذا البروتوكول، نعرب عن البروتين NR1-وحدة فرعية الماشوب البشري من مستقبلات NMDA معلم مع البروتين الفلورية الخضراء (التجارة والنقل) في السطر الخلايا الظهارية الكلي الجنينية البشرية (HEK293)، ووضع مقايسة الفلورة يستند إلى الخلية للكشف عن الفئة مفتش من الأجسام المضادة مستقبلات NMDA المضادة في الدم.
Protocol
Representative Results
Discussion
وهناك عدة فحوصات مناعية يستند إلى الخلية لفحص وجود الأجسام المضادة ضد مستقبلات NMDA التي ذكرت في الأدب، بما في ذلك الفلورة يستند إلى الخلية الحية المقايسة11، ثابت يستند إلى الخلية الفلورة الإنزيم9 ، والتدفق الخلوي على أساس الاعتداء14. ينبغي إجراء المقا?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل “المؤسسة الطبية الأمنيون تشانغ” (رقم المنحة CMRPG3C1771، CMRPG3C1772، CMRPG3E0631، CMRPG3E0632، و CMRPG3E0633).
Materials
| GRIN1 (GFP-tagged) – Human glutamate receptor, ionotropic, N-methyl D-aspartate 1 (GRIN1), transcript variant NR1-1 | Origene (Rockville, MD, USA) | RG219368 | NR1-cDNA clone tagged with C-terminal tGFP sequences |
| pCMV6-AC-GFP | Origene (Rockville, MD, USA) | PS100010 | mammalian vector with C-terminal tGFP tag |
| EndoFree Plasmid Maxi Kit | Qiagen (Hilden Germany) | 12362 | |
| Lipofectamine 2000 Transfection Reagent | Invitrogen (Carlsbad, CA, USA) | 11668-019 | |
| Opti-MEM I Reduced Serum Medium | Thermo Fisher | 31985-070 | |
| DMEM, High Glucose, Pyruvate | Thermo Fisher | 11995-065 | |
| Characterized Fetal Bovine Serum, US Origin | GE Healthcare Life Sciences | SH30071.01 | |
| Goat anti-Human IgG (H+L) Secondary Antibody, Alexa Fluor 594 conjugate | Thermo Fisher | A-11014 | |
| Positive control: anti-glutamate receptor (type NMDA) | Euroimmun AG, Lübeck, Germany | CA 112d-0101 | |
| Euroimmun Assay Kit |
References
- Linnoila, J. J., Rosenfeld, M. R., Dalmau, J. Neuronal surface antibody-mediated autoimmune encephalitis. Semin Neurol. 34 (4), 458-466 (2014).
- Lancaster, E. The diagnosis and treatment of autoimmune Encephalitis. J Clin Neurol. 12 (1), 1-13 (2016).
- Pruss, H., et al. Retrospective analysis of NMDA receptor antibodies in encephalitis of unknown origin. Neurology. 75 (19), 1735-1739 (2010).
- Leypoldt, F., Armangue, T., Dalmau, J. Autoimmune encephalopathies. Ann N Y Acad Sci. 1338, 94-114 (2015).
- Dalmau, J., et al. Anti-NMDA-receptor encephalitis: case series and analysis of the effects of antibodies. Lancet Neurol. 7 (12), 1091-1098 (2008).
- Titulaer, M. J., et al. Treatment and prognostic factors for long-term outcome in patients with anti-NMDA receptor encephalitis: an observational cohort study. Lancet Neurol. 12 (2), 157-165 (2013).
- Chapman, M. R., Vause, H. E. Anti-NMDA receptor encephalitis: diagnosis, psychiatric presentation, and treatment. Am J Psychiatry. 168 (3), 245-251 (2011).
- Gable, M., Glaser, C. Anti-n-methyl-d-aspartate receptor encephalitis appearing as a new-onset psychosis: disease course in children and adolescents within the california encephalitis project. Pediatr Neurol. 72, 25-30 (2017).
- Dalmau, J., Lancaster, E., Martinez-Hernandez, E., Rosenfeld, M. R., Balice-Gordon, R. Clinical experience and laboratory investigations in patients with anti-NMDAR encephalitis. Lancet Neurol. 10 (1), 63-74 (2011).
- Dalmau, J., et al. Paraneoplastic anti-N-methyl-D-aspartate receptor encephalitis associated with ovarian teratoma. Ann Neurol. 61 (1), 25-36 (2007).
- Irani, S. R., et al. N-methyl-D-aspartate antibody encephalitis: temporal progression of clinical and paraclinical observations in a predominantly non-paraneoplastic disorder of both sexes. Brain. 133 (Pt 6), 1655-1667 (2010).
- Suh-Lailam, B. B., Haven, T. R., Copple, S. S., Knapp, D., Jaskowski, T. D., Tebo, A. E. Anti-NMDA-receptor antibody encephalitis: performance evaluation and laboratory experience with the anti-NMDA-receptor IgG assay. Clin Chim Acta. 421, 1-6 (2013).
- Mayer, M. L. Structural biology of glutamate receptor ion channel complexes. Curr Opin Struct Biol. 41, 119-127 (2016).
- Ramberger, M., et al. Comparison of diagnostic accuracy of microscopy and flow cytometry in evaluating n-methyl-d-aspartate receptor antibodies in serum using a live cell-based assay. PLoS One. 10 (3), e0122037 (2015).
- Wandinger, K. P., Saschenbrecker, S., Stoecker, W., Dalmau, J. Anti-NMDA-receptor encephalitis: a severe, multistage, treatable disorder presenting with psychosis. J Neuroimmunol. 231 (1-2), 86-91 (2011).
- Dahm, L., et al. Seroprevalence of autoantibodies against brain antigens in health and disease. Ann Neurol. 76 (1), 82-94 (2014).
- Jézéquel, J., et al. Cell- and single molecule-based methods to detect anti-n-methyl-d-aspartate receptor autoantibodies in patients with first-episode psychosis from the OPTiMiSE project. Biol Psychiatry. , (2017).
