Dosage pour la Phosphorylation et microtubules liaison avec localisation de la protéine Tau dans les cellules du Cancer Colorectal

Tau a été initialement identifiée comme étant une protéine associée aux microtubules thermostable qui a été purifiée conjointement avec la tubuline¹. Tau est exprimée exclusivement en plus eucaryotes^2,3,4. La fonction principale de tau est de contrôler les microtubules Assemblée^1,5,6. Elle contribue également à la polymérisation des microtubules⁷, transport axonal⁸, changements de diamètre axonal⁹, formation de polarité neurinome et neurodégénérescence¹⁰. Tau agit également comme un échafaudage de protéine pour contrôler certaines voies de signalisation. Études de cerveau chez les rats suggèrent que tau est neurone-spécifique et qu’elle se localise principalement dans les axones¹¹. Parce que la protéine tau est essentiel pour la polymérisation des microtubules et développement neuronal, dans le cas du tau, l’hypothèse a été pour jouer un rôle majeur dans le développement axonal dans le système nerveux central ; Cette hypothèse a été vérifiée par des expériences in vitro et in vivo . En plus des neurones, tau est exprimé dans des cellules non neuronales différentes, y compris le foie, les reins et les cellules de muscle^12,13. Tau est exprimée également en maternel, prostate, colorectal, gastrique et le cancer du pancréas cell lines et tissus^{14,15,16,17,18, 19}. tau est également trouvée dans myositis de corps d’inclusion comme tubulofilaments tordu dans le corps d’inclusion²⁰.

Tau peut effectuer plusieurs modifications post-traductionnelles. Toutes les modifications post-traductionnelles, la phosphorylation est la plus courante. La phosphorylation de tau accrue diminue son affinité pour les microtubules, enfin déstabiliser le cytosquelette. Quatre-vingt cinq sites de phosphorylation ont été décrits dans la protéine tau isolé des tissus cérébraux humains la maladie d’Alzheimer. De ces sites, 53 % constituent des sérine, thréonine de 41 % et 6 % seulement des^22,de^21,de résidus tyrosine²³. La phosphorylation de Tau influe sur sa localisation, fonction, liaison, solubilité et sa sensibilité aux autres modifications post-traductionnelles. Aussi tau phosphorylation dépasse la mesure normale (ou complètement saturée avec des groupes de phosphate) est connu comme hyperphosphorylée qui reproduit les caractéristiques structurales et fonctionnelles de la maladie d’Alzheimer²⁴. Tau maintient le bon fonctionnement des microtubules axonales et assure un fonctionnement neuronal normal dans des conditions physiologiques. Toutefois, le tau hyperphosphorylée ne parvient pas à maintenir une liaison de microtubules bien organisé, causant la perte neuronale en raison du démontage de microtubules. Des niveaux normaux de la phosphorylation de tau sont requises pour tau de bon fonctionnement, mais tau ne parvient pas à fonctionner normalement si son niveau de phosphorylation caractéristique est modifiée et si elle est hyperphosphorylée²⁵. Dans la maladie d’Alzheimer et de certaines autres maladies neurodégénératives liées à l’âge, tau devient hyperphosphorylée et forme des filaments hélicoïdaux appariés et les enchevêtrements neurofibrillaires^26,27. Ainsi, les méthodes de détermination de la phosphorylation de tau et liaison de microtubules sont importants.

Le cancer colorectal, un cancer lié au vieillissement, est que le troisième plus fréquemment diagnostiquée cancer et le troisième important causant des décès pour les hommes et les femmes²⁸. Le cancer colorectal est un des principaux cancers causant des décès dans le monde occidental²⁹. Parce que le cancer colorectal et la maladie d’Alzheimer sont associés au vieillissement et les deux se produisent principalement dans les pays développés où les gens apprécient des habitudes alimentaires similaires, les deux maladies peuvent en quelque sorte être corrélés. En outre, les cellules cancéreuses tau-positifs et négatifs tau réagissent différemment aux agents chimiothérapeutiques, par exemple, paclitaxel¹⁶.

La curcumine est l’un des principaux dérivés de Curcuma longa, l’épice indienne curcuma³⁰. Pendant des siècles, les populations sud-asiatiques ont consommé curcuma dans leur alimentation au quotidien. La curcumine est utilisée pour traiter différentes maladies, cancer colorectal, maladie d’Alzheimer, diabète, mucoviscidose, maladie inflammatoire de l’intestin, l’arthrite, hyperlipidémie, athérosclérose, et cardiopathie ischémique^{31, 32 , 33 , 34 , 35 , 36 , 37 , 38}. lithium peut aussi tuer des cellules de cancer colorectal ou d’empêcher leur prolifération³⁹. Au lithium peut également être utilisé pour le traitement de la maladie d’Alzheimer⁴⁰ car il diminue l’agrégation tau et empêche sa hyperphosphorylée tel qu’observé dans une souris transgénique modèle^{41,42,43, 44}.

Ce manuscrit a pour but de : 1) mesurer la tau totale et les niveaux d’expression de phospho-tau dans les cellules traitées ; 2) décrivent un dosage de la phosphatase pour mesurer la phosphorylation de tau globale ; 3) examiner microtubule-liaison du tau ; et 4) localiser tau en microscopie confocale en lignées cellulaires de cancer colorectal traités avec la curcumine ou de LiCl. Résultats révèlent que traitement des cellules avec la curcumine, qui est un agent chimiothérapeutique censé être bon pour le cancer du côlon, et le traitement avec LiCl peut réduire l’expression de ces deux tau totale et phosphorylée tau dans les lignées cellulaires de cancer colorectal. Ces traitements peuvent aussi causer la translocation nucléaire du tau. Cependant, contre toute attente, curcumine ne parvient pas à améliorer la liaison des tau aux microtubules.