Ablazione chirurgica Assay per lo studio degli occhi Rigenerazione in Planarie

Planarie sono un potente organismo modello per studiare la rigenerazione cellulare mediata staminali adulte. Questi platelminti acqua dolce non parassitarie possiedono la capacità di rigenerare qualsiasi e tutti i tessuti mancanti, tra loro sistema nervoso centrale e del cervello ^1. Studiata fin 1700 ^2, progressi tecnologici nel campo planarian corso degli ultimi 10-15 anni (quali un genoma sequenziato, ibridazione in situ, immunoistochimica, interferenza RNA (RNAi), e trascrittomica) hanno aggiornato questo organismo modello storico . In particolare, planarie hanno recentemente guadagnato la popolarità come un modello emergente per la ricerca degli occhi ^3.

Planarians hanno occhi prototipici con solo due tipi di tessuto, i neuroni fotorecettori e cellule pigmentate; ciò ha permesso la caratterizzazione della sua popolazione dell'occhio cellule staminali e dimostrato che molti degli stessi geni che regolano vertebrato occhio deluppo sono conservati in planarians ^{4, 5.} Le coppe ottiche si trovano dorsalmente e comprende il bianco, dendriti dei neuroni non pigmentate fotorecettori e le cellule del pigmento nero semi-lunari, e gli occhi innervano il cervello attraverso un chiasma ottico. Oltre ad essere un modello per chiarire processi rigenerativi ^6, l'occhio planarian è adatto per studiare l'evoluzione dei meccanismi visivi ^7, risposte comportamentali alla luce (planarians visualizzare fototassi negativo) ^8, e la base neurologiche del comportamento ^9.

Rigenerazione oculare planarians è stato ampiamente studiato in due contesti principali: come parte della rigenerazione testa dopo decapitazione ^{4, 10,} e dopo l'asportazione di soli tessuti oculari ^{11, 12} </sup>. La maggior parte degli studi sulla rigenerazione planaria occhi hanno usato il metodo di decapitazione, in quanto è semplice e lineare. Il metodo escissione occhio planarian più comune è stato finora tramite perforazione con un tubo capillare vetro sottile ^{13, 14,} anche se alcuni studi hanno anche eseguito amputazioni appena dietro gli occhi (decapitazione parziale) ^15. Tuttavia, tutti questi metodi comportano la perdita di molti tessuti diversi solo l'occhio (come il cervello, intestino, e nefridi), potenzialmente complicando l'interpretazione dei risultati. Il protocollo ablazione occhio qui presentata limita escissione ai tessuti dell'occhio (escludendo in particolare del cervello), con conseguente dati che sono più specifici per l'occhio. Inoltre, a differenza di vermi decapitati che prendono 7-14 giorni per iniziare l'alimentazione, occhio ablato vermi alimentare entro 24 h di ablazione ^12, consentendo esperimenti RNAi (dove RNAi viene fornita mediante il cibo) da esibiràd contemporaneamente.

Anche se l'ablazione occhio è tecnicamente più difficile da eseguire con successo di decapitazione, gli studi in corso sulla escissione occhio non hanno incluso le istruzioni dettagliate sulle loro procedure. L'obiettivo di questo articolo il video è quello di consentire ai ricercatori di rimuovere costantemente la coppa ottica planaria senza disturbare i tessuti cerebrali sottostanti e la rimozione come pochi altri tessuti come possibile. Questo metodo può essere utilizzato sia per singolo e doppio ablazione dell'occhio ed è applicabile ad una vasta gamma di indagini. Come la maggior parte dosaggi di rigenerazione, l'ablazione occhio è adatto per la combinazione con entrambi (RNAi) schermi farmacologiche e genetiche, così come studi comportamentali. Qui si descrivono i metodi per la gestione di vermi, il mantenimento di una colonia planaria, e la tecnica di ablazione occhio stesso.