Une méthode non-invasive et technique non-intensif pour Induction et phénotypage of Experimental pneumonie bactérienne chez les souris

Pneumonie communautaire demeure la principale cause de décès par infection aux Etats – Unis, avec peu de changements dans les taux de mortalité au cours des 40 dernières années , en dépit des améliorations en matière de vaccination et des stratégies antibiotiques ^1,2. Malgré l'absence de progrès sensibles au niveau de la santé publique, au cours des dernières années, des progrès considérables ont été réalisés dans notre compréhension de la pathogenèse moléculaire et cellulaire de la pneumonie, avec un grand nombre de ces avancées rendues possibles par l'utilisation de modèles de souris de l'infection pulmonaire. La traçabilité génétique de la souris, la similitude du murin et le système immunitaire humain et la vaste gamme de réactifs immunologiques murins ciblés qui sont devenus disponibles dans le commerce ont ainsi facilité des progrès rapides du champ.

Des modèles de souris de la pneumonie bactérienne décrite dans la littérature ont généralement compté sur l'un des quatre itinéraires techniques pour pathogène inoculation: i) aérosolisation; ii) intrlivraison anasal; iii) la livraison par voie orale; et iv) l' injection intra – trachéale chirurgicale (ie, trachéotomie) ^3. Toutes les voies d'infection ont des avantages et des inconvénients ^3. En particulier l'exposition, relative des voies respiratoires supérieures, le potentiel pour le mélange de la flore oronasaux, les exigences pour l'anesthésie générale, la variabilité de l'inoculum livré au poumon distal, la distribution lobaire des agents pathogènes livrés, les exigences d'expertise technique, et de la morbidité procédurale varient considérablement entre ces approches.

Communément techniques utilisées d'infection pérorales comprennent endotrachéale (translaryngée) canulation soit par un (non visualisées) approche «aveugle», ou sous visualisation directe laryngé ^3-5. Les deux méthodes, tandis que robuste, nécessitent une formation et portent aussi le risque de traumatisme des voies respiratoires supérieures. Dans le présent rapport, nous décrivons une méthode techniquement non intensive, non-invasive, peu coûteuse et rapide de l'infection par voie orale, wdit bactéries (Klebsiella pneumoniae dans l'exemple fourni) pipetés dans l'oropharynx d'une souris anesthésiée sont livrés aux poumons par aspiration (inhalation). Nous et d' autres ont utilisé la technique de la pneumonie par aspiration avec succès ^6-9. Cette méthode poumon-livraison polyvalent et facile à apprendre peut être étendue à la prestation de nombreux agents non caustiques supplémentaires pour les poumons, y compris les cytokines et d' autres protéines, des molécules d'agents pathogènes associés (par exemple, lipopolysaccharide), les cellules ( par exemple, le transfert adoptif), et les toxines (par exemple, la bléomycine). En plus de discuter des considérations techniques importantes, nous décrivons également une approche intégrée, quantitative pour évaluer la réponse de l' hôte à la suite de la pneumonie, y compris la mesure en aval de la clairance bactérienne (c. -à- unité formant colonie [CFU] quantification dans les poumons et périphériques organes) et leucocytaire l'accumulation dans l'espace aérien.