Вирус простого герпеса (ВПГ) может вызвать целый ряд заболеваний у людей с умеренными неосложненных поражений слизистых до угрожающих жизни инфекций. ВПГ 1 (HSV-1) преимущественно связана с орофациальных инфекций и энцефалита, тогда как ВПГ 2 (HSV-2), более вероятно вызывает генитальные инфекции ^1. В то время как существует значительный прогресс в понимании того, как ВПГ входит в культуре клеток, инициирует инфекции и производит потомство вирусной, мы мало знаем о вирусной инвазии пути (ов) в ткани на клеточном уровне ^2. Для изучения HSV кожи или слизистой оболочки, инфекции мышей, кроликов и морских свинок были использованы в качестве модельных животных. Инфекции кожи был создан внутрикожной инъекцией или царапин кожи в присутствии вируса, и развитие болезни коррелирует с продукции вируса. Эти методы помогли понять различные аспекты патогенеза заболевания, и используются для оценки противовирусные препараты. Для изучения HSV-инфекции в Tissuе уровня, органотипической модели кожи человека были применены. Как скорость распространения инфекции ограничен в этих плот культур, лишь ограниченное число исследований следственных инфекции, распространение вируса и последствий антивирусных компонентов были опубликованы ^3-6.

Для того чтобы охарактеризовать клеточные детерминанты, которые играют роль в HSV-1 инфекции в неповрежденной эпителия, мы создали протокол для бывших естественных инфекции исследований мышиных эпидермиса ^7. Кожа получали из новорожденных или из хвостов взрослых мышей. Так ВПГ-1 не может инфицировать полные образцы кожи, которые были погружены в вирус-содержащей среде, мы разделены эпидермис от дермы путем обработки диспаза II. После плавающей эпидермиса листов на вирус среде, содержащей, инфицированные клетки могут быть визуализированы в эпидермального базального слоя в разное время постинфекционные (PI) ^7. Для визуализации инициации инфекции в отдельных клетках до вирусной репликации аго производство вируса, мы окрашивали антителами против зараженной клетки-белка 0 (ICP0), который является одним из первых белков, выраженных в ходе HSV-1 инфекции. Клеточная локализация ICP0 проходит через различные фазы в начале инфекции. В то время как ICP0 присутствует в ядерной очагов на ранней стадии экспрессии вирусных генов, релокализации ICP0 в цитоплазму указывает более позднюю фазу инфекции ^8.

Мы использовали экс естественных условиях инфекция анализа эпидермиса листов из разных мышиных моделях, чтобы проверить потенциальную роль различных клеточных факторов во время инфекции. Для устранения последствий Rac1 в качестве ключевого регулятора динамики актина, мы заражены эпидермис мышей с кератиноцитов конкретных удаление гена Rac1 ^9. Эта модель позволила нам изучить последствия недостаточного Rac1 на эффективность ВПГ-1 инфекции в эпидермального кератиноцитов слоев. Сравнение с зараженных эпидермиса управления помета повторноне ружены никакого существенного различия, указывая, что отсутствие Rac1 не имели никакого эффекта на инициации инфекции в базального слоя эпидермиса ^7. Использование дополнительных мышиных моделях позволили нам обратиться, какие клеточные рецепторы опосредуют вступления в эпидермисе. Заражение эпидермальные листов или из nectin-1- или HVEM-дефицитных мышей с ВПГ-1 показали, что начальная проникновение вируса в ткани сильно зависит от наличия nectin-1 ^10. Кроме того, наши результаты показывают, что HVEM может также служить в качестве рецептора в мышиных эпидермиса, хотя менее эффективно, чем nectin-1 ^10.

Для решения пространственное распределение инфицированных клеток в эпидермального слоев, мы представляем себе ICP0 выражение в срезах тканей и эпидермиса тотальных (рисунок 1). В криосрезов полной кожи, не ICP0-экспрессирующие клетки не обнаружены (рисунок 1). В противоположность этому, криосрезы эпидермальных листов демонстрируют цитоплазматическиеICP0 выражение в базального слоя уже в 3 часа пи (рисунок 1). В более поздние времена, вирусная распространяется на супрабазальных слои могут быть визуализированы. Пространственное распределение зараженных клеток базального слоя могут быть легко проследить в эпидермальных тотальных (рисунок 1). После инфицирования ВПГ-1 при 100 КОЕ / клетку, примерно 50% из базальных кератиноцитов в эпидермисе межфолликулярного показать ICP0 выражение в 1,5 ч пи В этот момент времени большинство инфицированных клетки экспрессируют ядерный ICP0. Релокализации ICP0 в цитоплазму с указанием более поздней стадии выражения начале гена присутствует почти во всех клетках в 3 ч пи (рисунок 1). Эти режимы визуализации инфицированные клетки при экс естественных условиях ВПГ-1 инфекции дают мощный анализ для изучения влияния ингибиторов или удаленных / мутантных клеточных компонентов на проникновения вируса и распространения в тканях.