וירוס הרפס סימפלקס (HSV) עלול לגרום למגוון של מחלות בבני אדם מנגעי mucocutaneous מסובכים קלים לזיהומים מסכני חיים. סוג HSV 1 (HSV-1) קשור דומיננטי עם זיהומים ודלקת המוח orofacial, ואילו HSV מסוג 2 (HSV-2) סביר יותר גורם לזיהומים באברי המין ^1. אמנם יש התקדמות משמעותית בהבנה כיצד HSV נכנס תאים בתרבית, יוזם זיהום ומייצר צאצאים נגיפיים, אנחנו יודעים מעט מאוד על מסלול ויראלי הפלישה (ים) לתוך רקמה ברמה התאית ^2. ללימודים של עור HSV או זיהומים ברירית, עכברים, ארנבות ושרקנים שימשו כמודלים של בעלי חיים. דלקת עור הוקמה על ידי הזרקה תוך-או על ידי מגרד את העור בנוכחות של וירוס, והתפתחות מחלה הייתה מתואמת עם ייצור וירוס. שיטות אלה עזרו להבין היבטים שונים של היווצרות מחלה, והם משמשים להערכת תרופות אנטי. ללמוד זיהום HSV בtissuרמת ה, מודלים עור אנושיים organotypic יושמו. כשיעור הזיהום מוגבל בתרבויות רפסודה אלה, רק מספר מוגבל של מחקרים חוקרים זיהום, התפשטות נגיפית ואת ההשפעות של רכיבים אנטי פורסמו ^3-6.

כדי לאפיין גורמים סלולריים שמשחקים תפקיד בזיהום HSV-1 באפיתל שלם, הקמנו פרוטוקול ללימודי זיהום vivo לשעבר של האפידרמיס עכברי ^7. עור הוכן מתינוקות או מהזנבות של עכברים בוגרים. מאז HSV-1 לא יכל להדביק דגימות עור מלאים, שהיו שקועים במדיום המכיל וירוס, נפרדנו מהאפידרמיס הדרמיס על ידי הטיפול השני dispase. לאחר צף של גיליונות אפידרמיס על מדיום המכיל וירוס, ניתן דמיינו תאים נגועים בשכבת בסיס אפידרמיס בpostinfection השונים פעמים (PI) ^7. כדי להמחיש את החניכה של זיהום בתאים בודדים לפני שכפול נגיפיND ייצור וירוס, אנחנו מוכתמים עם נוגדן נגד החלבון נגוע תא 0 (ICP0), שהוא אחד מהחלבונים הראשונים הביעו במהלך זיהום HSV-1. הלוקליזציה הסלולרית של ICP0 עוברת דרך שלבים ברורים בזיהום מוקדם. בעוד ICP0 נמצא במוקדי גרעין בשלב מוקדם של ביטוי גנים נגיפי, relocalization של ICP0 לציטופלסמה מציין שלב הבא של זיהום ^8.

אנו משמשים assay זיהום vivo לשעבר של גיליונות אפידרמיס ממודלי עכבר שונים על מנת לבחון את התפקיד הפוטנציאלי של גורמים סלולריים שונים במהלך הדבקה. כדי לטפל בהשפעה של Rac1 כרגולטור מרכזי של דינמיקה אקטין, אנחנו נגועים האפידרמיס של עכברים עם מחיקת keratinocyte הספציפית של גן Rac1 ^9. מודל זה מאפשר לנו ללמוד את ההשלכות של Rac1 הלקוי על היעילות של זיהום HSV-1 בשכבות keratinocyte אפידרמיס. ההשוואה לעור נגוע של המלטת שליטה מחדשvealed אין הבדל משמעותי, מצביע על כך שהעדר Rac1 לא היה השפעה על תחילתו של זיהום בשכבת הבסיס של האפידרמיס ^7. השימוש במודלים של עכברים נוספים אפשרו לנו לטפל בי קולטנים סלולריים לתווך כניסה לאפידרמיס. הדבקת גיליונות אפידרמיס משני nectin-1- או עכברי HVEM לקויים עם HSV-1 עולה כי הכניסה הנגיפית הראשונית לרקמה מאוד תלויה בנוכחותו של nectin-1 ^10. יתר על כן, התוצאות שלנו מראות כי HVEM גם יכול לשמש כקולטן בעור בעכברים, אם כי בצורה פחות יעיל מאשר nectin-1 ^10.

כדי לטפל בפריסה המרחבית של תאים נגועים בשכבות אפידרמיס, אנחנו לדמיין ביטוי ICP0 בסעיפים רקמות וmounts אפידרמיס השלם (איור 1). בcryosections של עור מלא, לא להביע תאי ICP0 מזוהים (איור 1). לעומת זאת, cryosections של גיליונות אפידרמיס להפגין cytoplasmicביטוי ICP0 בשכבת הבסיס כבר בשעת 3 pi שעות (איור 1). בתקופות מאוחרות יותר, נגיפי מתפשט לsuprabasal שכבות ניתן דמיין. הפריסה המרחבית של תאים נגועים בשכבת הבסיס יכולה להיות בקלות מיושמת בmounts אפידרמיס השלם (איור 1). על זיהום HSV-1 ב 100 PFU / תא, כ -50% מקרטינוציטים הבסיס באפידרמיס interfollicular להראות ביטוי ICP0 1.5 pi משאבי אנוש בנקודה זו בזמן תאים הנגועים ביותר להביע ICP0 הגרעיני. Relocalization של ICP0 לציטופלסמה המציין שלב מאוחר יותר של ביטוי גנים המוקדם נמצא כמעט בכל התאים בשעה 3 pi (איור 1). מצבים אלה של הדמיה תאים נגועים על זיהום HSV-1 vivo לשעבר מספקים assay רב עוצמה כדי לחקור את ההשפעה של מעכבים או של רכיבים סלולריים מוטציה נמחקו / בכניסת ויראלי והתפשטות ברקמה.