Subnormothermic的技术<em>前体内</em>肝脏灌注的存储，评估和修复边际移植肝

该协议的示意图示于图1。 图1研究协议。肝损伤的猪的研究设计基于心脏死亡（DCD）的模式后捐赠。所有的肝血管解剖后，心源性猝死是诱发其次是温暖的移植缺血45分钟。以模拟在临床上的供体和受体的医院之间的移植物运输，移植物后冷，双掣式冲厕储存在冰4小时。冷藏后，该器官是subnormothermic灌流6小时，以评估灌注稳定性。在移植模型中，灌注时间可能会缩短，以充电能量储存和评估机构的生存能力。 请他重新查看本图的放大版本。 1，动物注：男约克夏猪，30〜35公斤，被用于这项研究。所有动物的人文关怀符合'实验动物照护原则'由全国社会医学研究和“指南”对实验动物的照顾'由美国国立卫生研究院公布的制定。在多伦多综合研究所的动物保护委员会批准的所有研究。 2，器官检索宅男约克夏猪的研究设施灌注/移植前1周减少应激水平，并习惯于动物们的居住条件。不到2天壳体里面的设施会导致应力诱导的生理反应，其可以改变灌注的结果22,23。 麻醉的猪通过肌肉注射（IM）注射氯胺酮（25毫克/公斤），阿托品（0.04毫克/千克）和咪达唑仑（0.15毫克/千克）的混合物。 此前插管，保证猪自然呼吸2升的氧气服用5％异氟醚。插管前喷声带用2％利多卡因2分钟，以避免声带痉挛。例如，对于一个35千克猪用6.5 FR。气管插管。阻塞气管插管用3-5毫升的室内空气。 插管后，用capnometry确认无误插管。降低了异氟醚气至2％。呼吸机设置为14-16次/分和10毫升/千克体重的潮气量。 放置一个20G的静脉内（IV）导管在耳静脉中的一个，以允许注入的乳酸林格氏溶液（200ml每小时）。然后擦洗猪，需要装无菌单。 做中线切口，然后左横向延伸。用毛巾盖住大大小小的肠子，并将它们移动到左侧。 独立INFErior腔静脉（IVC）和从彼此远端主动脉;结扎主动脉分支到后面;隔离和贴壁组织游离肾动脉。 划分falciforme韧带和使用烧灼三角韧带。 通过胰腺和门静脉之间的腹膜切开解除门静脉。扎断静脉胰腺门静脉引流。 剖析下面的门静脉腹腔干，并按照它倒退到主动脉。包围肠系膜动脉有2-0平手;围绕脾和胃左动脉，其中分支向后向腹腔干。解剖腹腔干断门静脉。 结扎肝十二指肠韧带内的淋巴管，防止淋巴漏。划分关系之间的胃右动脉。结扎小静脉。从韧带分离胆管结扎后远端分裂它。 解剖心脏和腹腔TR之间的隔膜背后的主动脉UNK;周围放置主动脉2-0平手。 从右侧利用电烙术下静脉释放肝脏;用剪刀对静脉和肝之间的上部。 切除胆囊和烧灼从胆囊床出血点。 管理肝素静脉千国际单位/公斤体重捐助。对于DCD模式，由心脏内注射40 MVAL氯化钾3分钟肝素注射后诱发心脏骤停。设置心脏停搏作为热缺血的起点。 对于灌注，收集心脏死亡后立即1.6升猪血中CPDA袋（柠檬酸盐，磷酸盐，葡萄糖，腺苷）。执行软旋（2000 XG不带刹车）。除去血浆和无菌条件下（生物安全柜II类）下的白膜层和存储在CPDA袋红细胞输血。 导管插入门静脉和主动脉器官平齐线。打结围绕股骨，肾，脾，肠系膜和胃左领域的预先设定的关系系列以及上部主动脉。对于心脏跳动的供体（HBD）模型，进行心脏跳动的情况下主动脉和门静脉插管。 经过45分钟热缺血，经主动脉（压力袋）和门静脉（重力驱动）采用双灌注冲洗与美国威斯康星大学（UW）解决方案的肝脏。 割肝出了猪，让所有剩余的船只长。 在后面表制备，使用Satinsky夹紧和逆行通过下腔静脉冲洗肝脏第二次用约0.5升UW液，直到门静脉流出是清楚夹住上IVC。 从主动脉和腹腔干系了所有的动脉分支。约0.5升的UW液进行动脉回表的压力灌注。 冲洗用UW液胆管。 导管插入下腔静脉使用半“×8”减速与鲁尔锁的上部和下部;导管插入用8“门静脉和肝动脉; X 1/4“和6.3”×8“减速带Luer锁。使用上，下腔静脉的静脉引流。 将肝脏中的风琴袋，关闭风琴袋，以及肝脏储存在冰直到灌注已经开始。 3， 体外肝脏灌注制备含有2000毫升斯蒂恩溶液的灌注溶液，加入400ml洗涤红细胞，550毫克丙酮酸钠，加入100ml的氨基酸溶液（10％Travasol），10毫克葡萄糖酸钙，千IE速效胰岛素，将1克头孢唑啉，500毫克灭滴灵， 10,000 IU肝素。添加其它分子的血管扩张，免疫抑制，活性氧的清除，或基于特定研究协议肝脏细胞治疗。 对于透析组件，使用标准的透析液含有3.5毫钾，25mM的碳酸氢钠，27 mM的葡萄糖，以及275毫克/升的丙酮酸。 成立灌注回路（架构见图2）。 图2电路的设置。即将从主储存器的起始和结束点，该灌注溶液通过一个氧合器驱动的离心式泵。该溶液的氧合作用后右，电路分成运行到透析器单元，用于电解质平衡较小的线和更大的线运行到白血球过滤器以减少残存的白血细胞（WBC）的。贯穿透析的溶液返回到主油箱。白细胞过滤后，将电路分割再次成2相等的线。一线路运行在高压力（约60毫米汞柱），直接进入主动脉灌注到肝动脉。其他线路排入第二水库。从这个水库的门静脉灌注。门灌注的压力取决于储层的溶液水平（约2-6毫米汞柱）的高程能量。所有的液体是博士通过基础设施和超肝静脉回主藏ained。为了减少重力均匀灌注，肝脏被放置在装满温度调节水的游泳池。它是从水中分离的防渗膜，它在游泳灌注停牌。 请点击这里查看该图的放大版本。 收集电路采用3升的储液（主要水库）所有液体和夹紧流出。 流出连接到离心泵其次是商业充氧。 氧合的背后，分裂成管2行。一条线连接到透析器，并重新流回主油箱。连接第二行白细胞减少过滤器。 分手了就行了白细胞降低过滤器插入动脉线，供应灌注液对肝动脉后，和门户v源性行提供的灌注液到第二水库，水渠进入门静脉在重力作用流出。夹紧门户流入。 动脉线连接到腔静脉引流线进入主藏流体的回忆。 收集腹水或从肝脏灌注溶液的泄漏，准备连接到主储存器的抽吸线。 松开夹子流出的主要水库，并填写了电路的灌注液。启动离心泵在1500转/分钟。该灌注溶液将通过动脉线路驱动器插入到上腔静脉行返回到主油箱。确保所有的空气赶出了电路。 开启气体供给到氧合器。 以肝脏落冰。冲洗用生理盐水UW液。 将肝，以其凸面朝下，以方便访问到的容器，最好是在重力的环境中，以避免器官压缩时的接触面。用热和冷却的水洗澡。电路和水浴的起始温度设定为20℃。覆盖水浴防渗膜，然后将肝上的膜。浸没灌注液的肝脏减少重力驱动的压缩。 减小离心泵的速度到1000转/分，并把两个夹子在动脉和腔静脉线的连接。然后，切管的夹具之间。采用3路连接器，连接两个静脉流出，并将其连接到腔静脉行。 释放从动脉线夹紧，倾灌注溶液进入动脉插管除掉气泡，并且线路连接到所述套管。增加离心泵1500转/分钟。释放从腔静脉线的第二夹具。 释放门脉水库钳位，以填补它。让灌流液倒入门户cannuLa和连接。要特别注意稳定的流体水平的门户水库。 连接压力线的动脉，门静脉和腔静脉插管的鲁尔锁。 以模拟生理条件下，应用处理成合适的容器中。注射葡萄糖进入门静脉，而不是进入动脉线，以建立一个模拟的梯度增加门静脉葡萄糖梯度诱导糖原合成24,25。 肝脏连接到电路之后，提出在60分钟内温度升至33℃。 瞄准动脉起始流量在约250毫升/分钟，在40毫米汞柱。这可能一旦压力增大到70毫米汞柱灌注期间达到700毫升/分钟。 在起始温度，旨在为500-600毫升/分钟，在3-5毫米汞柱门静脉的流动。升高温度后，监视门静脉血流量，这将增加高达1100毫升/分钟，在4-6毫米汞柱。避免超过上述生理学门脉压力的L值（约8毫米汞柱），以保护正弦窗孔26。避免超过总流量高于2000mL /分钟，以防止损坏的器官。通过降低主藏，防止肝充血由功能流出道梗阻将流出-2毫米汞柱。 透析组分添加到所述电路，以平衡的灌注溶液，以规定的值27。设置透析液流至500毫升/小时。采取特别注意调节透析流出，使得灌注溶液既不稀释也不浓缩。内灌注的第一个小时的主贮存器必须被仔细观看！ 确保组织的氧合齐用的O 2（95-98％）和CO 2（2-5％）为主的混合气体成分，以恢复并维持器官功能。灌注过程中使用可变气，因为肝脏改变其代谢和灌注过程中pH值的要求。 开始时保持低pH值灌注用悖论的pH概念28，以保护器官和避免严重的组织损伤，可能导致从下复氧到生理pH的快速连接中，由于存储在UW液后，将器官具有低于7的酸中毒的pH调节CO的分压2连续下降至25-30毫米汞柱，以使pH值达到1小时内的生理水平。 加入钠或碳酸氢钾的电路来实现在灌注溶液标准碳酸氢盐的生理浓度。它注入仔细反复下血气和电解质的控制。 监测灌注通过定期静脉和动脉血气和AST分析。静脉PO 2仍高于灌注期间，175毫米汞柱。监控血管的流量和压力，并注意稳定灌流一个常数血管阻力。 保持灌注系统稳定长达8小时。在离体灌注期末，凉爽走在灌注系统至20℃，并从肝断开电路的管道后，双重冲洗灌注溶液从肝脏用冰冷的UW溶液。存储再次在冰上放置在无菌的风琴袋肝脏。