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의학

Protocolo de Exame Clínico para Detectar Scrapie Atípico e Clássico em Ovelhas

Published: January 19, 2014
doi:
10.3791/51101
,
1Specialist Scientific Support Department,Animal Health and Veterinary Laboratories Agency Weybridge

Summary

Um protocolo de exame clínico curto é apresentado para auxiliar na detecção de sucata clássica e atípica em ovelhas e cabras.

Abstract

O diagnóstico de scrapie, uma encefalopatia esponiforme transmissível (TSEs) de ovelhas e cabras, baseia-se atualmente na detecção de proteína prion associada à doença por testes post mortem. A menos que uma amostra aleatória da população de ovinos ou caprinos seja ativamente monitorada para scrapie, a identificação de casos de scrapie depende do relato de suspeitos clínicos, o que depende da familiarização do indivíduo com a doença e da capacidade de reconhecer sinais clínicos associados ao scrapie. O scrapie não pode ser considerado no diagnóstico diferencial de doenças neurológicas em pequenos ruminantes, particularmente em países com baixa prevalência de scrapie, ou não reconhecido se apresenta como forma nãoprúrrica como sucata atípica. Para auxiliar na identificação de suspeitos clínicos, é apresentado um protocolo de exame curto para avaliar a exibição de sinais clínicos específicos associados a formas pruriticas e nãoprúrticas de TSEs em ovinos, que também poderiam ser aplicadas às cabras. Isso inclui avaliação de comportamento, visão (por teste da resposta à ameaça), prurido (testando a resposta ao arranhão) e movimento (com e sem vendas). Isso pode levar a um exame neurológico mais detalhado de relatar animais como suspeitos de sucata. Também pode ser usado em estudos experimentais do TSE de ovinos ou caprinos para avaliar a progressão da doença ou identificar ponto final clínico.

Introduction

Scrapie é uma encefalopatia espongiforme transmissível (TSE) de ovelhas e cabras, que pertence ao grupo de distúrbios de dobra de proteínas, como encefalopatia espongiforme bovina (EEB) em bovinos, doença de desocupação crônica em veados e doença de Creutzfeldt-Jakob em humanos. O diagnóstico é feito após a morte, detectando a forma anormal da proteína prion, que é resistente à proteína, geralmente no cérebro. Duas grandes formas de scrapie que ocorrem naturalmente podem ser distinguidas, que são epidemiológicas, patologicamente e bioquimicamente diferentes: scrapie clássico e scrapie atípico. Além disso, uma doença neurológica com sinais clínicos clássicos semelhantes a scrapie pode ser induzida em ovelhas e cabras por infecção experimental com o agente BSE6,10-11. De fato, a EE de ocorrência natural foi diagnosticada em cabras3,17. O controle do scrapie clássico (e da EE em ovelhas se ocorreu naturalmente) tem sido alcançado pela reprodução para resistência genética visando o gene da proteína prion, mas isso é mais difícil para o scrapie atípico, que acredita-se ser uma doença esporádica e foi diagnosticado em países considerados livres de scrapie clássico, por exemplo, Nova Zelândia7.

Scrapie é uma doença neurológica de ovinos e caprinos adultos que resultam em mudanças de comportamento, sensação e movimento, mas a doença é lentamente progressiva, e os sinais clínicos muitas vezes não são reconhecidos porque o protetor animal ou cirurgião veterinário pode não estar familiarizado com os sinais clínicos, ou scrapie não é considerado em tudo no diagnóstico diferencial de doenças neurológicas em pequenos ruminantes.

O protocolo de exame proposto foi concebido para auxiliar no diagnóstico clínico de scrapie com dois propósitos em mente: deve ser consideravelmente breve permitir a varredura de muitos animais em um curto período de tempo, mas específico o suficiente para permitir a detecção de animais afetados por sucata, o que é alcançado avaliando a presença de sinais clínicos frequentemente encontrados em animais afetados por sucata. Este protocolo é uma pequena modificação do usado para monitorar cabras em busca de sinais de scrapieclássico 11 e inclui vendagen do animal, o que pode exacerbar sinais clínicos normalmente não associados ao scrapie9.

Protocol

1. Avaliação da Postura Avalie a postura do animal enquanto não foi perturbado. Os animais afetados por TSEs podem ficar com membros de base larga, podem parecer curvados ou podem ficar com um carro de cabeça baixa. 2. Avaliação do Comportamento Estude o comportamento do animal, quando deixado sozinho, quando abordado, e quando manuseado. Animais afetados pelo TSE podem apresentar mentação alterada ficando separadamente de outras ovelhas ou não seguindo imediatamente outras ovelhas. Quando o animal é abordado, ele pode fugir e desmaiar, ou ele cai no chão quando manuseado. O sentido horário compulsivo ou no sentido anti-horário pode ser visto em ovelhas com raspagem atípica. 3. Teste de resposta a ameaças Segure a cabeça do animal para testar a resposta à ameaça: mova a mão ou vários dedos várias vezes em direção a cada olho do animal para induzir uma resposta piscando, mas tenha cuidado para não tocar em nenhum pelos faciais ou criar qualquer turbulência de ar que possa fazer o animal piscar. A resposta à ameaça pode estar ausente em animais afetados por sucata, particularmente em ovelhas com raspagem atípica. Embora o teste da resposta à ameaça seja o único teste nervoso craniano usado como parte do protocolo, a inspeção visual do rosto durante este procedimento pode revelar outros sinais de déficits neurológicos normalmente não vistos em scrapie, por exemplo, paralisia facial. Se o animal não piscar em resposta à ameaça é aconselhável testar o reflexo palpebral tocando as pálpebras para garantir que a incapacidade do animal de piscar não seja causada por paralisia facial. 4. Teste da resposta de arranhões Certifique-se de que o animal está calmo durante este procedimento porque o teste não pode ser interpretado em um animal em dificuldades. Raspar áreas das costas nas regiões torácica, lombar e sacral, parando entre cada episódio de arranhão. Se o animal responder com movimentos rítmicos da cabeça ou do corpo, ou se mover ou lamber os lábios ao arranhar uma determinada área, repita o teste de arranhão para confirmar a reprodutibilidade da resposta ao arranhão. Uma resposta repetível é geralmente provocada em animais que são pruriticos, que geralmente incluem ovelhas com scrapie clássico ou cabras com a forma pruritica de scrapie, mas geralmente não há resposta em ovelhas com sucata atípica a menos que outras condições de pele pruritica ou ectoparasitas estejam presentes. 5. Verificação de perda de lã e lesões de pele Inspecione a pele. Prurido devido a raspagem geralmente causa queda de cabelo, que pode estar na pesquisa, costas, garupa, lado do peito ou abdômen devido a esfregar ou arranhar excessivamente onde a pele subjacente parece normal. As abrasões podem aparecer mais tarde se o animal tiver a oportunidade de esfregar objetos pontiagudos. Ferimentos de mordida podem aparecer, particularmente nos membros, devido ao excesso de mordiscar os membros. 6. Condição do corpo de pontuação Avalie a condição corporal do animal palpando os processos dorsais e transversais das vértebras lombares. Scrapie pode causar uma perda progressiva da condição corporal onde os processos transversais das vértebras lombares podem ser facilmente sentidos individualmente, e as extremidades dos processos parecem nítidas. 7. Vendar o Animal Cubra os olhos do animal com um capuz, que pode ser feito usando qualquer saco não-ver-através onde um canto é cortado para permitir a respiração do animal. Solte o animal somente se não houver preocupações de segurança, e não há risco de ferimentos devido a um animal em pânico; caso contrário, manter o porão das ovelhas e estudar os movimentos dos animais enquanto ainda está no controle do animal. A venda pode exacerbar sinais de um sistema vestibular ou disfunção cerebelar, que pode ser obscurecida pela capacidade do animal de compensar através de sua visão. A perda de equilíbrio, a incoordenação ou a circlínica podem ser provocadas, particularmente em ovelhas clinicamente não notáveis com scrapie atípico. 8. Avaliação do Movimento animal Estude a marcha e os movimentos musculares do animal quando ele se move livremente. A incoordenação pode ser caracterizada por movimentos de base ampla dos membros traseiros, pulando com ambos os membros traseiros, ou balançando excessivamente nos quartos traseiros, o que pode resultar em tropeços ou brevemente sentados. A presença de um tremor na cabeça é muitas vezes sutil quando o animal não é perturbado, mas pode se tornar mais perceptível durante ou após a conclusão do exame clínico. 9. Interpretação Considere o significado dos achados em relação ao scrapie. Embora a presença de sinais individuais, como uma resposta repetível a arranhões, tremores, comportamento anormal, circulando, episódios em colapso, ataxia, ou uma resposta à ameaça ausente, possa ter várias causas, a ocorrência combinada de dois ou mais desses sinais é altamente sugestiva de scrapie em ovelhas ou cabras.

Representative Results

Ovelhas clinicamente saudáveis. Poll Dorset wether de um rebanho sem arranhões intracerebrally inoculado com cérebro bovino de origem neozelandesa e examinado aos 49 meses após a inoculação. Esta ovelha tem uma postura normal, se comporta normalmente, exibe uma resposta normal de ameaça(Figura 1),não reage ao teste de arranhão, tem um velo intacto, e uma condição corporal muito boa. É clinicamente incomum quando vendado e não mostra sinais de distúrbio de movimento. Ovelhas de scrapie atípicas apresentando a forma nãoprúrtica de TSEs em ovelhas. Cheviot wether de um rebanho livre de arranhões intracerebrally inoculado com homogeneizar cérebro de um caso atípico de campo de sucata do mesmo genótipo de proteína de prion (AHQ/AHQ) e examinado aos 36 meses após a inoculação. Esta ovelha também tem uma postura normal, mas se comporta de forma diferente com as outras ovelhas na caneta e circula no sentido horário. Não pisca quando a resposta à ameaça é testada. Arranhar não provoca nenhuma resposta, e nenhuma mudança de lã é aparente, mas a condição corporal é justa. Ele circula no sentido horário quando vendado(Figura 2) e perde o equilíbrio. A marcha é ataxic, e um tremor fino na cabeça é visível. Ovelhas BSE atípicas apresentando a forma pruritica de TSEs em ovelhas, que é clinicamente semelhante à apresentação clínica de ovelhas clássicas afetadas por scrapie. Por essa razão, um caso clássico de scrapie não está incluído. Poll Dorset wether de um rebanho sem raspagem intracerebrally inoculado com peitoico atípico (tipo L) cérebro BSE e examinado aos 50 meses pós-inoculação. Esta ovelha fica ligeiramente curvada, tende a manter os membros traseiros de base larga e cai no chão quando pego. A resposta à ameaça é fraca. O arranhão de várias áreas da parte de trás provoca movimentos de cabeça ou lábio(Figura 3),e há perda de lã com trauma de pele menor na pesquisa. O estado do corpo é bom. Quando vendado, reluta em se mover e descansa sua parte traseira no obstáculo para manter o equilíbrio. A ovelha é ataxic e exibe hipermetria de membros do antepé. Figura 1. Teste de resposta à ameaça. Gesto ameaçador em direção ao olho do animal induz uma resposta piscando. Clique aqui para ver imagem maior. Figura 2. Vendando. No sentido horário, circulando provocado por vendar as ovelhas com um capuz. Clique aqui para ver imagem maior. Figura 3. Teste da resposta de arranhões. O arranhão da parte de trás provoca lambida labial com movimentos laterais da cabeça Clique aqui para ver imagem maior.

Discussion

Scrapie é uma doença listada pela Organização Mundial da Saúde Animal (OIE), que, na ausência de um teste pré-mortem rápido e confiável, conta com a capacidade dos agricultores ou veterinários de reconhecer os sinais clínicos associados a essa doença. A maioria dos casos de scrapie, particularmente atípicos, no entanto, são atualmente encontrados pela vigilância do TSE, ou seja, por exame cerebral de pequenos ruminantes sujeitos a abate ou animais de estoque caídos. A criação de ovelhas para resistência ao scrapie clássico, que reduziu o número de casos clássicos de scrapie, provavelmente também reduziu a conscientização das pessoas para a doença, de modo que é menos frequentemente considerada no diagnóstico diferencial de distúrbios neurológicos em ovinos. O scrapie atípico também tem baixa prevalência com aproximadamente cinco casos em matadouros e oito casos em estoque caído por 10.000 testados na Europa4. Além disso, o prurido, geralmente evidente como alopecia com ou sem excoriação, é muitas vezes considerado um sinal característico de scrapie13. Assim, uma doença neurológica sem prurido concomitante como observado no scrapie atípico12 ou na forma nãoprúrida de scrapie11 caprino não pode levantar suspeita de scrapie.

Este protocolo de exame foi concebido para identificar sinais clínicos do TSE em ovinos, avaliando sinais clínicos específicos associados a vários tipos de scrapie (scrapie atípico e clássico, este último representado por uma ovelha atípica BSE-inoculada, que apresentava sinais clássicos de scrapie). No scrapie clássico, a porcentagem de casos que apresentaram uma resposta positiva de risco (“reflexo de mordiscar”) variou de 50 a 77 em mais de 100 ovinos estudados5,8. Os transtornos de movimento podem ser observados em até 81% dos casos clássicos de scrapie com base em vários estudos18. A incoordenação também é um grande sinal em vários casos de scrapie atípico, muitas vezes acompanhados de alterações comportamentais1, mas sinais adicionais relatados tanto em ovelhas de scrapie atípicas e experimentalmente infectadas foram circulantes e deficiência visual12,15,16, razão pela qual a venda de olhos e os testes da resposta à ameaça estão incluídos no protocolo de exame. A pontuação da condição corporal, por exemplo, utilizando um sistema de pontuação de 6 pontos14,permite a avaliação da emaciação, que pode ser observada em ovelhas afetadas por sucata5. Embora os critérios clínicos para auxiliar na detecção de scrapie em ovelhas tenham sido propostos anteriormente2, estes apenas relacionados à detecção de scrapie clássico e levaram em conta o histórico clínico, que pode não estar disponível se os animais forem apresentados em um matadouro.

O protocolo atual permite a triagem de muitos animais para sinais de sucata em um curto período de tempo. Além disso, o protocolo de exame pode ser aplicado a estudos experimentais de sucata em ovinos e caprinos para monitorar o início clínico, a progressão e o ponto final. No entanto, não substitui um exame físico e neurológico mais detalhado pelo registro adequado do histórico de casos clínicos, possivelmente seguido de testes diagnósticos auxiliares (exame de sangue e fluido cefalorraquidiano; técnicas de imagem mais sofisticadas, se for o caso), o que pode ser necessário posteriormente para descartar várias outras condições em pequenos ruminantes que apresentam sinais semelhantes , como doenças neurológicas metabólicas ou inflamatórias, abscessos cerebrais ou tumores.

Embora um exame clínico seja geralmente menos sensível na detecção de animais afetados pelo TSE do que testes post mortem baseados na detecção de proteína de prípria2,11, particularmente em um estágio inicial do período de incubação, este é atualmente o único método de detecção em animais vivos e mais relevante para os países que não possuem um sistema de vigilância direcionado para identificar pequenos ruminantes afetados pelo TSE.

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Os estudos que fornecem os animais foram financiados pelo Departamento de Alimentos, Meio Ambiente e Assuntos Rurais do Reino Unido e pela União Europeia (por meio de financiamento do Laboratório de Referência do TSE da UE). Reconhecemos o apoio dos gerentes de projeto, Dr.M. Simmons e Dr.M. Jeffrey.

References

  1. Benestad, S. L., Arsac, J. N., Goldmann, W., Nöremark, M. Atypical/Nor98 scrapie: properties of the agent, genetics, and epidemiology. Vet Res.. 39 (4), 19 (2008).
  2. D'Angelo, A., Maurella, C., et al. Assessment of clinical criteria to diagnose scrapie in Italy. Vet. J. 174 (1), 106-112 (2007).
  3. Eloit, M., Adjou, K., et al. BSE agent signatures in a goat. Vet. Rec. 156 (16), 523-524 (2005).
  4. Fediaevsky, A., Maurella, C., et al. The prevalence of atypical scrapie in sheep from positive flocks is not higher than in the general sheep population in 11 European countries. BMC Vet. Res. 6, 9 (2010).
  5. Healy, A. M., Weavers, E., et al. The clinical neurology of scrapie in Irish sheep. J. Vet. Intern. Med. 17 (6), 908-916 (2003).
  6. Houston, E. F., Gravenor, M. B. Clinical signs in sheep experimentally infected with scrapie and BSE. 152 (11), 333-334 (2003).
  7. Kittelberger, R., Chaplin, M. J., et al. Atypical scrapie/Nor98 in a sheep from New Zealand. J. Vet. Diagn. Invest. 22 (6), 863-875 (2010).
  8. Konold, T., Bone, G., et al. Associations of clinical signs and prion protein genotypes in British sheep with scrapie. Dtsch. Tierärztl. Wochenschr. 116 (11), 380-388 (2009).
  9. Konold, T., Bone, G., et al. Scrapie in goats. Vet. Rec. 161 (11), 395-396 (2007).
  10. Konold, T., Bone, G., et al. Pruritus is a common feature in sheep infected with the BSE agent. BMC Vet. Res. 4, 16 (2008).
  11. Konold, T., Bone, G. E., et al. Monitoring of clinical signs in goats with transmissible spongiform encephalopathies. BMC Vet. Res. 6, 13 (2010).
  12. Konold, T., Davis, A., et al. Clinical findings in two cases of atypical scrapie in sheep: a case report. BMC Vet. Res. 3, 1 (2007).
  13. Passler, T., Walz, P. H., Pugh, D. G., Pugh, D. G., Baird, A. N. . Diseases of the Neurologic System. In: Sheep and Goat Medicine. , 361-405 (2012).
  14. Russel, A. Body condition scoring of sheep. In Pract. 6 (3), 91-93 (1984).
  15. Simmons, H. A., Simmons, M. M., et al. Atypical scrapie in sheep from a UK research flock which is free from classical scrapie. BMC Vet. Res. 5, 8 (2009).
  16. Simmons, M. M., Konold, T., et al. The natural atypical scrapie phenotype is preserved on experimental transmission and sub-passage in PRNP homologous sheep. BMC Vet. Res. 6, 14 (2010).
  17. Spiropoulos, J., Lockey, R., et al. Isolation of prion with BSE properties from farmed goat. Emerg. Infect. Dis. 17 (12), 2253-2261 (2011).
  18. Ulvund, M. J., Hörnlimann, B., Riesner, D., Kretzschmar, H. . Clinical Findings in Scrapie. In: Prions in humans and animals. , 398-407 (2006).

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Konold, T., Phelan, L. Clinical Examination Protocol to Detect Atypical and Classical Scrapie in Sheep. J. Vis. Exp. (83), e51101, doi:10.3791/51101 (2014).
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