整装免疫荧光染色新生小鼠视网膜血管生成调查<em>在体内</em

血管生成是一种复杂的发育过程中，定义通过从预先存在的血管网形成新的血管，并通过多条信号通路的调节。其中最突出的是VEGF通路。血管内皮生长因子释放由缺血性细胞，导致血管生成的启动，在相邻的血管发芽。领先的内皮细胞从一个新的血管芽是'冰山'细胞，产生对VEGF的来源，伸出伪足，其次是'茎'内皮细胞增殖。在这种方式中，活化的内皮细胞迁移和增殖实现的无血管区域，在那里形成新血管管。为了稳定，以支持这些管子的血流量，血管内皮细胞与周皮细胞和平滑肌细胞，围绕新的血管^1。胚胎的血管形成及组织生长的血管生成是必不可少的。然而，它也有助于许多pathologi卡尔疾病，如癌症，而在血管生成中的缺陷与缺血性疾病。因此，开发有效的药物治疗作为治疗疾病的一种手段，是调节血管生成的极大兴趣。例如，有效的抗血管生成因子将减少癌的生长，而促血管生成的策略可以用于治疗缺血性疾病。因此，必须更好地了解新血管的形成和开发新的治疗策略，以提高或降低血管生长调节血管生成模型。

血管新生研究的基本要素是选择一个合适的血管模型。许多体外模型的目的是为了再现血管生成的基本步骤，如血管内皮细胞的迁移，增殖和存活^2,3。 在体外试验中经常使用的一种是有支链的网络上的基底膜基质的血管内皮细胞的形成，虽然吨他的是不特定的内皮细胞，也不会通常包含周细胞或平滑肌细胞的支持。评估体外芽生式血管生成，如胚体的测定，主动脉环测定和胎 ​​儿跖骨检测小鼠器官培养允许的上下文中的额外的支持细胞，血管内皮细胞的血管生成的分析。然而，这些检测方法的主要限制包括血流量不足，并随着时间的推移回归的船只，给一个有限的窗口进行分析。因此，更准确地了解血管生成的调控， 在体内模型中是必需的，如那些在小鼠皮下植入的海绵或基底膜插头开发，以及后肢缺血模型。然而，这些模型是具有挑战性的分析，由于复杂的三维结构的新生血管。与此相反，已证明斑马鱼胚胎的一个很好的模型可视化的血管生成在整个生物体^4。然而，进化更密切相关的人类比斑马鱼鼠标，让鼠标在许多情况下，一款首选机型。因此，出生后小鼠视网膜血管生成是一个很好的特点的血管生成研究的首选方法。它不仅提供了生理的设置，但也是一个二维的血管丛，可以很容易地可视化使用适当的荧光染料。血管网，血管内皮细胞增殖，发芽，血管周围细胞的招募和血管重塑的建筑都可以使用这种技术研究。

在新生小鼠视网膜，视网膜血管的发展发生在出生后的第一周。小鼠与人类不同的是，是天生的盲人和视网膜血管的出生后。视网膜血管产生的视网膜的中心靠近视神经在出生后的第0天（P0），血管生成和发展，形成高度组织ð血管丛到达视网膜周边约P8 ^5。在其特有的方式与毛细管丛逐渐成长从视盘向外朝向的外周，以产生一个有规律的交替模式具有介于其间的毛细血管网的动脉和静脉血管的发展。视网膜血管提供了一个理想模型来研究血管新生的血管可以很容易地确定，因为他们成长在什么本质上是一个二维平面，从而使得它比较容易检查视网膜血管台安装准备^5。已报道的方法，在数小时内体外内皮小费细胞反应进行分析隔离小鼠新生儿的视网膜^6。另外，需要更详细的调查整个视网膜血管和相关的血管标记免疫组的视网膜固定的标本在不同的发展阶段。

在这里，我们提供详细描述了一个可靠的和技术上直线前进的方法，我们使用整装染色小鼠视网膜血管丛，从最初的眼球摘除产后眼^（7）通过染色协议到最终成像显微镜下。