Summary

تحليل الرئوي نضوج خلية شجيري والهجرة خلال التهاب الشعب الهوائية التحسسي

Published: July 23, 2012
doi:

Summary

وصفنا استراتيجية لرصد نضوج والهجرة من الخلايا الجذعية رئوي ردا على ovalbumin في تحديد ovalbumin يسببها التهاب الشعب الهوائية التحسسي. ويمكن تعديل هذه الاستراتيجية لتقييم الهجرة من الخلايا الجذعية الرئوي في ضبط العدوى.

Abstract

الخلايا الجذعية (DCS) هم اللاعبون الرئيسيين المشاركين في الشروع في رد الفعل المناعي على التكيف من خلال تفعيل الخلايا التائية مستضد معين. البلدان النامية موجودة في الأنسجة الطرفية في حالة مستقرة، ولكن استجابة لتحفيز المستضد، DCS تناول مستضد وبسرعة تهاجر إلى الغدد الليمفاوية استنزاف حيث تبدأ T استجابة الخلية ضد 1،2 مستضد. بالإضافة إلى ذلك، البلدان النامية أيضا أن تلعب دورا رئيسيا في بدء الاستجابة المناعية الذاتية، فضلا عن الحساسية 3.

البلدان النامية تلعب دورا أساسيا في كل من الشروع في استجابة جهاز المناعة، والحث على التسامح في تحديد بيئة الرئة 4. بيئة الرئة هو مولد للتحمل إلى حد كبير، وذلك بسبب التعرض لمجموعة واسعة من المستضدات البيئية 5. ومع ذلك، في بعض الأفراد هناك انقطاع في التسامح، الأمر الذي يؤدي إلى تحريض الحساسية والربو. في هذه الدراسة، ونحن تصف استراتيجية، والتي يمكن استخدامها لمراقبة مجرى الهواء العاصمة نضوج وميغالتموينية في استجابة للمستضد المستخدمة لتوعية. قياس نضوج العاصمة مجرى الهواء والهجرة يسمح لتقييم حركية من خلال استجابة مناعية التهاب الشعب الهوائية التحسسي، ويساعد أيضا في فهم حجم للاستجابة المناعية لاحق جنبا الى جنب مع الآليات الكامنة.

ترتكز استراتيجيتنا على استخدام ovalbumin كعامل توعية. Ovalbumin الناجم عن الحساسية والربو هو نموذج يستخدم على نطاق واسع إلى إنتاج فرط الحمضات الهوائية، والتهاب رئوي وارتفاع مستويات الجلوبيولين وجدت خلال 6،7 الربو. بعد التوعية، هي الطعن الفئران عن طريق التسليم من داخل الأنف ovalbumin FITC المسمى، والذي يسمح لوضع العلامات المحددة للبلدان النامية الهوائية التي ovalbumin امتصاص. المقبل، وذلك باستخدام العديد من علامات العاصمة محددة، ويمكننا أن نقيم نضوج من هذه البلدان النامية، ويمكن أيضا تقييم هجرتهم إلى الغدد الليمفاوية استنزاف من خلال توظيف التدفق الخلوي.

Protocol

1. التوعية من الفئران مع Ovalbumin يعد حل OVA (V الدرجة؛ سيغما، MO) في برنامج تلفزيوني العقيمة بتركيز 1 ملغ / مل (يمكن تخزينها في حل درجة مئوية -80). من أجل إعداد OVA-الشب خليط، وتأخذ الشبة في أنبوب ويضاف حل…

Discussion

الطريقة المعروضة هنا يقدم نهجا يستند إلى التدفق الخلوي لتحليل البلدان النامية الرئوي، على أساس تسليم FITC-OVA لتحدي الشعب الهوائية. وهذا يسمح لرصد انتقائي من البلدان النامية الرئوي، الذي يستغرق OVA-FITC، وبالتالي فإن سكان العاصمة، والتي يتم مراقبتها بشكل فعال تلك التي تشا…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

وقد تم تمويل هذا العمل عن طريق المنح وكندا CIHR CF إلى الدكتور جيم هو جين تاو وكذلك من خلال منحة دراسية لدرجة الدكتوراة التي منحت لKushwah راهول من كندا CF.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number
Ovalbumin Sigma-Aldrich A5503
Alum Thermo Scientific 77161
OVA-FITC Sigma-Aldrich A9771
Collagenase D Roche 11088858001
Antibodies e-Bioscience  

References

  1. Kushwah, R., Hu, J. Role of dendritic cells in the induction of regulatory T cells. Cell Biosci. 20, (2011).
  2. Kushwah, R., Hu, J. Complexity of dendritic cell subsets and their function in the host immune system. Immunology. 133, 409-419 (2011).
  3. Lambrecht, B. N., Hammad, H. Taking our breath away: dendritic cells in the pathogenesis of asthma. Nat Rev Immunol. 3, 994-1003 (2003).
  4. Hammad, H., Lambrecht, B. N. Dendritic cells and epithelial cells: linking innate and adaptive immunity in asthma. Nat. Rev. Immunol. 8, 193-204 (2008).
  5. Lloyd, C. M., Murdoch, J. R. Tolerizing allergic responses in the lung. Mucosal. Immunol. 3, 334-344 (2010).
  6. Herz, U. The relevance of murine animal models to study the development of allergic bronchial asthma. Immunol. Cell Biol. 74, 209-217 (1038).
  7. Herz, U., Lumpp, U., Daser, A., Gelfand, E. W., Renz, H. Murine animal models to study the central role of T cells in immediate-type hypersensitivity responses. Adv. Exp. Med. Biol. 409, 25-32 (1996).
  8. Nakae, S. TNF can contribute to multiple features of ovalbumin-induced allergic inflammation of the airways in mice. J. Allergy Clin. Immunol. 119, 680-686 (2007).
  9. Guth, A. M. Lung environment determines unique phenotype of alveolar macrophages. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 296, L936-L946 (2009).
  10. Kushwah, R., Cao, H., Hu, J. Characterization of pulmonary T cell response to helper-dependent adenoviral vectors following intranasal delivery. J. Immunol. 180, 4098-4108 (2008).
  11. Kushwah, R., Oliver, J. R., Zhang, J., Siminovitch, K. A., Hu, J. Apoptotic dendritic cells induce tolerance in mice through suppression of dendritic cell maturation and induction of antigen-specific regulatory T cells. J. Immunol. 183, 7104-7118 (2009).

Play Video

Cite This Article
Kushwah, R., Hu, J. Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation. J. Vis. Exp. (65), e4014, doi:10.3791/4014 (2012).

View Video