Summary

移植片対宿主病の誘導および<emインビボで></emMHCマッチしたマウスモデルを使用する> T細胞のモニタリング

Published: August 29, 2012
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Summary

マウス骨髄移植は、ヒトにおいて、移植片対宿主病を支配する免疫のメカニズムを研究するために広く使われているテクニックです。 T細胞の人身売買パターンを監視する機能<em生体内で></em>移植片対宿主病の間にT細胞応答の開発や永続化の詳細な分析が可能になります。

Abstract

移植片対宿主病(GVHD)は、血液学的欠陥の様々な根治療法として骨髄移植の広範な使用に制限する障壁となっている。 GVHDはレシピエントに注入された骨髄移植に存在する成熟したアロ反応性T細胞によって引き起こされるとホストの臓器に損傷を与えるされています。しかし、マウスでは、T細胞がGVHDを引き起こすために骨髄接種に追加する必要があります。大規模な作業は、T細胞応答の移植後を特徴づけるために行われているが、生物発光イメージング技術は、生体内で T細胞の人身売買パターンを監視する非侵襲的方法である。

致死照射後、レシピエントマウスをドナーマウスから骨髄細胞と脾細胞を移植されています。 L2G85.B6(恒常的にルシフェラーゼを発現するトランスジェニックマウス)由来のT細胞サブセットは、移植に含まれています。のみ特定のT細胞サブセットを移植することによって、人は、 生体内で特異的なT細胞サブセットを追跡することができますとその場所に基づいて、様々な時点でGVHDの促進に特異的なT細胞サブセットの役割に関する仮説を開発しています。所定の間隔の移植後に、レシピエントマウスXenogen IVIS CCDカメラを用いて結像​​される。光強度は光子強度(赤=高強度、紫=低強度)に基づいて擬似カラー画像を生成するためにリビングImageソフトウェアを用いて定量化することができる。

4-7日後、移植の間、レシピエントマウスはGVHDの臨床徴候を示し始める。クック 1は、レシピエントマウスの毛皮の質感、皮膚の完全性、活動、体重減少、及び姿勢に基づいて、病気の進行を定量するためのスコアリングシステムを開発しました。マウスは毎日の得点、そして、彼らは瀕死状態になったときに安楽死させる。レシピエントマウスは、一般的に20〜30日、移植後瀕死になる。

マウスモデルでは、GVHDの免疫学を研究するための貴重なツールです。選択的に移植特定のT細胞サブセットら各サブセットが果たす役割を慎重に識別のための安値。非侵襲的に生体内で T細胞応答を追跡すると、マウスGVHDモデルに付加価値の別の層を追加します。

Protocol

1。致死的照射使用する照射器と互換性microisolatorケージに10レシピエントマウスまで置きます。 総線量を合計2つの等しい用量(BALB.B受取人のための総投与量= 9 CGY)で照射します。 2回目の照射は、最初の3時間後でなければなりません。注射は、最終照射後4〜6時間の間に発生しなければ。セシウム137のソースまたはRS2、000、照射器のいずれかで照射したマウス。 <li…

Discussion

ここに提示されたマウスでGVHDを誘導するためのプロトコルがマウスGVHDの臨床的に関連のあるモデルを表します。もともとBerger によって確立された1994年に、C57BL / 6はBALB.Bひずみ組み合わせに、MHC-照合され、依存CD4、最も一般的な臨床シナリオ3と非常に類似してCD8 + Tエフェクタ2によって媒介移植片対宿主病(GVHD)で死亡。それは単独でCD8 + T細胞を移植する?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

我々は、その優れた技術サポート、知的入力、および精神的支援先にこれらの研究を動かすことに尽力していたアリスゴーハンとジャオ·チン王の世話になっています。これらの研究は、GAHにNIHの助成金AI036532によってサポートされていました。

Materials

Name of Reagent Company Catalogue Number Comments
RPMI 1640 Invitrogen 12633-012  
Fetal Calf Serum Invitrogen 10439016  
40 μM Cell Strainer BD Biosciences 352340  
CD3e-Biotin Miltenyi Biotech 130-093-021  
Anti-Biotin Microbeads Miltenyi Biotech 130-091-147  
CD8a Microbeads Miltenyi Biotech 130-049-401 Used to deplete CD8 T cells from spleen.
CD8a Purification Antibody Cocktail Miltenyi Biotech 130-095-236 Used to purify CD8 T cells from spleen.
D-Luciferin Caliper Life Sciences 122796  

References

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Cite This Article
Anthony, B. A., Hadley, G. A. Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model. J. Vis. Exp. (66), e3697, doi:10.3791/3697 (2012).

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