Organotypische Slice culturen van embryonale ventrale middenhersenen: Een systeem om Dopaminerge Neuronale Development Study In vitro</em

De muis is een uitstekend model organisme om zoogdieren ontwikkeling van de hersenen als gevolg van de overvloed van de moleculaire en genetische gegevens te bestuderen. Echter, de zich ontwikkelende hersenen van muizen is niet geschikt voor eenvoudige manipulatie en imaging in vivo, omdat de muis embryo is ontoegankelijk en ondoorzichtig. Organotypische slice culturen van embryonale hersenen worden dan ook veel gebruikt om de ontwikkeling van de hersenen van muizen in vitro studie. Ex-vivo manipulatie of het gebruik van transgene muizen kan de modificatie van genexpressie, zodat subpopulaties van neuronale of gliale cellen kunnen worden gelabeld met fluorescerende eiwitten. Het gedrag van gelabelde cellen kunnen dan worden waargenomen met behulp van time-lapse imaging. Time-lapse imaging is bijzonder succesvol geweest voor het bestuderen van cel gedrag dat de ontwikkeling van de hersenschors ten grondslag liggen in de late embryonale fase ^1-2. Embryonale organotypische slice cultuur-systemen in de hersenen regio's buiten de voorhersenen zijn minder goed EstablisHed. Daarom wordt de rijkdom van time-lapse imaging data beschrijven van neuronale cel migratie beperkt tot de voorhersenen ^3,4. Het is nog niet bekend, of de beginselen ontdekt voor de dorsale brein opgaan voor het ventrale hersengebieden. In de ventrale hersenen worden neuronen georganiseerd in neuronale clusters in plaats van lagen en ze hebben vaak ingewikkelde migratie trajecten te ondergaan om hun definitieve standpunt te bereiken. Het ventrale middenhersenen is niet alleen een goed modelsysteem voor ventrale ontwikkeling van de hersenen, maar bevat ook neuronale populaties zoals dopaminerge neuronen die relevant zijn bij de ziekte van processen. Terwijl de functie en de degeneratie van dopaminerge neuronen is onderzocht in detail in de volwassen en de ouder wordende hersenen, is er weinig bekend over het gedrag van deze neuronen tijdens hun differentiatie en migratie fase ^5. We beschrijven hier de generatie van de slice culturen uit de embryonale dag (E) 12.5 muis ventrale middenhersenen. Deze slice cultlen zijn potentieel geschikt voor de bewaking dopaminerge neuron ontwikkeling gedurende een aantal dagen in vitro. We belichten de kritische stappen in het genereren van de hersenen plakjes op deze vroege stadia van de embryonale ontwikkeling en discussiëren over de voorwaarden die nodig zijn voor het behoud van een normale ontwikkeling van dopaminerge neuronen in vitro. Presenteren we ook de resultaten van time lapse imaging experimenten. In deze experimenten werden ventrale mesencephalon voorlopers (inclusief de dopaminerge precursoren) en hun nakomelingen geëtiketteerd een mozaïek wijze met een Cre / loxP gebaseerd induceerbaar lot mapping systeem ^6.