免疫組織化学：ベクターLabsからベクタステインABCキットを用いたパラフィン切片

パラフィン切片の染色 〜からろうを除去するが、各5分間3倍キシレン（フィッシャーX3 S -4）とスライド（用途に応じて毎月変更キシレン、キシレンは毒性があります）。これらの料理に合うように作られたフィッシャーREFから20のスライド08から812 – 1Aとラックの皿とカバーを使用してください。皿あたり200 mlの液体。 次のようにアルコールの勾配を介して水和物（2週間毎に勾配を変更）​​： 2分ごとに100％エタノール（フィッシャー＃A406 – 20）で2倍 2分ごとに95％エタノールで2倍 2分間70％エタノールに1倍 2分間50％エタノールに1倍 2分間30％エタノールに1倍 2分間1XのddH 2 O 5分（DPBS =ダルベッコ改変リン酸はCa 2 +およびMg 2 +との緩衝生理食塩水）のためのDPBSに浸す。 抗原の回復： 電子レンジで予備加熱ナトリウム – クエン酸緩衝液（10mMの、pHは6.5）。 電子レンジで15分間スライドを焼く。スライドは、すべての分をチェックし、Naのクエン酸、必要に応じて追加するように乾かしてはいけません。 室温で冷ます。 H 2は 20分（30％ストック50 mlのDPBSでシグマH – 1009を1.5 ml）のためのDPBSでO 2 1％で内因性ペルオキシダーゼ活性をブロックする。 DPBS 3 × 5分に浸る。 +4℃DPBSでC + 5％ウシ血清アルブミン（BSA）+ 0.1％のNaアジド+ 5％血清で一晩インキュベートすることにより、非特異的部位をブロックする。 注：血清の選択は、染色に使用される抗体が行われた種に依存します。二次抗体は、（ビオチンに結合体化）が行われた種からの血清でブロック。これが利用できない場合は、一次抗体が行われたものとは異なる種からの血清使用。 アビジン/ビオチンブロッキングキット（ベクターラボラトリーズカタログ＃SP – 2001）とビオチンのサイトをブロックする： 15分間アビジンDでインキュベートする。 DPBSで簡単にすすいでください。 15分間ビオチン溶液でインキュベートする。 DPBSで室温で2時間、+ 2％BSA + 0.1％NaAzide +血清2％（ステップをブロッキングと同様）のために一次抗体でインキュベートする。 PBSで3 × 5分に浸る。 DPBSで室温で1時間+ 2％にビオチンを結合させた二次抗体とアジ化ナトリウムBSA + 0.1％+血清2％（ブロッキングのステップのために使われるのと同じ）インキュベートする。 それは使用前に少なくとも30分間を開発する必要があるため、同時にABC試薬を準備します！ （資料を参照してください） 50 mlコニカルチューブに準備します。 15mlのDPBS（無血清、無アジ化）で試薬を3滴、ミックスを追加し、試薬Bとミックスの3滴を追加します。ボトルを強く握ったりしないで、むしろ自分自身で形成するためにドロップを待ちます。 ABCキットステインPK – 6100ベクトルLabsから。 DPBS 3 × 5分に浸る。 室温で30-45分のためのABC試薬でインキュベートする。 DPBS 3 × 5分に浸る。 使用直前にガラスバイアルに5ミリリットルのddH 2 OにおけるDABのペルオキシダーゼ基質（ベクターラボ＃SK – 4100）を準備する（資料を参照してください） バッファーのストック溶液を2滴、ミックス DAB、ミックスの4滴（少し茶色になるはず） 2滴H 2 O 2、ミックス茶色の染色用スライド、時計の上にDAB基質をドロップします。 氷にディップスライド+反応を停止させる水をタップ。 5分間冷たい水道水ですすいでください。 ヘマトキシリン​​（20秒、フィッシャーCS401 – D）との対比と水が出て明らかになるまで水道水ですすいでください。 最大100％エタノール（2分ごと）に30％エタノールで出発アルコールの勾配によって脱水。 キシレン3 × 5分に浸る。 Permountとマウント（フィッシャー＃SP15 – 100）：いくつかのスライド上にセクションの上に置くと、気泡のないカバーとセクションの上にゆっくりと押してください。 〜24時間かかりますれ、完全に乾燥するまで、カバースリップを移動しないでください。