Konzentrationsbestimmung von Nukleinsäuren und Proteinen Mit dem Micro-Volumen Bio-spec Nano-Spektralphotometer
Summary
Diese Mitteilung enthält Daten über die Genauigkeit und Reproduzierbarkeit der BioSpec-nano UV-VIS Spektralphotometer für dsDNA-und Protein-Quantifizierung. Selbst bei extrem kleinen Volumina (1 bis 2 L), ist die Reproduzierbarkeit ausgezeichnet, während die automatische Wisch-Funktion verbessert den Durchsatz und die Ergebnisse in minimaler Verschleppung für genauere Ergebnisse.
Abstract
Nucleic Acid Quantifizierung Verfahren haben sich in den letzten drei Jahrzehnten fortgeschritten. Mehr und mehr verlangen Molekularbiologen konsequent kleinvolumigen Analyse von Nukleinsäure-Proben für ihre Experimente. Die BioSpec-nano bietet eine mögliche Lösung für die Probleme der ungenauen, nicht reproduzierbare Ergebnisse, inhärent aktuellen DNA-Quantifizierung Methoden, über spezialisierte Optik und ein sensibles PDA-Detektor. Die BioSpec-nano hat auch automatisierte Funktionen, so dass Montage, Messung und Reinigung durch das Instrument fertig sind, wodurch langwierige, sich wiederholende und inkonsistent Platzierung der LWL-Element und manuelle Reinigung.
In dieser Studie werden die Daten auf die Quantifizierung von DNA und Protein, sowie Mess-Genauigkeit und Reproduzierbarkeit vorgestellt. Automatisierte Probenvorbereitung Kontakt und schnelle Abtastung ermöglicht die Messung in 3 Sekunden, was zu einer hervorragenden Durchsatz. Die Datenanalyse erfolgt über die integrierten Funktionen der Software durchgeführt. Die Formel zur Berechnung DNA-Konzentration verwendet wird:
Probenkonzentration = DF · (OD260-OD320) · NACF (1)
Wo DF = Probe Verdünnungsfaktor und NACF = Nukleinsäure-Konzentration Faktor.
Die Nukleinsäure-Konzentration Faktor ist in Übereinstimmung mit dem Analyten gewählt 1 gesetzt.
Protein-Konzentration Ergebnisse können als pg / mL oder als mol / L durch Eingabe e280 und dem Molekulargewicht Werte ausgedrückt werden. Wenn Rückstände Werte für Tyr, Trp und Cystein (SS-Bindung) in der e280Calc Registerkarte eingegeben werden, sind die Extinktionskoeffizienten Werte wie e280 berechnet = 5500 x (Trp-Reste) + 1490 x (Tyr-Reste) + 125 x (Cystein SS-Bindung) . Die e280-Wert wird durch die Software für die Berechnung der Konzentration verwendet.
Neben Konzentrationsbestimmung von Nukleinsäuren und Proteinen, kann die BioSpec-nano als ultra micro-Volumen Spektralphotometer für viele andere Analyten oder als Standard-Spektralphotometer mit 5 mm Schichtdicke Zellen verwendet werden.
Protocol
Discussion
Die BioSpec-nano wurde entwickelt, um aktuelle Themen innewohnenden DNA-Quantifizierung Methoden, wie inkonsistente Ergebnisse und mühsame Handarbeit zu lösen. Jede Messung dauert nur 3 Sekunden, so dass ein erfahrener Molekularbiologe ungefähr 3-6 mehrere Proben in einer Minute zu analysieren. Die einzigartige Scheibenwischer-Funktion verbessert nicht nur den Durchsatz der Messung, es entfällt auch die Notwendigkeit für die manuelle Reinigung der Container, die sich in vernachlässigbaren Verschleppung zwischen den Messungen. Darüber hinaus gaben Tests unter Verwendung von nur 2 Tücher für die DNA-Proben mit 1000 ng / ul, Verschleppung von weniger als 2 ng / ul.
Die Verfügbarkeit einer 5 mm Schichtdicke Zelle enthält eine Option zum verdünnen Nukleinsäure-und Protein-Proben analysieren und erweitert den Einsatz dieses Instruments für andere Anwendungen.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| BioSpec-nano | Shimadzu | |||
| Calf Thymus DNA | Sigma Aldrich | |||
| Bovine Serum Albumin | Sigma Aldrich |
References
- Aisubel, F. . Short Protocols in Molecular Biology. , (1999).
- Pace, C. N. How to measure and predict molar absorption coefficient of a protein. Protein Science. 4, 2411-2423 .
