变化在大鼠乳腺形态和患乳腺癌的风险

1。去除腹部的乳腺和准备整装根据IACUC指引安乐死的动物。引脚从它的腿的动物在它的后面，用针或磁带的双腿上表面板，并用乙醇（酒精）擦拭皮肤湿。提起皮肤有点与钳，用锋利的剪刀，开始对＃5乳头和削减对颈部皮肤中线切口。请倒Y切口从中线对的后腿。如果胸部乳腺增生病也将被收集，使＃2乳头对一双前腿之间的中线也是Ÿ切口。 解剖的皮肤倒Y切口一侧打开，用剪刀，暴露腹部＃4乳腺，乳腺是附着在皮肤上。引脚针在表面上板的皮肤，完全暴露腺体。工作的时候一边和腺体。 剖析乳腺免费使用锋利的剪刀和/或手术刀，从近端面积接近乳头和腺体的末端对工作，对动物的脊椎从皮肤。 （这可能需要几分钟，尤其是在一个旧的大鼠。） 立即蔓延到一个适当标记的玻片上（使用适当的永久性记号笔和/或“钻石笔”）的分离腺，并蔓延到原来的大小和形状在原地仔细相应的腺体。载玻片必须大于腺体。之后蔓延到幻灯片上的腺体，它坐在桌子上一段时间，使腺体坚持到幻灯片，但不让它干。 放入包含一罐卡诺固定液（75％冰乙酸，25％的无水乙醇=乙醇）的幻灯片，让它在室温（RT）固定在2天或更长时间的通风柜。幻灯片也可以留在一个较长时期内的固定液。 在室温下1小时，洗净，在70％乙醇的幻灯片。 蒸馏水冲洗，在室温下30分钟。 染色为2天或更长的时间（直到你看到淋巴结染色的胭脂红铝染色*）;看看背面的幻灯片）。 洗涤系列的乙醇，在每1小时：70％ – > 95％ – 100％。最后一次洗涤后，在绝对乙醇在二甲苯中的腺体。让RT通风柜坐至少2天。这最后一步是结算的意义delipidation乳腺，乳腺脂肪垫，并在其后增加透明度。油腻腺体是结算时间是必需的。 安装与使用安装的媒体，如Permount，盖单。干的好让幻灯片（数天）前一个立体显微镜下观察。 *胭脂红铝染色： 将1克朱砂（Sigma公司C1022）和2.5克硫酸铝钾（Sigma公司A7167）在500毫升蒸馏水，煮沸20分钟。调整最终体积500毫升水。过滤和冷藏。解决方案可用于几个月。丢弃时颜色变弱。 2。乳腺整装形态分析乳腺整个坐骑形态是根据以下的终点和乳腺癌的风险相关的结果分析。 乳腺整个PND的21安装（青春期前年龄）： 上皮生长： 从乳头上皮树（毫米）的距离，用一把尺子测量恶变的可能性： TEBs（末端芽），光学显微镜下计数。 TEBs是只有在乳腺上皮树的末端位于最大的球根结构辨证： AB1类（肺泡芽）评分（0-5）。肺泡芽遍布上皮。 AB2型得分（0-5） 光显微镜下取得Wholes坐骑。从AB1和AB2型的得分值增加为最终分化得分。 乳腺整个安装收集的PND 50（后青春期的年龄）： 上皮生长： 从淋巴结上皮树（毫米）的距离，用一把尺子衡量。 从上皮树的一角，脂肪垫的距离，用一把尺子衡量。 恶变的可能性： 数TEBs，光学显微镜下计数辨证： AB1得分（0-5） AB2型得分（0-5） 小叶得分（0-5） 光显微镜下取得Wholes坐骑。分化将评估在两个方面。首先，从AB1，AB2型和小叶的评分值增加最终分化得分。此外，小叶得分和AB1 + AB2得分之间的比例计算。 ABS区分小叶，小叶和ABS之间的比例越高，越有区别的腺体。 3。触诊大鼠乳腺肿瘤的测量及相关乳腺形态要开始此过程中，按住老鼠，抓在背后的手掌整个身体的头部后面用食指和拇指和相反的腋窝下第二个手指。所以它是躺在它的后路，将大鼠和触诊检测到任何乳腺肿瘤;​​扪及肿瘤应该感到像一个“疙瘩”。 接下来，使用一个游标卡尺测量的宽度，长度，高度和肿瘤。计算肿瘤体积，使用椭球体公式，卷=1/6πabc，其中'A'，'B'=宽度=长度，'C'=身高。 手工记录肿瘤的位置和大小在每周的笔记本。这些数据将被转移到电子表格后。 4。代表性的成果乳腺脂肪垫和处理，以wholemount小心剥离将使乳腺的发育状态的评估。当每一步都做得正确，整个乳腺上皮树是清晰可见的脂肪垫内，这使得容易测定TEBs和肺泡芽和小叶的密度计算。在准备wholemounts的失误可能包括解剖，整个脂肪垫，固定不足，和不足，结算失败。 评估将提供乳腺形态结构，目前的数量，可能会引起乳腺肿瘤（TEBs），（肺泡芽和小叶）上皮结构的分化程度，以及增长的措施（导管伸长）的信息。重要的是单独TEBs终端两端的，后者是位于末端的上皮细胞，同样以TEBs，但他们是比TEBs小，不引起恶性肿瘤。也看到终端两端的上皮树内。 图1：代表性的结果做好准备乳腺整装 ，腺体的所有组件已正确解剖和胭脂红染色是最优的。 图2：一个准备不足的乳腺整装代表性的结果，腺体已经正确的解剖（远端部分腺体缺失），一直没有得到很好的拉伸和delipidation还没有完全发生。