Preparação da amostra de microscopia da folha de luz: montagem de embriões de zebrafish vivos para imagens de longo prazo

Published: April 30, 2023

Abstract

Fonte: Icha J., et al. Usando Microscopia de Fluorescência de Folha de Luz para Desenvolvimento de Olhos de Zebrafish image. J. Vis. Exp. (2016).

Este artigo descreve a preparação da amostra para microscopia de fluorescência de folha de luz. Também demonstra um método para montar embriões de zebrafish vivos para imagens de longo prazo, o que permite a gravação de filmes de longo tempo de embriões vivos em condições quase fisiológicas.

Protocol

1. Preparação da amostra Preparando o Mix Agarose 15 min antes de fazer a mistura de agarose, derreta uma alíquota de 1 ml de 1% de ponto de fusão baixo (dissolvida em média E3) em um bloco de aquecimento definido para 70 °C. Uma vez que a agarose esteja completamente derretida, transfira 600 μl em um tubo fresco de 1,5 ml, adicione 250 μl de média E3, 50 μl de 0,4% MS-222 e 25 μl de solução de estoque de contas vórtices.NOTA: Isso faz com que 925 μl…

Materials

Lightsheet Z.1 microscope Carl Zeiss Microscopy
Low melting point agarose Roth 6351.1
Low melting point agarose Sigma A4018 or A9414
Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate (MESAB/ MS-222/Tricaine) Sigma E10521
20 μl (1 mm inner diameter, marked black) capilllaries Brand 701904 sold as spare part for transferpettor
Teflon tip plungers for 20 μl capillarie Brand 701932 sold as spare part for transferpettor

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Cite This Article
Light Sheet Microscopy Sample Preparation: Mounting Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20185, doi: (2023).

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