Light Sheet Microscopy Sample Preparation: Montage von lebenden Zebrafisch-Embryonen für Langzeitaufnahmen

Published: April 30, 2023

Abstract

Quelle: Icha J., et al. Using Light Sheet Fluorescence Microscopy to Image Zebrafish Eye Development. J. Vis. Exp. (2016).

Dieser Artikel beschreibt die Probenvorbereitung für die Lichtbogenfluoreszenzmikroskopie. Es zeigt auch eine Methode, um lebende Zebrafisch-Embryonen für die Langzeitbildgebung zu montieren, die die Aufzeichnung von langzeitzeitlichen Filmen von lebenden Embryonen unter nahezu physiologischen Bedingungen ermöglicht.

Protocol

1. Probenvorbereitung Vorbereitung des Agarose Mix 15 min vor der Herstellung der Agarosemischung, schmelzen Sie ein 1 ml Aliquot von 1% niedrig schmelzendem Schmelzpunkt Agarose (in E3 medium gelöst) in einem Heizblock auf 70 °C eingestellt. Sobald die Agarose vollständig geschmolzen ist, übertragen Sie 600 l in eine frische 1,5 ml-Röhre, fügen Sie 250 l E3-Medium, 50 l 0,4% MS-222 und 25 l Wirbelperlenlagerlösung hinzu.HINWEIS: Dies macht 925 l der Mischun…

Materials

Lightsheet Z.1 microscope Carl Zeiss Microscopy
Low melting point agarose Roth 6351.1
Low melting point agarose Sigma A4018 or A9414
Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate (MESAB/ MS-222/Tricaine) Sigma E10521
20 μl (1 mm inner diameter, marked black) capilllaries Brand 701904 sold as spare part for transferpettor
Teflon tip plungers for 20 μl capillarie Brand 701932 sold as spare part for transferpettor

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Cite This Article
Light Sheet Microscopy Sample Preparation: Mounting Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20185, doi: (2023).

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