Préparation d’échantillons de microscopie à feuilles légères : Montage d’embryons vivants de poisson zèbre pour l’imagerie à long terme

Published: April 30, 2023

Abstract

Source : Icha J., et coll. Utilisant la microscopie de fluorescence de feuille de lumière au développement d’oeil de zebrafish d’image. J. Vis. Exp. (2016).

Cet article décrit la préparation d’échantillon pour la microscopie de fluorescence de feuille de lumière. Il démontre également une méthode pour monter des embryons vivants de poisson zèbre pour l’imagerie à long terme, qui permet l’enregistrement de longs films en accéléré d’embryons vivants dans des conditions quasi physiologiques.

Protocol

1. Préparation de l’échantillon Préparation du mélange Agarose 15 min avant de faire le mélange d’agarose, faire fondre un aliquot de 1 ml d’agarose de point de fusion faible de 1% (dissous dans le milieu E3) dans un bloc chauffant réglé à 70 °C. Une fois que l’agarose est complètement fondue, transférer 600 μl dans un tube frais de 1,5 ml, ajouter 250 μl de milieu E3, 50 μl de 0,4% MS-222 et 25 μl de solution vortexed stock de perles.REMARQUE:</stron…

Materials

Lightsheet Z.1 microscope Carl Zeiss Microscopy
Low melting point agarose Roth 6351.1
Low melting point agarose Sigma A4018 or A9414
Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate (MESAB/ MS-222/Tricaine) Sigma E10521
20 μl (1 mm inner diameter, marked black) capilllaries Brand 701904 sold as spare part for transferpettor
Teflon tip plungers for 20 μl capillarie Brand 701932 sold as spare part for transferpettor

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Cite This Article
Light Sheet Microscopy Sample Preparation: Mounting Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20185, doi: (2023).

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