Optik Tuzak kullanarak Bakteriyel Hücre Bükme Rijitlik Ölçüm
Summary
Biz hücresel bükülme sertliği ölçmek için bir optik tuzak bir kapak kayma yüzeyi bağlı bükme ipliksi bakteri hücreleri için bir protokol mevcut.
Abstract
Ipliksi çubuk şekilli bakteriler bükme sertliği ölçmek için bir protokol geliştirmiştir. Kuvvetleri, optik bir tuzak, bir yüksek yoğunluklu lazer ışını mikroskop objektif lens ile çok küçük bir noktaya odaklanmış oluşan ışık mikroskobik üç boyutlu bahar ile uygulanır. Bir hücre viraj için, öncelikle bir kimyasal işlem görmüş lamel canlı bakteri bağlama. Bu hücreler büyüdükçe, hücrelerin orta lamel bağlı kalır, ancak artan biter bu kısıtlama. Ilaç sefaleksin ile ipliksi büyümeyi teşvik ederek, diğer ucunu bükme güçleri unattached ve duyarlı kalırken hücrenin bir ucundan yüzeye yapışmış olan hücreler tespit edebilmek. Bükme kuvveti sonra büyüyen bir hücre ucu polylysine kaplı boncuk bağlayıcı bir optik tuzak ile uygulanır. Kuvvet ve boncuk yerinden her ikisi de kaydedilir ve hücre eğilme sertliği, bu ilişkinin eğimi.
Protocol
Discussion
Burada sunulan protokol kantitatif bakteri hücrelerinin bükme özellikleri ölçmek için tasarlanmıştır. Deneme kurulum filamentously büyümeye yapılabilir herhangi bir çubuk şekilli hücre uygulanabilir. Biz başarıyla E. bükülme sertliği sitoskeletal filamentler etkileri prob Bu kurulum coli hücrelerinde. Bu aynı teknikle hücre genel eğilme sertliği belirlenmesinde basıncı, hücre duvarı sertliği ve diğer hücre içi bileşenlerinin rollerini değerlendirmek için kullanılabilir.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Mingzhai Sun yüzeylere bağlayıcı hücreleri üzerinde yararlı öneriler kabul etmiş sayılırsınız. Ned Wingreen ve Zemer Gitai değerli tartışmalar için teşekkür ederim. Bu araştırma Ulusal Sağlık hibe P50GM07150 Enstitüleri, Ulusal Bilim Vakfı KARİYER ödül FİZ-0.844.466 ve Alfred P. Sloan Vakfı tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| cephalexin | Sigma | C4895-5G | ||
| polyethylenimine | Sigma | 181978-5G | ||
| polylysine | Sigma | P8920 | ||
| 0.5-μm-diameter polystyrene beads | Bangs Laboratory | PS03N | ||
| Nano-LP Series nanopositioning system | Mad City Labs | NanoLP series | http://www.madcitylabs.com/nanolpseries.html |
References
- Janmey, P. A., McCulloch, C. A. Cell mechanics: integrating cell responses to mechanical stimuli. Annu Rev Biomed Eng. 9, 1-34 (2007).
- Morris, D. M., Jensen, G. J. Toward a biomechanical understanding of whole bacterial cells. Annu Rev Biochem. 77, 583-613 (2008).
