I modelli del mouse di leucomalacia periventricolare

Le procedure dettagliate di creare danni cerebrali neonatali nei topi P6: Postnatale giorno 6 (P6) sono topi anestetizzati con raffreddamento indiretto sul ghiaccio fino al punto di non responsività agli stimoli nocivi (anestesia profonda). Dopo la pulizia della pelle con l'alcol, una incisione mediana ventrale è fatto in parte anteriore del collo. Sotto un microscopio da dissezione, la biforcazione della carotide comune destra si avvicina con delicatezza ritraendo i muscoli omoioideo e sternocleidomastoideo. La fascia attorno alla guaina carotidea viene rimosso e il ramo prossimale interna isolata dal nervo vago e vicine gangli simpatici con un gancio. L'arteria carotide interna viene cauterizzato con una punta di cauterizzare. A seguito di cauterizzazione, l'incisione cutanea viene suturata, e l'animale è tenuto caldo fino a quando completamente sveglio e poi tornò alla diga. Un'ora dopo la legatura, l'animale è posto in una camera sigillata infuso con azoto fino ad un livello del 6,0% si raggiunge O 2. L'animale viene poi esposta a 35 minuti di ipossia. Dopo l'esposizione all'ipossia, recupera il mouse su una piastra elettrica (33 ° C) per 30 minuti e poi viene restituito alla diga. Per la creazione di lesioni cerebrali con ipossia combinato / ischemia e di infezione / infiammazione, l'animale viene quindi iniettato per via intraperitoneale con 0,015 ml di lipopolisaccaride (LPS, 1 mg / kg). Quattro giorni post-hypoxia/ischemia, i topi vengono anestetizzati con raffreddamento indiretto sul ghiaccio fino al punto di non responsività agli stimoli nocivi, poi perfusi con soluzione salina e poi paraformaldeide 4%. Cervelli sono stati rimossi e crioprotetti. Figura 1. Caratterizzazione di lesioni cerebrali nel ipossico / ischemico modello di topo con H & E colorazione. Vi è necrosi focale (frecce) nella materia bianca cerebrale ipsilaterale (A) per la legatura della carotide, rispetto al controlaterale materia cerebrale bianca (B). Necrosi ipsilaterale e microinfarti focali sono osservati nell'ippocampo (C) e il talamo (D) nel cervello con ipsilaterale lesioni della sostanza bianca cerebrale. Risultati Rappresentante e figure: Modelli murini di PVL con ipossia / ischemia e / o infezione / infiammazione si ottengono unilaterale legatura carotidea seguita da esposizione a ipossia e l'iniezione di LPS. Stiamo definendo i modelli del mouse nuovi modelli adatti PVL. Esame neuropatologico di sezioni coronali colorate con ematossilina-and-eosina (H & E) attraverso il proencefalo intero rivela necrosi focali nella materia bianca centrale dell'emisfero cerebrale ipsilaterale alla legatura carotidea (Fig. 1A), con relativo risparmio di neuroni in la corteccia cerebrale sovrastante rispetto al controlaterale materia cerebrale bianca (Fig. 1B). Nella questione focale necrotico bianco, c'è un marcato aumento della cellularità costituita da macrofagi e di astrociti reattivi, come è caratteristica della focale PVL umano. Nel controlaterale materia bianca centrale, i nuclei sono disposti in oligodendrogliali fascicolare-come fagotti, questa architettura è completamente distrutto dalla necrosi focale sul lato omolaterale. Da segnalare, inoltre osservare necrosi ipsilaterale nell'ippocampo (Fig. 1C) e il talamo (microinfarti focale) (Fig. 1D) nel cervello con ipsilaterale lesioni della sostanza bianca cerebrale. Umano anche PVL non si verifica in completo isolamento dall'ambiente accompagnano lesioni della sostanza grigia. Il segno distintivo della PVL è il relativo, anche se non completo, risparmiando della corteccia cerebrale sovrastante la materia bianca feriti – una caratteristica che noi crediamo è presente nei nostri modelli murini. Figura 2. Scala punteggio di 0-5 per la valutazione delle lesioni della sostanza bianca o MBP da O1 in modelli murini di leucomalacia periventricolare. I nostri modelli murini mostrano caratteristiche di PVL, sia a livello fenotipico e molecolare. Abbiamo usato il rilevamento immunocitochimica della proteina basica della mielina (MBP) o O1-antigene per valutare lesioni, hanno stabilito una scala standard da 0 a 5 a segnare il danno sostanza bianca (Fig. 2), e hanno caratterizzato la sostanza bianca patologia (Fig. . 3). Più recentemente, un test non-polarizzato stereological è stato implementato per sostituire il primo metodo semi-quantitativo. Inoltre, per testare gli effetti correlativo di lesioni della sostanza bianca sugli esiti funzionali, abbiamo svolto test comportamentali per la funzione motoria. Abbiamo dimostrato che i topi mostrano deficit motori colpendo P10-21 ipossia seguente / ischemia più LPS in P6. Abbiamo stabilito i criteri di punteggio con una scala di 0-4 per definire la disfunzione arto controlaterale nei topi feriti a P10-21. In genere, i topi normali può scorrazzano in pendenza di 30 ° (punteggio 4) e salire di 45 ° pendenza senza scivolare (punteggio di 3). Topi feriti hanno punteggi più bassi in correlazione con i gradi di lesioni della sostanza bianca. Figura 3. Caratterizzazione di lesioni della sostanza bianca o MBP da O1 colorazione e la struttura della mielina al microscopio elettronico (EM). MBP e la perdita di colorazione O1 spettacolo mielina nella materia bianca cerebrale ipsilaterale alla legatura, rispetto al controlaterale della sostanza bianca. Esame EM mostra assoni mielinizzati in materia bianca cerebrale controlaterale alla legatura e tessuto degenerato in ipsilaterale sostanza bianca. Noi prevediamo che la creazione dei modelli nuovo mouse di PVL ci permetterà di studiare meccanismi specifici di PVL-come lesioni al cervello immaturo. Ci si occuperà patogenesi utilizzando ceppi di topi transgenici per esaminare il ruolo delle singole molecole di interesse e valutare gli obiettivi di neuroprotezione.