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Interrogatorio paralelo del reclutamiento de la serie 2 para la detección de ligandos a escala de GPCR a escala mediante el ensayo PRESTO-Tango
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Parallel Interrogation of β-Arrestin2 Recruitment for Ligand Screening on a GPCR-Wide Scale using PRESTO-Tango Assay
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Interrogatorio paralelo del reclutamiento de la serie 2 para la detección de ligandos a escala de GPCR a escala mediante el ensayo PRESTO-Tango

DOI:
10.3791/60823-v

•

09:03 min

•

March 10, 2020

•

, ,
1Department of Biochemistry, Microbiology and Immunology,University of Ottawa, 2Brain and Mind Research Institute,University of Ottawa

章

  • 00:05Introduction
  • 00:43Primary Screening: Poly-L-Lysine Plate Preparation
  • 01:25Primary Screening: Cell Culture and Plate Seeding
  • 02:22Primary Screening: DNA Plate Preparation and Transfections
  • 03:35Primary Screening: Cell Stimulation and Luminescence Reading
  • 04:26Secondary Screening: Cell Seeding and Transfections
  • 05:59Secondary Screening: Half Log Dose-Curve Drug Plate Preparation and Luminescence Reading
  • 07:16Results: Representative Primary Screening Hit Identification and Secondary Screening Dose-Curve Responses
  • 08:23Conclusion

概要

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Dado que los GPCR son objetivos atractivos para drogarse, el cribado de ligando GPCR es por lo tanto indispensable para la identificación de compuestos de plomo y para estudios de desorfanización. Hacia estos esfuerzos, describimos PRESTO-Tango, una plataforma de recursos de código abierto utilizada para la elaboración simultánea de perfiles de reclutamiento transitorio de é-arrestin2 en aproximadamente 300 GPCRs utilizando un ensayo de reportero basado en TEV.

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GPCRBeta-arrestin 2Presto-Tango AssayParallel InterrogationLigand ScreeningOrphan TargetsG Protein-independentCell SeedingDNA Transfection384-well PlateHTLA Cells

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