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Interrogation parallèle du recrutement d'2-Arrestin2 pour le dépistage de Ligand sur une échelle GPCR-Wide utilisant PRESTO-Tango Assay
JoVE Journal
生化学
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JoVE Journal 生化学
Parallel Interrogation of β-Arrestin2 Recruitment for Ligand Screening on a GPCR-Wide Scale using PRESTO-Tango Assay

Interrogation parallèle du recrutement d'2-Arrestin2 pour le dépistage de Ligand sur une échelle GPCR-Wide utilisant PRESTO-Tango Assay

DOI:

09:03 min

March 10, 2020

, ,

  • 00:05Introduction
  • 00:43Primary Screening: Poly-L-Lysine Plate Preparation
  • 01:25Primary Screening: Cell Culture and Plate Seeding
  • 02:22Primary Screening: DNA Plate Preparation and Transfections
  • 03:35Primary Screening: Cell Stimulation and Luminescence Reading
  • 04:26Secondary Screening: Cell Seeding and Transfections
  • 05:59Secondary Screening: Half Log Dose-Curve Drug Plate Preparation and Luminescence Reading
  • 07:16Results: Representative Primary Screening Hit Identification and Secondary Screening Dose-Curve Responses
  • 08:23Conclusion

概要

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Étant donné que les RPGC sont des cibles médicamenteuses attrayantes, le dépistage du ligand GPCR est donc indispensable pour l’identification des composés de plomb et pour les études de désorphanisation. À l’égard de ces efforts, nous décrivons PRESTO-Tango, une plate-forme de ressources open-source utilisée pour le profilage simultané du recrutement transitoire d’un PGS2 à environ 300 GPCR à l’aide d’un essai de journaliste basé sur TEV.

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