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Approcci genetici e biochimici per<em> In Vivo</em> e<em> In Vitro</em> La valutazione di proteine ​​Oligomerizzazione: Il rianodina Receptor Case Study
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生物学
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JoVE Journal 生物学
Genetic and Biochemical Approaches for In Vivo and In Vitro Assessment of Protein Oligomerization: The Ryanodine Receptor Case Study
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Approcci genetici e biochimici per<em> In Vivo</em> e<em> In Vitro</em> La valutazione di proteine ​​Oligomerizzazione: Il rianodina Receptor Case Study

DOI:
10.3791/54271-v

•

12:43 min

•

July 27, 2016

•

, ,
1Wales Heart Research Institute,Cardiff University School of Medicine, College of Biomedical and Life Sciences

章

  • 00:05標題
  • 01:10Y2H: Yeast Transformation
  • 03:22Y2H: Colony-lift Filter Paper β-Gal Assay
  • 04:29Protein Expression in a Mammalian Cell Line
  • 06:56Co-immunoprecipitation
  • 09:02Chemical Cross-linking
  • 09:46Results: The Ryanodine Receptor Forms Homo-oligomers Within Cells
  • 11:40Conclusion

概要

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Oligomerization of the ryanodine receptor, a homo-tetrameric ion channel mediating Ca2+ release from intracellular stores, is critical for skeletal and cardiac muscle contraction. Here, we present complementary in vivo and in vitro methods to detect protein self-association and determine homo-oligomer stoichiometry.

タグ

Protein OligomerizationRyanodine ReceptorYeast Two-hybridCo-immunoprecipitationChemical Cross-linkingProtein-protein InteractionsHomo-oligomersCardiopathiesCardiac ArrhythmiasSudden DeathAnti-arrhythmic DrugsCompetent Yeast CellsPlasmid DNALithium AcetatePEG SolutionDimethyl SulfoxideMinimal SD Medium Plates

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